金黄色葡萄球菌的检验

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《焙烤工业实用手册》第638页（1663字）

1．培养基和试剂

(1)胰酪胨大豆肉汤：按本节九 (三)15规定。

(2)7．5%氯化钠肉汤：按本节九 (三)17规定。

(3)血琼脂平板：按本节九 (三)2规定。

(4)Baird-Parker氏培养基：按本节九 (三)16规定。

(5)肉浸液肉汤：按本节九 (三)1规定。

(6)灭菌盐水。

(7)兔血浆：按本节九 (三)19规定。

2．检验程序

金黄色葡萄球菌检验程序见图4－2－12。

图4－2－12 金黄色葡萄球菌检验程序

3．操作步骤

(1)增菌培养法：称取25g固体样品或吸取25mL液体样品，加入225mL灭菌生理盐水，固体样品需研磨或置均质器中制成混悬液。

增菌及分离培养：吸取5mL上述混悬液，接种于7．5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，置36℃±1℃温箱培养24h，转种血平板和Baird-Parker平板，36℃±1℃培养24h，挑取金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

形态：本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽孢，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径为0．5～10μm。

在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，也有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈，接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。

血浆凝固酶试验：吸取1∶4新鲜兔血浆0．5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0．51mL，振摇均匀，放36℃±1℃恒温箱或水浴内每小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为为阳性结果，同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。

(2)直接计数方法：吸取上述1∶10混悬液，进行10倍递次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL，分别加入三块Baird-Parker平板，每个平板接种量分别为0．3、0．3、0．4mL，然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分不被吸收，可将平板放在36℃±1℃恒温箱1h，等水分蒸发后反转平皿置36℃±1℃温箱培养。

在3个平板上点数周围有混浊带的黑色菌落，并从中任选5个菌落，分别接种血平板，36℃±1℃，24h培养后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养法。

菌落计数：将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。