β－环状糊精

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第394页（2968字）

化学名：β－环状糊精

结构式：

分子式：(C₆H₁₀O₅)₇

相对分子质量：1134．997

一、β－环状糊精的鉴别

1．操作步骤

1．1 称取1g试样，加入100mL水。混匀后取1mL于试管中，加入1滴三氯乙烯，强烈振摇，产生白色沉淀。

1．2 称取1g试样，加入100mL水。混匀后取1mL滴在白瓷板上，加入1滴0．02mol／L碘液，显淡黄色。

二、β－环状糊精的定量

1．原理

用苯酚硫酸法测定试样的总糖量，利用糖化酶只分解直链糊精和低聚糖，而不分解环状糊精的特性，以DNS法(3，5－二硝基水杨酸法)测出糖化酶作用于试样产生的葡萄糖量，总糖与葡萄糖量之差与总糖之比，即为环状糊精的含量。

2．试剂和溶液

2．1 硫酸。

2．2 苯酚 80%水溶液。

2．3 0．2mol／L乙酸－乙酸钠缓冲溶液(pH4．5) 吸取11．43mL冰乙酸定容为1000mL，成为0．2mol／L浓度的乙酸溶液。称取27．2g乙酸钠或16．4g无水乙酸钠溶解定容为1000mL，成为0．2mol／L浓度的乙酸钠溶液，以乙酸溶液∶乙酸钠溶液=5．7：4．3(体积比)的比例混合即成，上述缓冲溶液应以酸度计校正pH。

2．4 葡萄糖淀粉酶溶液 配制根霉葡萄糖淀粉酶(实验室用)溶液，酶活力为4U／mL，用时配制，可放冰箱4℃保存，保存期不超过3天。

2．5 3，5－二硝基水杨酸溶液 称取3，5－二硝基水杨酸12．6g，酒石酸钾钠364g，重蒸苯酚10g，氢氧化钠41．92g，亚硫酸氢钠10g，混合加热溶解后定容为2000mL；暗处保存一星期，滤纸过滤备用。此溶液简称DNS溶液。

2．6 葡萄糖标准溶液 称取0．5000g葡萄糖，用水溶解，定容至500mL，成为1000μg／mL的葡萄糖标准溶液；吸取10mL上述标准溶液，定容至100mL，即成100μg／mL的葡萄糖标准溶液。

3．仪器

3．1 分光光度计。

3．2 微量注射器 50μL。

3．3 秒表。

3．4 超级恒温水浴。

4．测定方法

4．1 葡萄糖的测定。

4．1．1 DNS法葡萄糖标准曲线的制作，按表12－1所示在试管中配制反应液。

表12－1

将上述反应液置于沸水浴中反应5min后取出，冷却至室温。在分光光度计上用0．5cm比色杯，在波长540nm处比色，记录吸光度，以葡萄糖含量为横坐标，消光值为纵坐标，绘制标准曲线。

4．1．2 试样中酶解产生的葡萄糖量的测定：称取1．000g试样，溶解定容至100mL，吸取1mL该试样液，加入0．2mol／L乙酸－乙酸钠缓冲液(pH4．5)1mL，再加入葡萄糖淀粉酶溶液0．5mL，置于50℃超级恒温水浴中反应30min。反应终止时，加入DNS溶液2．5mL，再置于沸水浴中5min后取出，冷至室温，按4．1．1测定消化值，空白用1mL水代替试样液。根据试样的吸光度查对标准曲线，得出比色液含葡萄糖量，根据式(12－8)求出1g试样中酶解产生的葡萄糖量m(g)。

4．1．3 分析结果的表述：

式中 m——1g试样中酶解产生的葡萄糖量，g

m₁——在标准曲线上查得的数值，μg

4．2 总糖的测定。

4．2．1 苯酚硫酸法葡萄糖标准曲线的制作，按表12－2所示在试管中配制反应液。

表12－2

注：将表12－2中三种溶液混匀后再加入硫酸。加硫酸时，应将移液管正对液面，直冲而下，以移液管壁上附留的酸液滴下5滴为准。

待上述反应液冷却至室温后，在分光光度计上用0．5cm的比色杯，在490nm波长处比色，记录吸光度，以葡萄糖含量为横坐标，消光值为纵坐标，绘制标准曲线。

4．2．2 试样的总糖测定：将4．1．2的试样液再稀释100倍，制成100μg／mL的试样液，吸取1mL该试样液，加1mL水，50mL苯酚水溶液，充分摇匀后，再加入5mL硫酸，反应后冷却至室温，按4．2．1测定吸光度。

空白用2mL水代替试样液。

4．2．3 分析结果的表述

根据比色液的吸光度查对标准曲线，得出比色液含总糖量。

根据式(12－9)求出1g试样中的总糖量m(以葡萄糖计，g)。

式中 m——1g试样中的总糖量(以葡萄糖计)，g

m₁——在标准曲线上查得的数值，μg 4．3 计算。

式中 x——β－环状糊精质量分数(总糖中)，%

m₁——1g试样中酶解产生的葡萄糖量，g

m₂——1g试样中的总糖量(以葡萄糖计)，g