器材的准备
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第542页（4057字）
一、玻璃器材
玻璃器材的质量和处理是影响细胞生长的基础。来自玻璃器材的最大危险是洗涤不当而释放有毒物质和消毒不严而被细菌污染。毒性有时与玻璃的化学组成有关，有时则来自外界的污染如铅、汞、锌等重金属盐类，结果导致细胞的死亡。
(一)规格 以硬质中性玻璃最为适宜，尤其是用于培养细胞的培养瓶必须注意选择，要求无色、厚薄均匀、光滑。除特制的细胞培养瓶外薄壁的链霉素瓶、盐水瓶、三角瓶等均可应用。这些玻瓶在贮存液体过程中常释出大量碱，从而改变营养液和溶液的pH，因此用过的玻瓶比之新的效果好。其实只要处理适当，一般软玻璃器材如药瓶等细胞也能生长良好。
(二)洗涤 主要原则是清洁，没有有毒物质吸附在玻面上。新购器材可在自来水中冲洗干净，再浸入5%盐酸中过夜。自来水冲洗去酸，在洗涤剂溶液中过夜。擦洗干净后用自来水洗10次，去离子水洗5次，双蒸水洗1次，倒放沥干。
用过的器材如无病毒污染，可先用自来水冲洗，再用洗涤剂擦洗，其余同上。如被病毒污染，应先浸于强酸溶液(如5%HCl)中过夜，再按上法处理。
硫酸-重铬酸钾清洁液最好不用，因为铬不易除去而对细胞有毒。
(三)包装及灭菌 玻璃器材最好不要用纸特别废纸包装，因为干热灭菌时油墨中有毒成分能挥发而污染玻面，即使是新纸也会因碳化而对细胞有毒性。链霉素瓶和试管等可装入铝制饭盒中干热灭菌。吸管和移液管塞以棉花后不用纸包，直接装于玻璃或金属筒内干热灭菌，金属筒底部放一层脱脂棉以防吸管口碰坏，但必须每次换新，以防碳化后形成有毒物质。培养瓶、盐水瓶、三角瓶等无法装盒者可用铝箔或新牛皮纸包口后消毒。培养瓶盖不论金属或塑料的，均另用高压蒸气灭菌，因为内有橡胶密封层。
二、塑料器材
国外已普遍应用一次性塑料培养瓶，这些聚乙烯瓶不能耐高温，只能包装后用60Co照射灭菌，一般实验室无法进行，而且成本昂贵，不切国情。国内已生产聚丙烯培养瓶及盖，可用高压蒸气(1×105Pa)灭菌。聚苯乙烯或有机玻璃的微量培养板或微量滴定板等均不耐高温。灭菌方法只能在清洗后于70%乙醇中浸泡过夜，无水乙醇中脱水，最后用紫外线灯(波长254nm)或60Co照射灭菌。这些板易磨损在使用和清洗时要注意不能擦括，以免影响观察。
三、橡胶器材
(一)规格 选用质软、能耐高压蒸气灭菌，且对细胞毒性较小的橡胶用品。橡胶管最好用乳胶，橡胶塞最好用白色的，含硫的红橡胶或再生橡胶制品最好不用，但如处理适宜且不长时间接触液体还是可以使用。
(二)洗涤 新的橡胶器材在自来水中冲净后浸于0．5mol NaOH溶液中煮沸15min，自来水冲洗。再在0．5mol HCl中煮沸15min，自来水冲洗，最后以去离子水冲洗多次后晾干。
(三)包装和灭菌 包装前必须完全晾干，否则会互相粘连。链霉素瓶塞和盐水瓶塞散装在小铝盒中，其他橡胶塞装于大试管中，橡胶管装于铝盒或烧杯中用牛皮纸扎口。灭菌可用1×105Pa高压蒸气灭菌20～30min，取出放置40～50℃烘箱中烘干
四、细菌滤器
细胞培养中许多溶液不耐高温，必须用过滤法除菌，如血清、胰蛋白酶溶液，综合营养液等。常用的细菌滤器有滤膜、赛氏滤板和垂熔玻璃滤器三类，处理方法都不同，必须小心从事，如处理不当会严重影响效果。
(一)滤膜 通常用醋酸纤维或者醋酸纤维和硝酸纤维混合制成，厚100～150μm，孔径因配方不同而可以人工控制。滤膜能耐受稀酸、稀碱、苯、乙醚、氯仿、有些还耐高温(121℃蒸气)不被破坏。我国市售的滤膜有下列规格：滤膜大小(直径，mm)-25、35、50、60、100、150、300。滤膜孔径(μm)-0．15、0．22、0．3、0．45、0．65、0．8、1．2、3．0、5．0。
上述规格根据需要选用。滤除细菌可选用孔径0．22～0．45μm的滤膜，如大肠杆菌一般不能通过0．65μm的滤膜。根据滤量多少选用大小合适的滤膜。如果滤量很少(＜10ml)，可采用装在注射器上的滤器(25mm)，将液体装在注射器内，加压过滤。国内生产的配套滤器分不锈钢和塑料两种，前者耐用但价格昂贵，后者价廉，并能耐高压蒸气灭菌，但容易损坏。
使用方法及注意事项如下。
1．滤器、滤瓶、橡胶管等要彻底清洗。
2．滤膜只能使用一次，用毕弃去。用前应用蒸馏水清洗，顺序为先漂洗1～2次，浸泡过夜，再洗1～2次，装入滤器中，光滑面向上。滤膜很脆，小心不要损坏。
3．一般采用高压蒸气灭菌(121℃，30min)。滤器和滤瓶最好分开灭菌，否则放气时滤膜容易损坏。灭菌后滤膜因水分蒸发而变干燥，这样常发生破裂，且影响滤速。预防方法可在灭菌完毕俟温度下降后再开锅，并在灭菌前于滤膜上加二层湿润的厚滤纸。
4．如样品液不够澄清，杂质和细菌过多时，必须先经孔径3～5μm的滤膜预滤。
5．滤器的密封性必须良好，必要时须用气泡法检查通气性能。
6．过滤可用正压法或负压法，前者效果较好，滤液不易产生气泡。
7．滤膜易燃，并需防止受潮变质，要避光贮存。
8．接触病毒的滤器用后必须煮沸灭菌，旋松滤器，弃去滤膜，将滤器清洗晾干后收藏。
(二)赛氏滤板 这是由纤维素和石棉纤维混合制成，厚约2～6mm；由于配方不同而孔径由0．01～5μm，一般型号为EK(孔径0．1μm)的滤板能阻止细菌的通过。使用方法如下。
1．滤板只能使用一次，用后弃去。滤板对细胞有毒性作用，因此在灭菌前最好先过滤蒸馏水数百毫升。
2．将滤板装入金属滤器内，粗糙面向上，旋紧密封后用纸包裹，高压蒸气灭菌。
3．可用正压或负压法过滤，正压效果较好，但国内生产的滤器大都用于负压抽滤。
4．赛氏滤膜对阴离子有很强的吸附力，因此比孔径稍小的颗粒也不易通过。
(三)垂熔玻璃滤器 这种滤器是用玻璃磨成细砂，在半熔条件下压成薄板，然后镶嵌在玻璃漏斗内。由于玻璃砂粒的大小不同而形成不同孔径，但最小的孔径也不能阻止病毒，因此一般用于澄清或细胞培养液的过滤。滤器规格见表28-1。
垂熔玻璃漏斗的洗涤和处理。
1．新漏斗
(1)将漏斗浸没水内，用橡胶管连接漏斗尾部与抽气机的排气孔，鼓以少量空气，观察气泡的大小和均匀度，注意滤板和漏斗镶接处是否漏气。
表28-1 国内外垂熔玻璃滤器的规格
(2)蒸馏水冲洗，包扎，高压蒸气灭菌30min，缓慢冷却后取出。
(3)用细菌悬液过滤，检查质量。一般血清和胰蛋白酶溶液的除菌可用5号，细胞营养液用6号。
2．用后处理
(1)立即投入5%HCl中消毒，不能用碱性或凝固蛋白质的消毒液。随后冲洗干净。
(2)如遇滤孔被蛋白质凝固而堵塞，可将滤器浸泡于1%胰蛋白酶溶液(pH7．6～7．8)中，在37℃消化过夜，再行冲洗。
(3)在含有1～2%硝酸钠的浓硫酸中浸泡过夜，自来水冲洗，再用蒸馏水抽滤至中性。
(4)晾干后收藏。
3．注意事项
(1)不能用重铬酸钾硫酸液浸泡，以免被滤板吸附。
(2)抽滤时负压不能超过1×105Pa。
(3)碱性溶液能损坏漏斗。
(4)骤冷骤热易于碎裂，特别滤板镶接处易于漏气。
(5)浸泡于洗液中时滤板正反面都要接触洗液。
(四)瓷质滤烛 Berkefeld、Chamberlane、Mandler、Selas等过去在实验室中应用颇广，目前已渐少用。国内生产者一般用于水等液体的澄清，这里不作介绍。