甜味剂的测定
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《焙烤工业实用手册》第616页（5220字）
(一)糖精钠的测定——紫外分光光度法
1．原理
样品经处理后，在酸性条件下，用乙醚提取试样中的糖精，经薄层分离，溶于碳酸氢钠溶液，于270nm处测吸光度。与标准比较，定量。
2．试剂
(1)2%碳酸氢钠溶液。
(2)糖精钠标准液A：准确称取0．0851g经120℃干燥4h的糖精钠于100mL容量瓶中，用2%碳酸氢钠溶液溶解定容。此标准液每毫升含糖精钠1mg。
糖精钠标准液B：准确称取0．0851g经120℃干燥4h的糖精钠，用95%乙醇溶液定容100mL。此溶液每毫升相当于1mg糖精钠。
(3)无水乙醇及95%乙醇。
(4)乙醚(不含过氧化物)。
(5)正丁醇∶氨水∶无水乙醇(7∶1∶2)。
(6)异丙醇∶氨水∶无水乙醇(7∶1∶2)。
(7)0．04%溴甲酚紫：0．04g溴甲酚紫溶于100mL50%乙醇溶液，用氢氧化钠(4g／L)调pH至8。
(8)无水硫酸钠。
(9)聚酰胺粉：200目。
(10)10%的硫酸铜。
(11)4%氢氧化钠。
(12)1∶1盐酸：取100mL盐酸加水稀释至200mL。
3．仪器
(1)紫外分光光度计。
(2)玻璃喷雾器。
(3)微量注射器。
(4)紫外光灯：波长253．7nm。
(5)薄层板：10cm×20cm或20cm×20cm。
(6)展开槽。
4．测定方法
(1)样品提取：含蛋白质、脂肪、淀粉多的食品，如面包、糕点、饼干等，称取捣碎、混匀的样品25．0g置于透析膜内(市售玻璃纸)，置于大小适当的小烧杯内。加50mL、 0．02mol／L氢氧化钠于透析膜内，充分混合，使试样成糊状，将玻璃纸上口扎紧，放入盛有200mL 0．02mol／L氢氧化钠的烧杯中，盖上表皿，透析过夜。
量取125mL透析液(相当于12．5g样品)，加约0．4mL 1∶1盐酸，使成中性，加20mL10%硫酸铜混匀，加4．4mL 4%氢氧化钠，混匀，静置30min，过滤。取120mL滤液(相当于10g试样)，置250mL分液漏斗中，加2mL6mol／L盐酸酸化，用30、20、20mL乙醚分3次提取，合并乙醚提取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加2．0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。
(2)薄层板的制备：聚酰胺薄层板：称取1．6g聚酰胺，加0．4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3～5min，即涂成0．25～0．3mm厚的10cm×20cm薄层板，室温下干燥后，在80℃下干燥1h。置于干燥器内备用。
(3)点样：在薄层板下端2cm处中间，用微量注射器点样，将200～400μL样液点成一横条状，条的右端1．5cm处，点10μL糖精钠标准溶液B，使成一小圆点。
(4)展开：将点好的薄层板放入盛有展开剂2(16)⑤或2(16)⑥的展开槽中，展开剂液层约0．5cm，并预先已达到饱和状态。展开至10cm，取出薄层板，挥干在紫外灯下，观察糖精钠的荧光条状斑，连同聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块与样品条状大小相同的空白薄层板，置于另一烧杯中做对照，各加5．0mL2%碳酸氢钠，于50℃水浴中加热助溶，移入10mL离心管中，离心分离(3000r／min)，取上清液备用。
(5)标准曲线制备：吸取0．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL糖精钠标准溶液A，分别置于100mL容量瓶中，用2%碳酸氢钠溶液定容(每毫升分别含糖精钠0．0、0．020、0．040、0．060、0．080、0．10mg)。于270nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
(6)试样测定：将经薄层分离的样品离心液及试剂空白液于270nm处测定吸光度，从标准曲线中查出相应的浓度。
5．计算
式中 c1——试样溶液中糖精钠含量(mg／mL)；
c0——空白溶液中糖精钠含量(mg／mL)；
V1——样品处理中残留物加入乙醇后的体积(mL)；
V2——点样用样品乙醇溶液的体积(mL)；
V3——溶解刮下的糖精钠时所用2%碳酸氢钠溶液体积(mL)；
m——样品质量(g)。
6．注意事项
喷显色剂后，薄层板的底色以淡蓝色为宜，若酸度太大底色显黄色，则不易分辨。
(二)环己基氨基磺酸钠的测定——薄层层析法
1．原理
样品经酸化后，用乙醚提取，将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸的比移值及显色斑点深浅，与标准比较进行定性、概略定量。
样品中含0．1g／kg环己基氨基磺酸钠即可检出。最低检测量为3～4μg环己基氨基磺酸钠。
2．试剂
除另有规定外，所用的试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。
(1)异丙醇。
(2)正丁醇。
(3)石油醚：沸程30～60℃。
(4)乙醚(不含过氧化物)。
(5)氢氧化胺。
(6)无水乙醇。
(7)氯化钠。
(8)硫酸钠。
(9)盐酸(6mol／L)：取50mL盐酸加到少量水中，再用水稀释至100mL。
(10)聚酰胺粉(尼龙－6)：200目。
(11)环己基氨基磺酸标准溶液：精密称取0．0200g环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg环己基氨基磺酸，2周后重新配制(环己基氨基磺酸的熔点：169～170℃)。
(12)展开剂
①正丁醇∶浓氨水∶无水乙醇(20∶1∶1)
②异丙醇∶浓氨水∶无水乙醇(20∶1∶1)
(13)显色剂：称取0．040g溴甲酚紫溶于100mL 50%乙醇溶液，用1．2mL 0．4%氢氧化钠溶液调pH至8。
3．仪器
(1)吹风机。
(2)层析缸。
(3)玻璃桥：5cm×20cm。
(4)微量注射器：10μL。
(5)玻璃喷雾器。
4．操作步骤
(1)样品提取：称取2．5g糕点样品，研碎，置于25mL带塞量筒中，用石油醚提取3次，每次20mL，每次振摇3min，弃去石油醚让样品挥干后在通风橱中不断搅拌样品，以除去石油醚，加入0．5mL盐酸(6mol／L)酸化，再加约1g氯化钠，用15、10mL乙醚提取2次，每次振摇1min静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。吸取10．0mL乙醚提取液分2次置于10mL带塞离心管中，在约40℃水浴上挥发至干，加入0．1mL无水乙醇溶解残渣，备用。
(2)测定：聚酰胺粉板的制备：称取4g聚酰胺粉，加1．0g可溶性淀粉，加约14mL水研磨均匀合适为止，立即放入涂布器内制成面积为5cm×20cm，厚度为0．3mm的薄层板6块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存、备用。
点样：薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器于板中间点4μL样品液，两侧各点2、3μL环己基氨基磺酸标准液。
展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂①或②的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm以上时，取出在空气中挥干，喷显色剂其斑点成黄色，背景为蓝色。样品中环己基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量(用展开剂时，环己基氨基磺酸的比移值约为0．47，山梨酸0．73，苯甲酸0．61，糖精0．31)。
5．计算
式中 x——样品中环己基氨基磺酸钠的含量(g／kg或g／L)；
m——样品质量(g)；
A——样品点相当于环己基氨基磺酸的质量(mg)；
V1——加入无水乙醇的体积(mL)；
V2——测定时点样的体积(mL)；
10——测定时吸取乙醚提取液的体积(mL)；
25——样品乙醚提取液总体积(mL)；
1．12——1．00g环己基氨基磺酸相当环己基氨基磺酸钠的质量(g)。
6．精密度
重复测定变异系数≤28%。
本方法可以同时测定山梨酸、苹果酸、糖精等成分。