蛋白质及氨基酸代谢试验
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第89页（8868字）
一、靛基质(吲哚)试验
(一)培养基
1．需氧、兼性厌氧菌用
蛋白胨 1g
氯化钠 0．5g
色氨酸(可省去) 0．1g
蒸馏水 100ml
溶解各成分，调pH为7．4～7．6，分装试管，经115℃20min灭菌。
2．厌氧菌用
胰蛋白胨 2g
葡萄糖 0．1g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0．2g
硫乙醇酸钠 0。1g
琼脂 0。1g
蒸馏水 100ml
溶解各成分，调pH为7．4～7．6，分装试管，经115℃20min灭菌。
(二)试剂(此配方为Kovacs试剂)
对二甲基氨基苯甲醛 5g
95%乙醇 75ml
浓盐酸 25ml
对二甲基氨基苯甲醛溶于乙醇中，再缓缓加入浓盐酸即成。
(三)试验方法 试验菌接种于培养基中，37℃培养24～48h后，滴加试剂数滴于培养物液面，轻轻摇动，红色为阳性反应。黄色为阴性反应。
二、霍乱红试验
(一)培养基
胰蛋白胨 2g
氯化钠 0．5g
硝酸钾 0．02g
蒸馏水 100ml
溶解各成分后，调pH为8．4，分装试管，121℃20min灭菌。
(二)试剂 浓硫酸(化学纯)。
(三)试验方法 试验菌接种于培养基中，37℃培养24～48h后，加入浓硫酸数滴，呈红色或紫红色为阳性反应。
(四)原理 霍乱弧菌等在碱性环境中生长良好，分解蛋白胨中色氨酸，产生吲哚，并能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，在加入浓硫酸后生成亚硝酸吲哚，而呈红色。
三、硫化氢试验
(一)培养基
1．醋酸铅琼脂
营养琼脂pH7．4 100ml
10%硫代硫酸钠溶液 2．5ml
10%醋酸铅溶液 3ml(113℃30min灭菌)
营养琼脂溶化后，加入硫代硫酸钠，混匀，115℃20min灭菌后备用。临用前加热溶解，加入灭菌的醋酸铅溶液，混匀后，分装于无菌试管，直立凝固。
2．厌氧菌用醋酸铅琼脂
胰蛋白胨 10g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 3g
葡萄糖 1g
琼脂 2g
10%醋酸铅溶液 2ml(115℃20min灭菌)
蒸馏水 1000ml
除醋酸铅溶液外，各成分加热溶解，调pH为7．6，经115℃20min灭菌，取出冷却至55℃左右，加入灭菌的醋酸铅溶液，混匀，分装试管，直立凝固。
注：
(1)穿刺接种后，应培养在厌氧环境中。
(2)如用蛋白胨，量改为20g。
3．三糖铁琼脂或硫酸亚铁琼脂 用于肠杆菌科细菌测定产生硫化氢能力。
(二)试验方法
1．试验菌穿刺接种于培养基中，置37℃培养2～4天，如穿刺线上或试管底部变黑者为阳性反应。
2．醋酸铅纸条法
(1)醋酸铅纸条的制备 取滤纸剪成6．5×0．6cm大小纸条，置平皿中，经121℃20min灭菌，烘干备用。将滤纸条浸泡在灭菌的饱和醋酸铅溶液(10g醋酸铅溶于50ml沸蒸馏水中，即为饱和醋酸铅溶液)，浸透后取出，置无菌平皿内，37℃烘干，保存于灭菌试管中。
(2)试验方法 试验菌接种于营养肉汤或肝浸汤琼脂斜面，取一片醋酸铅滤纸条，夹在试管的棉塞下悬挂，置37℃培养1～2天，滤纸条变黑或棕褐色者为阳性反应。
(三)原理 某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢遇铁盐(或铅盐)形成黑色硫化铁(或硫化铅)。
四、尿素酶试验
(一)培养基
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 2g
葡萄糖 1g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
0．4%酚红溶液 3ml
20%尿素溶液(过滤除菌) 20ml
1．除尿素液、指示剂及琼脂外，各成分加热溶解，调pH6．8～6．9，加入琼脂溶化后，再加指示剂混匀，115℃20min灭菌。
2．取出培养基冷却至55℃左右，以无菌操作加入20%尿素液20ml，混匀后，分装无菌试管，摆成高层斜面。亦可制成液体培养基。
(二)试验方法 将试验菌浓密地接种在培养基中，置37℃培养3～12h，如接种于液体培养基并孵育在37℃水浴中，则得出结果更快。若培养基变粉红色者为尿素酶试验阳性。
(三)原理 某些细菌含有尿素酶，能分解培养基中的尿素，产生大量的氨，使培养基变碱而呈粉红色。
五、明胶液化试验
(一)培养基
肉汤培养基(pH7．4～7．6) 100ml
明胶 12g
明胶加入煮沸的肉汤中，在水浴中加热溶化，分装试管，经113℃20min灭菌。保存于4℃冰箱备用。
(二)试验方法 用穿刺法接种在试管中央，在20℃温箱中培养，一般细菌培养7天，缓慢液化的细菌应培养一个月。如明胶液化，则记录液化明显的时间。如夏天没有20℃的培养条件或在20℃温度下不能生长的细菌，必须培养在所需温度下，观察时，将试管取出放入4℃冰箱内30min，若仍不凝固者为阳性。
另一法为Frezier氏的明胶平板法
明胶 4g
牛肉膏 5g
蛋白胨 0．1g
葡萄糖 0．05g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 1．5g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0．5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000ml
配制时先将明胶加在400m1水中，加热溶化，将氯化钠及磷酸氢二钾和磷酸二氢钾溶于100ml水中，然后将两液混合，再加入葡萄糖、蛋白胨和牛肉膏，加热数分钟。另将琼脂溶化在500ml水中，最后将两液混合，分装三角烧瓶，113℃20min灭菌后，倾注平板。
(三)酸性汞试剂
氯化汞 15g
纯盐酸 20ml
蒸馏水 100ml
(四)试验方法 将试验菌点种在平板上，每个平板可接4～5株菌。适温培养1～3天，待菌落生长丰厚后取出，滴加酸性汞试剂在菌落周围。如菌落周围出现透明圈者为阳性，说明该菌具有蛋白酶，能分解明胶。不能水解明胶的菌落周围出现白色浑浊。
注意：因试剂中含汞量大，处理时需加小心。
(五)原理 明胶是一种动物性蛋白，明胶水解是由于细菌所产生的蛋白酶的作用。明胶培养基本身低于20℃凝固，高于24℃自行液化。明胶分解后，其分子变小，虽在低于20℃的温度下亦不再凝固。
六、肉渣消化试验
(一)培养基
牛肉汤(pH7．4) 按需要量取
牛肉渣 同上
取牛肉渣装试管内，每管约2～3g，再加入牛肉汤，每管约5ml，每管滴加液体石蜡，高约0．5cm，121℃30min灭菌。
(二)试验方法 将试验菌接种后，用蜡笔于培养基的肉渣层上缘划一横线标记，37℃培养4～7天，若肉渣变黑或被消化(肉渣的高度有变化)者为阳性。
七、酪蛋白分解试验
(一)培养基
1．脱脂奶粉(或用50ml脱脂牛奶)5g加蒸馏水至50ml，流通蒸气灭菌。
2．琼脂1．5g加蒸馏水50ml，121℃20min灭菌。
3．待1和2冷却至45～50℃时，混合均匀，倾注平板。
(二)试验方法
1．平板倒置过夜，使表面水分干燥。
2．将试验菌点种在平板上，每皿可点种3～5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪蛋白是否已被分解而呈透明。
(三)原理 有些细菌能产生酪蛋白酶，分解酪蛋白，使菌落周围和下面酪蛋白被分解而产生透明轮廓。
八、酪氨酸水解试验
(一)培养基
营养琼脂(pH7．0) 100ml
酪氨酸 0．5g
营养琼脂溶化后，加入酪氨酸，完全混匀后，分装试管，经121℃30min灭菌，倾注平板或摆成斜面。
(二)试验方法将试验菌接种后，置37℃培养3～7天，观察细菌生长附近的结晶酪氨酸(其溶解度低，故现结晶)，若有消失为阳性反应。
(三)原理 酪氨酸为针状结晶，25℃时每1000 ml水能溶解0．453g。具酪氨酸酶的细菌能分解酪氨酸为更易溶于水的物质(如酚及丙氨酸)，故菌落附近的结晶酪氨酸消失。
九、氨基酸脱羧酶试验
(一)培养基(此配方为Moeller氏法)
蛋白胨 5g
牛肉膏 5g
葡萄糖 0．5g
吡哆醇(或用0．5%酵母膏代替) 5mg
0．2%溴甲酚紫 5ml
0．2%甲酚红 2．5ml
蒸馏水 1000ml
1．除指示剂，将以上各成溶解，调pH为6．0，加入指示剂。
2．将基础培养液分成四等分，其中三份分别加入L-精氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸，使其浓度达1%。再调pH为6．0。未加氨基酸的一份作为空白对照。分装小试管，每管3～4ml，上面加一层液体石蜡约0．5cm厚，115℃20min灭菌。
(二)试验方法 将试验菌接种上述培养基中，37℃培养18～24h观察结果。如指示剂呈紫色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应。对照管应为黄色。
(三)原理 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基脱出，生成胺类和二氧化碳，培养基中含胺类时呈碱性反应。
十、精氨酸双水解酶试验
(一)培养基
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 0．3g
L-精氨酸盐 10g
琼脂 6g
酚红 0．01g
蒸馏水 1000ml
除酚红外，将以上成分加热溶解，调pH为7．0～7．2。加入指示剂，分装试管，并设有不含氨基酸作对照管，121℃20min灭菌。
(二)试验方法 取幼龄菌穿刺接种，同时接种不含氨基酸对照管，并用灭菌石蜡封管。适温培养3、4、7天。若培养基转为红色者阳性(精氨酸脱羧酶阳性者，亦可引起培养基变红，精确方法是用液相色谱鉴定)，呈黄色者为阴性，对照管应是黄色。
(三)原理 精氨酸经精氨酸脱酰酶的作用，降解为瓜氨酸和氨，瓜氨酸再经瓜氨酸酰脲酶的作用，降解为鸟氨酸、二氧化碳和氨。培养基变碱。
十一、苯丙氨酸脱氨酶试验
(一)培养基
DL-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸0．1g) 0．2g
酵母浸膏 0．3g
氯化钠 0．5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0．1g
琼脂 1．2g
蒸馏水 100ml
除琼脂，以上各成分溶解后，调pH为7．4，加入琼脂溶化，分装试管，每管3～4ml，经115℃15min灭菌，制成斜面备用。
(二)试剂 10%三氯化铁水溶液。
(三)试验方法 将试验菌接种于上述培养基，37℃培养18～24h(以细菌生长丰盛为佳)后，取出加10%三氯化铁4～5滴，斜面呈现绿色者为阳性反应。
(四)原理 某些细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨生成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用形成绿色化合物。