气单胞菌属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第288页（5249字）
气单胞菌属在伯杰氏系统细菌学第一版(1984)分属于弧菌科(Vibrionaceae)，Colwell(1986)提出归属于气单胞菌科(Aeromonadaceae)这一新科。革兰氏阴性、直形杆状、两端钝圆，或呈球杆状，0．3～1．0×1．0～3．5μm。单在、成双，或呈短链，不形成芽孢。运动者通常为位于顶端的单鞭毛。兼性厌氧生长，葡萄糖的代谢兼呈呼吸型及发酵型，分解碳水化合物产酸或产酸并产气。还原硝酸盐为亚硝酸盐，氧化酶及接触酶阳性，尿素酶阴性。明胶酶及精氨酸双水解酶阳性，H2S阴性。抵抗制弧菌剂0／129(2，4-二氨基-6，7-二异丙喋啶)。分为嗜温有动力群及嗜冷无动力群。
一、嗜温有动力的气单胞菌群(Mesophilic motile aeromonas)
嗜温有动力群气单胞菌包括三个种，即嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌(A．caviae)和寡源气单胞菌(A．sobria)。三个种培养特性基本相同。均为直形杆菌，有的菌体略弯，形态及大小多样，呈短杆或丝状。在液体培养基中有一根极生鞭毛，在固体培养基上的幼龄培养物还可能产生侧生鞭毛，其波长短于极生鞭毛的波长。广泛存在于淡水及含有机物的水中、淤泥中及淡水鱼的体表。健康鱼带菌率高。可引起多种鱼传染病，统称为运动性气单胞菌感染症(motile aeromonas infection)。例如鳗红鳍病，鲤鱼红斑病，鲤鱼及金鱼的竖鳞病鳞立病、松球病)，鲇鱼红口病，金鱼腐尾病以及链鱼、鳙鱼的腐皮病(打印病)。也可为鱼类病毒感染的二次侵入菌。为两栖类特别为蛙的红腿病的病原菌，可致爬行类(蛇)及甲壳类(蜗牛)的疾病，还可引起哺乳动物如牛和猪的腹泻病以及水貂等养殖动物的群发胃肠炎。在人可致创伤感染及急性腹泻。在食品卫生检验中，某些国家已将嗜水和寡源两种气单胞菌定为必检细菌。鱼体表、生鱼片、生牡蛎、猪和牛的屠肉和屠床都有很高的本菌分离率。猪和牛的盲肠内容物亦有本菌存在。
培养特性：最适生长温度为28℃，一些菌株于5℃亦可生长，发育生长的最高温度通常为38～41℃。在普通琼脂上生长良好，菌落圆整隆起，光滑透明，白色至黄白色，不产生色素。在麦康凯、SS、XLD(木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂)及DHL(去氧胆酸盐硫化氢乳糖琼脂)上均可生长，形成穹窿度低直径约1～2mm通常不分解乳糖的菌落。在TCBS(硫代硫酸盐枸橼酸盐胆盐蔗糖琼脂)上不生长。在血液琼脂上生长良好，大部分菌株可产生溶血(α及β溶血)。
发酵甘露醇、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、果糖及海藻糖，水解淀粉。不发酵卫茅醇、鼠李糖、肌醇、木糖、棉实糖及福寿草醇。半乳糖甙酶(ONPG试验)及精氨酸双水解酶阳性。鸟氨酸脱羧酶，色氨酸及苯丙氨酸脱氨酶阴性。赖氨酸脱羧酶结果不定。在溴棕三甲胺琼脂上及5%氯化钠肉汤中不生长。
抗原构造：可分为12个O抗原及9个H抗原。
抗菌敏感性：大多数菌株对四环素类、氨基糖甙类、萘啶酮酸、多粘菌素、复方新诺明及氯霉素敏感。有的病畜的致腹泻菌株仅对呋喃类药敏感。对氨苄青霉素及羧苄青霉素有抗性。
分离及鉴定：
(1)病料采取——粪便(直肠拭子)或血及脓汁拭子等临床材料；病鱼和带菌鱼的体表(包括病变部)拭子、血及肾组织等；生鱼片、牡蛎肉，猪、牛等屠肉和屠床等的拭子；水源和食品等样品；淡水养鱼池的水和淤泥样品。
(2)培养基及检查方法——一般病料可使用普通琼脂、麦康凯或SS等琼脂以及血液琼脂平板。污染材料如粪便等，可在琼脂培养基中添加氨苄青霉素10～15μg／ml。氨苄青霉素绵羊血琼脂平板可以明显提高细菌分离率，每份样品涂抹两个平板，35℃培养18～24h，其中一个平板覆盖氧化酶试剂，根据菌落溶血及氧化酶阳性，计数菌落并及时挑取菌落鉴定。食品检验使用氨苄青霉素淀粉琼脂平板可快速定量食品中的气单胞菌。这些平板制法简单，不含糖类，优于曾使用的IBB(肌醇亮绿胆盐琼脂)、BBG(胆盐亮绿琼脂)或XDC(木糖去氧胆酸盐枸橼酸盐琼脂)。氨苄青霉素血液琼脂平板结合应用pH8．4碱性蛋白胨水预先增菌35℃16～18h，可以明显提高3溶血性气单胞菌的分离率。
气单胞菌为氧化酶阳性兼性厌氧发酵菌，与氧化酶阴性的肠杆菌科及非发酵型的假单胞菌属容易区别。与同属于氧化酶阳性兼性厌氧发酵菌的弧菌属、邻单胞菌属及发光杆菌属等弧菌科细菌的鉴别见表12-4。
表12-4 运动性气单胞菌群与弧菌属等的比较
注：①一个种为阴性、阳性或不定。
②3个种为阴性。S敏感，R抵抗。V不定。
(3)分离株的致病性测定——致病性分离株主要属于嗜水和寡源两个种。一般认为“致病性株具有5个特性，即赖氨酸脱羧酶阳性、V-P阳性、溶血活性、肠毒性、细胞毒性。溶血活性因子为一种3溶血素的外毒素，存在于培养滤液中，不耐热(56℃10min灭活)，非透析性，可致肠的通透性明显增加，其精制品的抗血清可中和培养物无菌滤液的肠毒性。在血液平板上的β溶血性与无菌滤液的肠毒性结果基本一致，因此可以判定β溶血分离物为致病性菌株。分离物的溶血活性、肠毒活性及动物致死性检查法如下。
①溶血活性测定——分离株在5%洗过兔红细胞琼脂平板上37℃48h，产生的β溶血环自菌落边缘起超过2mm。分离株10h胰酶大豆汤(加有0．6%酵母提取物)培养物的无菌滤过液以0．02mol／L Tris缓冲液(pH7．5，含0．9%NaCl及0．05mol／L CaCl2)作对倍稀释，加等量0．7%洗过兔红细胞，37℃30min，离心上层液以分光光度计5nm波长测定吸光值，标准曲线以皂甙溶解的同样红细胞悬液制备，受检滤液产生50%溶血的最小量为一个溶血单位。
②肠毒性测定——利用家兔回肠袢测定法。每只兔设阴性对照(空白培养基1ml)及阳性对照(霍乱菌提纯毒素0．5μg含于pH7．3PBS1ml)肠袢各一个，受检无菌滤液或活菌(109／ml)的肠袢不多于2个(接种量1ml)，各接种袢隔2个空袢。在同一只兔，受检袢的容量长度比值4倍以上于阴性对照袢为阳性。每个菌株在不同兔试3次中至少2次呈阳性，才判定该菌株为肠毒性阳性。
③致死活性测定——致病性气单胞菌分离株对蛙、金鱼、鲤鱼等冷血动物及实验室温血动物如豚鼠、大白鼠、小白鼠、金黄地鼠及兔均有发病致死作用。取受检菌18～24h胰酶大豆汤培养物0．2ml，注射于体重20～25g的小白鼠3只以上，多在注射后9～32h死亡。局部和全身肌肉呈出血性坏死，内脏充血，大量腹水。自心、肝和腹水可获纯培养。
二、嗜冷无动力的气单胞菌群(Psychrophilic nOn-motile aeromonas)
嗜冷无动力群气单胞菌包括杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的三个亚种，即杀鲑亚种(A．salmonicida subsp．salmonicida)，无色亚种(A．salmonicida subsp．achromogens)及杀鳟亚种(A．salmonicida subsp．masoucida)。三个亚种的培养性状基本相同。在综合培养基中呈球状，长度不到宽度的一倍。在营养肉汤中成双、短链、成丛。无鞭毛，不运动，无荚膜。在自然条件下均为严格寄生菌。为鲑科等淡水养殖鱼类的“疖疮病”(Furunculosis)的病原菌，传染源为病鱼和带菌鱼。一些非色素产生菌株可致金鱼腐皮病及鲤鱼红肤病。这些鱼病统称为非运动性气单胞菌感染症。本菌与人及家畜的疾病无关。
培养特性：最适生长温度22～25℃，在普通琼脂、血液琼脂及胰酶酪蛋白豆汤琼脂上于此温度均生长良好。大多数可在5℃生长，发育生长的最高温度通常为35℃。营养琼脂上22℃48h菌落圆整隆起、透明、易碎。杀鲑亚种培养2～3天产生水溶性棕色色素(当培养基加有0．1%酪氨酸或苯丙氨酸时)，但厌氧培养不产生。无色亚种及杀鳟亚种均不产生色素。在血液琼脂上均迅速产生溶血，7天后菌落成为绿色。在肠道细菌选择培养基上难于生长，在TCBS上不生长。毒力因子为细胞表面蛋白A。在26～27℃以上温度培养，即变异为不能形成表面蛋白A的细菌，失去毒力。
通常可发酵伯胶糖、海藻糖、半乳糖、甘露糖和糊精，不发酵鼠李糖、山梨醇、乳糖、及棉实糖。尿素酶及鸟氨酸脱羧酶阴性，精氨酸双水解酶阳性。在KCN肉汤及7．5%氯化钠肉汤中不生长。
杀鲑气单胞菌在血清学上一致。
分离及鉴定：细菌存在于鱼的皮肤病变部、血液及肾等组织中。无论病鱼和健康带菌鱼，以肾最易分离到本菌，通常为纯培养。病料于血液琼脂和胰酶酪蛋白豆汤琼脂上于22～25℃培养48h，检查产生氧化酶产生或不产生棕色色素的小菌落。
表12-5 气单胞菌各个种及与邻单胞菌的鉴别表
肌醇亮绿胆盐琼脂(简称IBB琼脂)的做法如下。
蛋白胨(proteose peptone) 10g，NaCl 5g，肉膏 5g，胆盐第3号 8．5g，亮绿 0．00033g，中性红 0．025g，肌醇(meso-inositol) 10g，琼脂 15g，水 1000ml。调pH至7．2，121℃高压15min灭菌后应用，乃分离气单胞菌的选择培养基。
TCBS琼脂做法如下。
酵母膏 0．5g，
蛋白胨 1g，柠檬酸钠 1g，硫代硫酸钠 1g，纯化干燥的牛胆汁(商品名Oxgall) 0．8g，蔗糖 2g，氯化钠 1g，柠檬酸铁 0．1g，溴麝香草酚蓝 0．004g，麝香草酚蓝 0．004g，琼脂 1．5g，蒸馏水 100ml。
将各物依次加入水中，加热溶解，调pH至8．6，切不可高压，冷至45℃时倾注平板。此培养基能抑制大肠杆菌、变形杆菌生长，以利于从粪便中分离霍乱弧菌、副溶血弧菌，气单胞菌可生长。
木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂(XLD)的做法如下。
酵母膏 0．3g，左旋赖氨酸 0．5g，木糖 0．375g，乳糖 0．75g，蔗糖 0．75g，去氧胆酸钠 0．25g，柠檬酸铁胺 0．08g，硫代硫酸钠 0．68g，氯化钠 0．5g，琼脂 1．5g，酚红 0．008g，蒸馏水 100ml。
除柠檬酸亚铁胺及硫代硫酸钠外，溶解各物，调pH至7．4，15磅高压15min，冷至55～60℃，加入2ml内含硫代硫酸钠34%及柠檬酸亚铁胺4%(加热溶解)的溶液，混匀，倾注平板。
此培养基用于从粪便中分离沙门氏菌、志贺氏菌、普罗菲登斯菌用，气单胞菌可生长。
DHL琼脂的做法如下。
蛋白胨 20g，牛肉膏 3g，乳糖 10g，蔗糖 10g，去氧胆酸钠 1g，硫代硫酸钠 2．3g，柠檬酸钠 1g，柠檬酸铁胺 1g，中性红 0．03g，琼脂 20g，蒸馏水 1000ml。加热融解各物，调pH至7．2，冷至50～45℃，倾注平板。此培养基不需高压灭菌。
发酵乳糖或蔗糖的肠道菌，菌落红色，产生H2S的细菌，菌中心黑色。肠道菌以外细菌不易生长，但气单胞菌亦可生长。