对羟基苯甲酸乙酯

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第307页（6543字）

结构式：

分子式：C₉H₁₀O₃

相对分子质量：166．18

一、对羟基苯甲酸乙酯的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 氢氧化钠 40g／L溶液。

1．2 硫酸 100g／L。

1．3 氯化钡 250g／L。

1．4 氢氧化钠 80g／L溶液。

1．5 硫酸 (1+17)溶液。

1．6 碘 12．7g／L溶液。

2．操作步骤

2．1 取约0．5g样品(准至0．01g)，加10mL氢氧化钠溶液(1．1)煮沸30min，蒸发至约5mL，冷却，加硫酸溶液(1．2)使成酸性，过滤，沉淀用水洗至滤液用氯化钡溶液(1．3)检定不发生浑浊，然后将沉淀物在(105±2)℃干燥1h，按GB617测定熔点为213～217℃。

2．2 取0．5g试样(准至0．01g)，加5mL氢氧化钠溶液(1．4)，置于沸水浴中加热5min，加6mL硫酸溶液(1．5)，冷却，过滤加5mL氢氧化钠(1．4)到滤液中，温热至50℃，然后加5mL碘溶液(1．6)，出现碘仿的臭味，接着生成沉淀。

二、对羟基苯甲酸乙酯含量的测定

1．试剂和溶液

1．1 氢氧化钠 40g／L溶液。

1．2 硫酸 0．5mol／L(1／2H2SO4)标准溶液

1．3 溴百里香酚蓝 0．1%乙醇溶液。

1．4 氢氧化钠 4g／L溶液。

1．5 磷酸盐缓冲液(pH6．5) 称取0．68g无水磷酸二氢钾(准至0．001g)，加13．9mL氢氧化钠溶液(一、1．4)用水稀释至100mL，即可使用。

2．测定方法

称取2g预先在80℃干燥2h后的样品(准至0．0002g)置锥形瓶中，用50mL滴定管加入40mL氢氧化钠溶液(1．1)，缓缓加热至沸回流1h，冷至室温，加5滴溴百里香酚蓝指示液(1．3)，用硫酸标准溶液(1．2)滴定。

另取40mL磷酸缓冲溶液(1．5)加5滴溴百里香酚蓝指示液，作为终点颜色对照液。

同时作空白试验。

3．分析结果的表述

C₉H₁₀O₃质量分数(w)按式(10－12)计算：

式中 V₁——空白消耗硫酸标准溶液的体积，mL

V₂——样品消耗硫酸标准溶液的体积，mL

c——1／2H₂SO₄标准溶液的浓度，mol／L

m——样品质量，g

0．1662——每毫摩C₉H₁₀O₃的质量，g／mmol

4．允许差

取其算术平均值为报告结果，平行测定两个结果之差值不得大于0．2%。

三、食品中对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的测定

(一)气相色谱法

1．原理

样品酸化后，对羟基苯甲酸酯类用乙醚提取浓缩后，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

2．试剂和溶液

本方法所用试剂均为分析纯试剂。

2．1 重蒸乙醚。

2．2 无水乙醇。

2．3 无水硫酸钠。

2．4 饱和氯化钠溶液。

2．5 10g／L碳酸氢钠溶液。

2．6 6mol／LHCl溶液。

2．7 对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准溶液精密称取对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准品各0．050g，溶于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1mg对羟基苯甲酸乙酯、丙酯。

2．8 对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准使用溶液取适量的对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准溶液，用无水乙醇分别稀释成每毫升相当于50μg，100μg，200μg，400μg，600μg，800μg对羟基苯甲酸乙酯、丙酯。

3．仪器

3．1 气相色谱仪 具有氢火焰离子化检测器。

3．2 K—D浓缩器(或旋转蒸发器)。

4．测定方法

4．1 提取纯化 酱油、醋、果汁：称取5g事先均匀化的样品于125mL分液漏斗中，加入1mL6mol／LHCl溶液酸化，加10mL饱和氯化钠溶液，摇匀，分别以75mL，50mL，50mL乙醚提取3次，每次振摇2min，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于250mL分液漏斗中，加10mL饱和氯化钠溶液洗涤1次，再分别以10g／L碳酸氢钠溶液30mL，30mL，30mL洗涤3次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，塞上脱脂棉，加约10g无水硫酸钠于室温放置30min，在K—D浓缩器上浓缩至近干，用吹氮气除去残留溶剂。用1mL无水乙醇定容，供气相色谱测定。

果酱：称取5g事先均匀化样品于100mL具塞试管中，加入1mL6mol／LHCl溶液，10mL饱和氯化钠溶液，摇匀。用50mL，30mL，30mL乙醚提取3次，每次振摇2min，用吸管转移乙醚至250mL分液漏斗中，以下按上述自“加10mL……”起依法操作。

4．2 色谱条件。

色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2．6m，内涂以390SE－30固定液的60～80目ChromosorbWAW DMCS。柱温170℃，进样口、检测器温度220℃；

载气：氮气；

流速：40mL／min。

4．3 测定 进样1μL标准系列中各浓度标准使用液，测定不同浓度对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的峰高。以浓度为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线。同样进样1μL样品溶液，测定峰高与标准曲线比较定量。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中对羟基苯甲酸酯类含量，g／kg

m₁——测定液中对羟基苯甲酸酯类质量，μg

V₁——样品制备液体积，mL

V₂——样品进样体积，mL

m——样品质量

6．色谱图

如图10－5所示。

图10－5 对羟基苯甲酸酯类色相色谱图

1－对羟基苯甲酸甲酯

2－对羟基苯甲酸乙酯

3－对羟基苯甲酸丙酯

4－对羟基苯甲酸丁酯

(二)高效液相色谱法

本方法为FDA测定肉制品中对羟基苯甲酸酯类的方法，也可以测定其他样品。

1．原理

样品中的对羟基苯甲酸酯类，用乙腈提取后，经过滤后进液相色谱仪进行测定，与标准比较定性、定量。

2．试剂和溶液

2．1 乙腈 全玻蒸馏。

2．2 水 经过Milli—Q水纯化系统处理。

2．3 对羟基苯甲酸酯类标准溶液 称取50mg相应的对羟基苯甲酸酯，溶于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀。吸取1．0mL，2．0mL，3．0mL，4．0mL，5．0mL上述溶液，分别放入100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。该系列每毫升分别含对羟基苯甲酸酯5．0μg，10．0μg，15．0μg，20．0μg，25．0μg。

3．仪器

3．1 液相色谱仪 SP公司3500B梯度色谱，附8200紫外检测器。

3．2 Moder72510μL自动进样器。

4．测定方法

4．1 提取 称取约20g的样品，打碎。准确称取2g样品于15mL具塞离心管中，加入5mL乙腈，塞上塞子，振摇30s后，于500r／min离心5min，将上清液转至25mL容量瓶中，重复操作3次，用乙腈稀释至刻度。用1．0μm滤膜过滤，供色谱测定。

4．2 色谱条件。

色谱柱：U－Bondapak C₁₈ 30cm×4．6mm(内径)；

流动相：乙腈+水(45+55)；

流速：1．4mL／min；

检测波长：254nm；

灵敏度：0．16AUFS。

4．3 测定方法 进样10μL标准系列中各浓度标准溶液，以峰高对浓度绘制标准曲线。同时进样10μL样品溶液，与标准曲线比较定性定量。对羟基苯甲酸甲酯、丙酯保留时间约为4．2min、7．6min。

图10－6 对羟基苯甲酸酯类液相色谱图

M－对羟基苯甲酸甲酯

P－对羟基苯甲酸丙酯

5．分析结果的表述

式中 x——样品中对羟基苯甲酸酯类的含量，g／kg

ρ——样品溶液的浓度，μg／mL

m——样品质量，g

25——样品溶液的体积，mL

(三)对羟基苯甲酸酯类的快速测定方法

清凉饮料或成分简单饮料中的对羟基苯甲酸酯类，经离心后直接进样测定。方法简便、快速。

1．原理

饮料中的对羟基苯甲酸酯类，经离心后直接进样测定。与标准比较定性定量。

2．试剂和溶液

2．1 甲醇。

2．2 乙腈。

2．3 磷酸二氢钾。

2．4 对羟基苯甲酸酯类标准溶液 称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯各1．000g，加200mL甲醇溶解，移入1000mL容量瓶中，加去离子水至刻度，混匀。

3．仪器

3．1 高效液相色谱仪 Waters Associate 6000A型泵，U6K型进样器；1202型分光光度计，HP1040－A型光电二极管检测系统。

3．2 离心机。

3．3 Sep-PakC₁₈层析柱。

4．测定方法

4．1 样品制备 取6g饮料于50mL离心管中，以1500r／min离心5min，备用。用2mL甲醇和4mL水相继通过Sep-PakC₁₈柱，准确吸取上清液注入已调整好的层析柱中，流出的液体弃去，最后用3mL甲醇洗脱，洗脱液经滤膜(0．45μm)过滤后，备用。

4．2 色谱条件。

色谱柱：刚性聚苯乙烯－二乙烯苯树酯Chodex RS Pak DS－613〔150mm×60mm(内径〕；

保护柱：RP－18(40mm×3mm)；

流动相：0．05mol／LKH₂PO₄溶液(pH2．65)+乙腈(60+40)，经滤膜(0．45μm)过滤，使用前脱气。流速：1．0mL／min；

检测器：UV，波长230nm。

4．3 测定 将标准溶液和样品制备液各10μL注入色谱仪中，用外标法以峰高对浓度计算各防腐剂含量。

5．说明

本方法添加回收率大于93%，对羟基苯甲酸甲酯、丙酯最低检出限1．0mg／kg。同时能测定山梨酸、苯甲酸。