越橘红

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第112页（3884字）

一、越橘红的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 乙醇。

1．2 0．1mol／LHCl。

1．3 0．1mol／LNaOH。

1．4 pH3柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液。

1．4．1 0．2mol／LNa₂HPO₄溶液 称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·2H₂O)35．63g(精确至0．0002g)，用蒸馏水定容至1000mL。

1．4．2 0．1mol／LC₆H₈O₇(柠檬酸)溶液 称取柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)21．0g(精确至0．0002g)，用蒸馏水定容至1000mL。

吸取0．2mol／L磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·2H₂O)溶液4．11mL与0．1mol／L(C₆H₈O₇·H₂O)溶液15．89mL，混合即为pH3柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液。

1．5 聚酰胺膜。

2．操作步骤

2．1 溶解性 溶于水和酸性乙醇，不溶于无水乙醇，水溶液透明、无沉淀。

2．2 酸、碱反应 取0．4%浓度的色素水溶液，分别用0．1mol／LHCl、0．1mol／LNaOH调制成不同的pH。溶液色相随pH的变化而变化。在酸性条件下呈红色，在碱性条件下呈橙黄色至紫青色。

2．3 最大吸收峰 取1g样品，用pH3的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲溶液定容至1000mL。此液在波长535nm附近有最大吸收峰。

2．4 薄层层析 选用在聚酰胺膜上展开。

取15mL的75%乙醇溶液，将试样溶于乙醇溶液中至饱和，充分搅拌后静止20min，滤去沉降物，滤液待点样。

取在干燥箱中于80℃烘过的5cm×15cm聚酰胺膜，用玻璃毛细管点样。一张膜上点4～5个点为宜，样点间距离约1cm，点直径约3mm，在同一张膜上，样品点的大小应一致，点样时可用冷风吹干。

展开与观察：将点过样的聚酰膜置盛有甲醇和丁酮(10∶2)的展开剂的展开槽中展开，待50min取出挥干，于灯光下观察，出现五个斑点，三、四斑点有拖尾。

二、越橘红的分光测定

1．试剂和溶液

1．1 pH3柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液。

1．1．1 柠檬酸：分析纯；

1．1．2 磷酸氢二钠：分析纯；

1．1．3 0．2mol／LNa₂HPO₄溶液：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·2H₂O)35．63g(精确至0．0002g)，用蒸馏水定容至1000mL；

1．1．4 0．1mol／L柠檬酸(C₆H₈O₇)溶液：称取柠檬酸(C_6H8O₇·H₂O)21．0g(精确至0．0002g)，用蒸馏水定容至1000mL。

吸取0．2mol／L磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·2H₂O)溶液4．11mL与0．1mol／L柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)溶液15．89mL，混合即为pH3柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液。

2．仪器

721型分光光度计。

3．测定方法

称取样品1g(精确至0．0002g)，用pH3柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液定容至100mL，摇匀后，用721型分光光度计、1cm比色皿，以缓冲液作为空白对照，在最大吸收峰535nm处测定样品溶液的吸光度。

4．分析结果的表述

式中 A——实测样品吸光度

m——样品质量，g——在被测样品浓度1%，1cm光程，最大吸收峰535nm处的吸光度

按标准要求(535nm)≥4

三、食品中越橘红、栀子黄和姜黄的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 聚酰胺粉 60～80目吸附着色剂用；100～140目薄层色谱用。

1．2 海沙 先用水洗去泥，再用1∶10盐酸煮沸15min，用水洗至中性，再用5%氢氧化钠溶液煮沸15min后，用水洗至中性，再于105℃干燥贮于带塞瓶中，备用。

1．3 硅胶G 薄层层析用。

1．4 越橘红溶液 称取越橘红0．1g，加入50%乙醇溶液溶解并稀释至5．0mL。

1．5 姜黄溶液 称取姜黄0．05g，加入50%乙醇溶液溶解，并稀释至5．0mL。

1．6 栀子黄色素液 吸取栀子黄色素液0．1mL，分别加入50%乙醇溶解并稀释至5．0mL。

2．仪器

2．1 恒温水浴。

2．2 玻璃板5cm20cm。

2．3 薄层涂布器 0．3mm。

2．4 展开槽 内长25cm，宽6cm，高4cm。

2．5 微量注射器 10μL、50μL。

3．操作步骤

3．1 样品处理。

3．1．1 汽水：吸取10mL样品入100mL烧杯中，加强驱除二氧化碳。

3．1．2 杨梅汁：吸取10mL样品于100mL烧杯中。

糕点裱花及糕点：称取10g样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品，加30mL石油搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复操作，直至醚层无色，挥干并研细样品，将样品全部转入漏斗中，用乙醇－氨溶液提取着色剂，提取的着色剂置水浴上浓缩至约20mL，立即用1mL1∶10硫酸，1mL10%钨酸钠溶液，使蛋白沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液留用。

3．2 吸附分离 将处理后的溶液加热至70℃，加入0．5～1．0g聚酰胺粉充分搅拌，用20%柠檬酸溶液调至pH4，使色素完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉，将吸附着色剂的聚酰胺粉全部转入漏斗中过滤，先用70℃酸性水200mL分次洗涤，以除去糖等水溶性杂质，再以甲醇∶甲酸(6∶4)解吸越橘红、姜黄、栀子黄，收集解吸液，直至流出液无色为止，此解吸液于水浴上蒸干，用50%乙醇溶解，留作检定越橘红、姜黄、栀子黄用。

3．3 薄层定性。

3．3．1 薄层板的制备：聚酰胺－硅胶板。称取2g硅胶G，1．6g聚酰胺，0．4g可溶性淀粉，加水适量研匀，铺成5cm×20cm的薄层板6块，置室温干燥后，于80℃的烘箱中1h，取出，置干燥器中备用。

3．3．2 展开。

3．3．2．1 展开剂包括：

(1)异丙醇∶甲酸∶水∶乙醇(7∶1∶3∶0．5)。

(2)氯仿∶水∶甲醇∶氨水(11∶1∶7∶1)。

3．3．2．2 展开：在距底边2cm处点上作天然色素分析用的溶液，同时点上越橘红、栀子黄、姜黄的标准液。区分越橘红与栀子黄用展开剂(1)展开，区分姜黄与栀子黄用展开剂(2)展开。

图5－3 越橘红、栀子黄、姜黄薄层色谱