常用的染色剂配制和染色法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第21页（2800字）

1．美蓝染色法。

(1)染液的配制：取美蓝(即亚甲蓝)0．3克溶解于95%酒精30毫升中，然后加0．01%氢氧化钾溶液100毫升，混合即成。此染液密闭保存，可多年不坏。

(2)染色：在制备好的抹片上，滴加染液使之覆盖涂抹片，经1－2分钟，水洗，吸干，镜检。

(3)用透：可以检查细菌的形态特征，如巴氏杆菌的两极性。久贮的碱性美蓝液还可染出细菌的荚膜，荚膜呈红色，菌体呈蓝色，染色时间需2－3分钟。

2．瑞特氏染色法。

(1)染液的配制：取瑞特氏染料0．1克置乳钵中，徐徐加入中性甲醇60毫升，研磨使其溶解，溶解后盛于棕色瓶中，过夜，次日滤过即成。此染色液保存于暗处，保存时间愈久，染色之色泽愈鲜艳。

(2)染色：抹片自然干燥后，滴加染液约一毫升，使其盖满抹片涂抹处，经1分钟，使标本为染液中的甲醇所固定，再加上与染液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水(或自来水)，轻轻晃动玻片，使与染液充分混匀，经5分钟后，用水冲洗，吸干，镜检。

(3)用途：为血液涂片的良好染色剂。染组织抹片检查巴氏杆菌的两极性。怀疑患炭疽病的标本，也常用这种染色法染色。

3．姬姆萨氏染色法。

(1)染液的配制：取姬姆萨氏染料0．6克加甘油50毫升，置于55－60℃水浴中1．5－2小时后，加入甲醇50毫升，静置一日以上，滤过即为姬姆萨氏染色液原液。

临染色前，于每毫升中性或微碱性蒸馏水中加上述原液一滴，即成姬姆萨氏染色液。

(2)染色：抹片自然干燥后，浸入盛有甲醇的玻缸中或滴加甲醇数滴于玻片上固定3－5分钟，干后将玻片浸入盛有染液的染色缸中，染色半小时至数小时，水洗，吸干，镜检。

(3)用途：是血液涂片的良好染色液，检验血液内寄生虫和白细胞的分类以及细菌形态特征的染色效果均佳。

4．革兰氏染色法。

(1)染液的配制：

草酸铵结晶紫液：取结晶紫酒精饱和液(结晶紫4－8克，95%酒精100毫升)，加入草酸铵水溶液80毫升中，混合过滤即成。

革兰氏碘液：取碘化钾2克置乳钵中，加蒸馏水约5毫升，溶解后，再加入碘片1克，并徐徐加水搅拌溶解后补加水至300毫升。保存中如产生沉淀或褪色即不能再用。

脱色剂：95%酒精。

复染液：以下两种复染剂可选任何一种使用。

沙黄水溶液：取沙黄酒精饱和液(沙黄3．41克，95%酒精100毫升)10毫升，用蒸馏水90毫升稀释即成。

石炭酸复红液：取碱性复红酒精饱和液(碱性复红3克，95%酒精100毫升)10毫升，加入10毫升5%石炭酸水溶液90毫升，混合滤过即成。

(2)染色法：

①在已干燥固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫液染色1－3分钟，水洗；

②滴加革兰氏碘液作用1－3分钟，水洗；

③滴加95%酒精于抹片上脱色，脱色剂不断晃动玻片，至无紫色脱落为止，约需0．5－1分钟，水洗；

④滴加复染液，复染约0．5－1分钟，水洗；

⑤吸干或自然干燥，镜检。

(3)用途：可将所有细菌区别为革兰氏阳性(染成紫色，如葡萄球菌、链球菌、猪丹毒杆菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、气肿疽梭菌、破伤风梭菌等)或革兰氏阴性(如巴氏杆菌、坏死杆菌、大肠杆菌、螺旋体、鼻疽杆菌等)两种。

注意：在染色过程中，掌握酒精脱色时间颇为重要，如脱色时间过长，则原为革兰氏阳性细菌亦可被脱色而误为阴性。反之，如脱色时间不足，则原为阴性的细菌亦可因脱色不够而误为阳性。因此，脱色时间的长短应随涂片的厚薄，脱色时玻片摇动的快慢和滴加脱色剂的多少而定，不能机械规定。

5．荚膜染色法。荚膜染色方法很多，最常用的方法有美蓝染色法(荚膜染成淡红色，菌体呈蓝色)、瑞特氏染色法或姬姆萨氏染色法(两者染色后，荚膜呈淡紫红色，菌体呈蓝色)、番红染色法等。这里介绍沙黄(亦称番红花红)染色方法。

(1)染液的配制：取沙黄0．7克溶解于95%酒精20毫升中，再加蒸馏水15毫升混合即成。

(2)染色法：在固定好的抹片上滴加染液，用火焰在玻片下面加热至发生蒸气，约经5分钟(如玻片上染液干涸时，须滴加染液补足)，水洗后用吸水纸吸干，镜检。

6．芽孢染色法。

(1)染液的配制：5%孔雀绿水溶液、0．5%沙黄水溶液。

(2)染色法：抹片经火焰固定后，滴加5%孔雀绿水溶液于玻片上，加热使发生蒸气3－4次，水洗半分钟，再用沙黄水溶液复染0．5－1分钟，水洗，吸干，镜检。染色后的菌体呈红色，芽胞呈绿色。

7．螺旋体染色法。

(1)染液的配制：2%刚果红水溶液、1－2%盐酸酒精。(2)染色法：在载玻片上滴加螺旋体的标本和2%的刚果红水溶液各一滴，混匀，涂成薄片，干燥后，滴加1－2%盐酸酒精，刚果红则由红变蓝，干燥后不必用水冲洗。镜检可在蓝色的背景下见有透亮未染色的螺旋体。