D－山梨糖醇
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第369页（6932字）
结构式：
分子式：C6H1406
相对分子质量：182．17
一、山梨糖醇的鉴别
1．试剂和溶液
1．1 80g／L硫酸亚铁。
1．2 氢氧化钠 200g／L。
1．3 邻苯二酚 100g／L。
1．4 硫酸。
2．操作步骤
2．1 取样品1mL，加入硫酸亚铁溶液2mL及氢氧化钠1mL，溶液呈绿色，不浑浊。
2．2 取样品1mL溶于70mL水中，取其1mL，加入邻苯二酚溶液1mL，充分混合后，再加硫酸2mL，液体立即呈红色。
二、山梨糖醇的含量测定
1．试剂和溶液
1．1 20g／L高碘酸钾。
1．2 硫酸。
1．3 碘化钾。
1．4 硫代硫酸钠 0．1mol／LNa2S2O3标准溶液，按GB601配制与标定。
1．5 淀粉 0．5%指示液，按GB603配制。
2．测定方法
称取试样1g(称准至0．0002g)，加水溶解于500mL容量瓶中，并稀释至刻度，量取10mL，加高碘酸钾溶液5mL，加硫酸1mL，在水浴上加热15min，冷却后，加碘化钾2．5g，充分混合后置暗冷处5min，用硫代硫酸钠标准溶液滴定，接近终点时，加淀粉指示剂5mL，继续滴定至溶液蓝色消失。同时做空白试验。
分析结果的表述
山梨糖醇(C6H1406)的质量分数(w)按式(11－12)计算：
式中 V0——空白试验所消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，mL
V——试样所消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，mL
c——Na2S2O3标准溶液浓度，mol／L
m——试样的质量，g
0．01822——每毫摩C6H14O6的质量，g／mmol
三、食品中山梨糖醇的测定
(一)山梨糖醇脱氢酶法
1．原理
山梨糖醇
果糖+NADH+H+
上式反应几乎完全向右反应，生成的NADH的量与山梨糖醇的量相对应。在波长340nm处的吸光度随着NADH量的增加而增加。
2．试剂和溶液
2．1 高碘酸钠 分析纯。
2．2 山梨糖醇脱氢酶(SDH) 市售试剂；从羊的肝脏中得到的物质是约25U／mg蛋白质冻结干燥物，在4℃干燥保存。
2．3 山梨糖醇脱氢酶溶液 称取SDH24mg(酶蛋白4mg)，溶于1mL水中，此液在4℃保存至少可稳定2周，冷冻保存至少可稳定4周。
2．4 烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸(NDA) 生化制剂。
2．5 吡咯啉酸钠 分析纯。
2．6 聚酰胺粉 市售。
2．7 聚乙烯吡咯烷酮 分析纯。
2．8 磷酸缓冲液 吡咯啉酸0．1mol／L溶液(pH9．5)。4．46g吡咯啉酸钠加80mL水溶解，用约2mL1mol／LHCl调节pH9．5，加水100mL。此液在4℃下保存时，可稳定1年。
2．9 NAD溶液 约30mmol／L烟腺胺腺嘌呤二核苷酸的溶液，即NAD40mg，加2mL溶解，在4℃保存至少可稳定4周左右。
3．测定方法
3．1 检液的制备。
3．1．1 一般的液体食品：准确称取10g以下约含20～400mgD－山梨糖醇的样品。如果样品透明、无色或即使有色而颜色较淡时，加水成100mL，作为样品溶液。如样品混浊，则加50～70mL水过滤，用水洗残渣，合并滤液和洗液，加水成100mL作为样品溶液。样品着色显着时，加30mL水，然后加0．1g聚酰胺粉或聚乙烯吡烷酮，激烈振荡1min，过滤，用同量水洗涤残渣，合并滤液和洗液，加水成100mL作为样品溶液。准确吸取样品液10mL，加水成100mL作为检液。
3．1．2 含酒精的饮料：准确称取约25g样品，在水浴上浓缩到总体积的1／3，加约15mL水后，加面包酵母2g，放置过夜。将此液用10mL水定量地移入离心管中，离心分离，取上清液，然后向残渣中加10mL水充分搅拌，再进行离心分离。合并2次上清液，加入10mL预先冰冷的1mol／LHClO4，然后加2mol／LNaOH调节pH为7，将此液用冰冷却20min，过滤，残渣用冰冷水洗涤，合并滤液与洗液，加水成100mL作为检液。
3．1．3 水溶性食品：一般准确称取10g以下的约含D－山梨糖醇20～400mg样品，加50mL水，于60℃水浴上溶解，然后冷却至室温。将此液过滤，用水洗涤残渣，并将滤液和洗液合并，准确加水成100mL，作为样品溶液。准确吸取样品溶液10mL，加水成100mL，此液作为检液。
3．1．4 固体食品：一般准确称取10g以下约含D－山梨糖醇20～400mg的样品。对不含脂肪和蛋白质的样品可直接加水500mL，加温至60℃均质后，过滤，残渣用20～30mL水分数次洗涤，合并滤液和洗液，加水成100mL，作为样品溶液。含脂肪的样品，加50mL水，时时振摇，在70～80℃水浴上加温，然后均质，再于冰箱中放置20min，过滤，用20～30mL冷水分数次洗涤残渣，滤液与洗液合并，加水准确成100mL，作为样品溶液。含蛋白质的样品，加水20mL，在60℃水浴上加温后均质。然后过滤，残渣用10～20mL水分数次洗涤，合并滤液与洗液，再加入与此同体积的1mol／LHClO4，冰冷后离心分离，取上清液，残渣加入10mL水，充分搅拌后离心分离，取上清液。合并两次上清液，用1mol／LNaOH溶液中和，加水准确成100mL，作为样品溶液。准确吸取10mL样品溶液，加水准确成100mL，此液作为检液。
3．2 标准液的制备 准确称量1gD－山梨糖醇，加水溶解，准确稀释至500mL，作为标准液(此液每毫升相当于D－山梨醇2×Fmg)。再准确吸取标准液10mL，加50mL0．3%高碘酸钠溶液，加1mL硫酸在水浴上加热15min，冷却后加2．5g碘化钾，充分振摇后，于暗处放置5min，游离的碘用硫代硫酸钠溶液滴定(指示剂为淀粉溶液)。同时用同样的方法做一空白试验，从试验滴定值和空白值之差来计算标准液的效价(F)〔1〕。
1mL0．1mol／L硫代硫酸钠相当于1．822mgC6H14O6。
准确吸取标准液1mL，5mL，10mL，15mL，20mL分别加水100mL，作为标准曲线用标准液(1mL分别相当于D－山梨糖醇20×Fμg，100×Fμg，200×Fμg，300×Fμg，400×Fμg)。
3．3 测定。
3．3．1 测定条件：用分光光度计，在波长340nm处，测定其吸光度。
3．3．2测定：准备2个1cm比色杯作为A和B，向A、B中分别准确加入2．5mL磷酸缓冲液和0．1mLNAD溶液，准确向A杯中加入0．2mL检液，向B杯中加入0．2mL水，混合，放置5min。A作为样品测定液，B作为空白测定液。
将样品测定液和空白测定液分别以水作为参比，在波长340nm处测定EA和EB。分别向A、B杯中各准确加入0．05mL山梨糖醇脱氢酶溶液，混合，放置1h，然后按同样条件测定吸光度E′A和E′B。
求EA和E′A的差△EA，EB和E′B的差△EB，然后计算△EA和△EB之差△ET。
3．3．3 标准曲线：分别准确取标准曲线用标准液0．2mL，代替3．3．2测定中的检液，分别加到比色杯S1、S2……S5中，以下操作、计算同3．3．2。求出△Es1、△Es2、……△Es5，绘制标准曲线。
3．3．4 定量：用检液的△ET从标准曲线上求出检液中D－山梨糖醇的浓度(μg／mL)。
4．分析结果的表述
按式(11－23)计算样品中的D－山梨糖醇的质量分数(w)。
式中 ρρ——检液中的 D－山梨糖醇的浓度，μg／mL
V1——样品溶液全量，mL
V2——用于制备检液的样品溶液量，mL
V3——检液量，mL
m——取样量，g
(二)气相色谱法
1．原理
用水或乙醇溶液(80%)从样品中提取糖类，用减压浓缩方法将水分全部除去后，制备山梨糖醇衍生物。制备衍生物有TMS和乙酰化两种方法，然后进行气相色谱分析，但TMS化法与甘露糖醇的衍生物分离效果不好，本法用乙酰化法与甘露糖醇的衍生物能完全分开。
2．试剂和溶液
2．1 丙酮。
2．2 乙醚。
2．3 木糖醇。
2．4 内标液 木糖醇在60℃减压干燥后称取400mg，加蒸馏水溶解成100mL。
2．5 吡啶 分析纯。
2．6 无水吡啶 向吡啶中加入氢氧化钠结晶。
2．7 无水硫酸钠 分析纯。
3．测定方法
3．1 样品溶液的制备。
3．1．1 糖质食品：一般准确称取20g以下约含山梨糖醇0．2～0．8g样品，加水50mL，放置过夜，过滤，向残渣中加50mL温水，加热搅拌，然后过滤，合并全部滤液，准确加水成200mL，作为样品溶液。
3．1．2 蛋白性食品：一般准确称取20g以下约含D－山梨糖醇0．2～0．8g的样品，加50mL乙醇(80%)，接上冷凝管，加热回流，然后过滤，残渣加50mL乙醇，同样操作后，过滤，合并全部滤液，准确加入乙醇(80%)至200mL，作为样品溶液。
3．1．3 油脂食品：一般准确称取20g以下含D－山梨糖醇0．2～0．8g的样品，加100mL正己烷，激烈振荡，用倾斜法除去正己烷层残渣，加100mL正己烷，用同样方法反复操作。残渣在水浴上加热，除去正己烷，以下按3．1．2同样操作，此液为样品溶液。
3．2 检液的制备 准确吸取样品溶液10mL，放入50mL浓缩器中，准确加入5mL内标液，在60℃水浴上减压浓缩，除去水分，再进一步于60℃水浴上进行减压干燥30～60min，然后加入14mL无水吡啶和7mL无水乙醇，在60～70℃水浴上激烈振摇，使残渣溶解，放置过夜。加水20mL后，用10mL水定量转移到分液漏斗中，用50mL、30mL、30mL乙醚分3次萃取，合并全部乙醚层，用20mLo．1mol／L(
H2SO4)洗2次，再用20mL水洗1次，乙醚层加入无水硫酸钠，放置1h。将此液过滤，残渣用50mL乙醚分数次洗涤，将滤液和洗液合并于圆底烧瓶中，减压浓缩除去乙醚，向残渣中加丙酮使其溶解，准确加至10mL，作为检液。
3．3 标准液的制备 山梨糖醇在60℃减压干燥后，准确称取400mg，加水溶解成100mL，作为标准液。分别取此液0、2．5mL、5mL、7．5mL、10mL，加入50mL浓缩器中，然后分别准确加入内标液5mL，以下与“3．2检液的制备”同样操作，作为标准曲线用标准液(1mL分别相当于D－山梨糖醇0，1mg，2mg，3mg，4mg)。
3．4 测定。
3．4．1 测定条件：用具有氢焰电离检测器的气相色谱仪，按下述条件测定。
填充剂：60～80目经硅烷化处理过的硅藻土担体，加入含XE－60(3%)的丙酮溶液，然后蒸去丙酮，干燥；
玻璃柱：玻璃管内径3mm，长度2m；
柱温：从150℃到220℃以6℃／min速度升温；
检测器温度：250℃；
载气：氮气，40mL／min。
3．4．2 标准曲线：分别准确吸取2μL标准曲线用标准液，注入气相色谱仪，由峰高和峰面积绘制标准曲线。
4．分析结果的表述
吸取2μL检液，注入气相色谱仪，根据所得峰高或峰面积，从标准曲线上求出检液中的浓度(mg／mL)，按式(11－24)计算样品中的D－山梨糖醇的质量分数(w)。
图11－5 乙酰基衍生物的色谱图
1－木糖醇 2－甘露糖醇 3－山梨糖醇
图11－6 山梨糖醇的标准曲线
式中 ρ——检液中的D－山梨糖醇的浓度，mg／mL
m——取样量，g