乳酸链球菌素

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第335页（3163字）

别名：乳酸链球菌肽

结构式：

注：Abu=α-aminobutyric acid

Dha=dehydroatanine

Dhb=dehydrobutyrine

分子式：C₁₄₃H₂₃₈O₃₇N₄₂S₇

相对分子质量：3348

一、乳酸链球菌素的鉴别

(一)溶解性

1．含有40000单位／mg的经纯化乳链菌肽制剂

表10－1

2．乳链菌肽浓缩物

因有变性蛋白的存在，在水中形成云雾状的悬浮物，但乳链菌肽组分仍表现出和经纯化物质相同的特性。

(二)与其他抗生素的鉴别

在食品提取物中鉴别乳链菌肽和其他常见抗生素：在食品中对乳链菌肽微生物学分析不是特异性的，其他食品中的抗生素可对它产生干扰。在乳链菌肽的前处理中，食品样品经酸化、煮沸以使乳链菌肽进入水相。接着含有乳链菌肽的提取物被碱化、加热，使得乳链菌肽失活，以获得适宜的不含乳链菌肽的试液，用于乳链菌肽标准的检测。其他抗生素在酸碱条件失活与否是考虑此种抗生素在乳链菌肽分析中能否造成干扰的一个重要因素。

(1)添加了各种抗生素的经加工乳酪悬浊液被用盐酸调至pH2．0，煮沸5min。在经酸化的悬浊液中抗生素的活性在煮沸前后分别用对M．Flavus的扩散性分析测得。表10－2给出了在pH2．0下，此种处理所造成的活性损失的百分率。

表10－2

(2)添加5mol／LNaOH溶液于乳酪悬浊液(1)，调节pH至11．0，63℃加热30min。随后冷却试液，用盐酸调节pH至2．0。处理前后检测抗生素活性，活性损失百分率如表10－3所示。

表10－3

泰乐霉素、多粘菌素、短杆菌肽、杆菌肽新生霉素和红霉素与乳链菌肽在酸碱条件下处理活性损失情况类似。从以上(1)和(2)的结果可知，泰乐霉素和多粘菌素B会对在食品中测定乳链菌肽造成干扰。已知产乳链菌肽的乳链球菌菌株可以在含相当高浓度抗生素的环境下生长，但此菌株又对大量的其他抗生素敏感，这样就很容易对此菌株进行区分了。

敏感性实验 将含有系列稀释抗生素的灭菌石蕊牛奶中接种入0．1%过夜培养的乳链球菌NCIB8586牛奶培养物。经30℃、18h培养可得出特定抗生素对此菌株的最低抑制浓度(MIC)。结果如表10－4所示。

表10－4 乳链球菌对抗生素的敏感性

二、乳酸链球菌素的含量测定

(一)乳链菌肽浓缩物中氯化钠含量的测定

1．试剂和溶液

1．1 80%乙醇(体积分数)。

1．2 硝酸 分析纯。

1．3 0．1mol／LAgNO₃溶液。

1．4 饱和硫酸亚铁铵溶液。

1．5 0．1mol／LNH₄CNS溶液。

2．测定方法

精确称取5g被试材料，用80%乙醇转移到100mL容量瓶中，用80%乙醇定容至50mL。充分振荡使不溶物混匀。加入1mL硝酸，并加入过量的0．1mol／LAgNO₃溶液，用乙醇稀释至100mL。将混合物1800r／min离心5min，吸取50mL上清液于300mL烧瓶中，加入2mL饱和硫酸亚铁铵溶液及2mL硝酸，用0．1mol／LNH₄CNS滴定至亮棕色。

3．分析结果的表述

NaCl(g)=(消耗的0．1mol／LAgNO₃毫升数÷2－消耗的NH₄CNS毫升数)×0．005844(10－29)

(二)乳酸链球菌素浓缩物测定

1．被试菌株的制备

乳酪链球菌 将灭菌牛奶中培养的IP5(NCDO495)按照Friedman and Epstein提出的方法(J．Gen．Microbiol．5∶830，1951)转移一环至一瓶(Mc cartney瓶)的已灭菌石蕊牛奶中，30℃培养。检测用的培养物是将24h培养的已接种灭菌牛奶，按照2%接种量接入石蕊牛奶，30℃水浴培养1．5h，随后立即用于检测。

2．标准溶液的制备

制备样品贮备液所用样品的重量应使贮备液含乳链菌肽的量与相应的标准贮备液的量相当，即贮备液所含乳链菌肽和相应的标准贮备液的量相当，即贮备液所含乳链菌肽和相同浓度样品贮备液预期的乳链菌肽含量应大致相等。样品贮备液用0．02mol／L盐酸稀释，直至每毫升乳链菌肽的含量大约为50单位。

3．刃天青溶液的制备

使用前用蒸馏水配制0．0125%的刃天青溶液。

4．测定方法

向两排各10支6in×5／8in^*的试管中分别加入乳链菌肽浓度为50单位／mL的样品和标准溶液0．60mL，0．55mL，0．50mL，0．45mL，0．41mL，0．38mL，0．31mL，0．28mL，0．26mL，再向每管中加入4．6mL已接种牛奶，30℃水浴放置15min。然后用冰水浴冷却，加入1mL刃天青溶液。摇匀后在放置于30℃水浴中3～5min。

试管检测时放于暗室，于2×20Wosram“自然”荧光灯下进行。样品管中颜色变化最明显(如从蓝色变为紫色)的为最高乳链菌肽浓度，从标准管中找出对应颜色的一管，依次找出接下来两个低浓度样品和标准的对应管。因为标准管中含有已知量的乳链菌肽，样品溶液中的乳链菌肽浓度也就可以据此计算出来，所得三个结果进行平均即为最终结果。