牛血吸虫病粪便孵化操作技术

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第119页（2589字）

(一)器材用品

1．处理粪便的用品：送粪卡、竹筷、铜纱滤杯、尼龙筛兜、500毫升玻质或塑料量杯、粪桶等。

2．药品：漂白粉、明矾、食盐、硫代硫酸钠。

3．孵化用品：500毫升三角烧瓶。

4．鉴别毛蚴仪器：显微镜、放大镜、吸管、载玻片、盖玻片。

5．洗涤消毒用具：煤炉、钢精锅、水温计、盆等．

6．盛水用具：水缸、挑水桶等。

7．劳动保护用品：工作服、胶靴等。

8．一般用品：剪刀、闹钟、天平等。

(二)用水的准备 洗粪和孵化用水应选择未经工业污水、农药及化肥等所污染的水源，其pH值以6．8－7．2为宜。

1．河水、井水、池塘水的处理：水中有多种水虫，水质比较浑浊，必须进行杀灭水虫和澄清水质的处理。

(1)杀灭水虫：其目的将用水中的小虫杀死，以免影响观察，发生误诊。常用的方法有两种，一是将水加温至60℃以上杀死水虫；另一是在每百市斤水中加入含30%有效氯的漂白粉0．35克或含65%有效氯的漂白粉精0．17克，以杀死水虫。处理方法是将漂白粉置于盛具中加少量水调成糊状，倒入水缸内充分搅拌，在不加盖的情况下存放20小时，待余氯自然逸出后方可使用。如果急需用水，可在加入漂白粉后1小时，按每百市斤水加硫代硫酸钠0．2－0．4克脱氯，经半小时后即可使用。

(2)澄清水质：水质浑浊时、每百市斤水中加入明矾3－5克(不宜过量)，经充分搅拌后即可迅速澄清。每天用水后必须将缸底沉渣清除，洗净。

2．自来水的处理：凡有条件的地方，可采用自来水，可免去灭虫和澄清处理。余氯较重的自来水，应在盛具中存放过夜备用。

(三)牛粪的采集和送检 根据试验观察结果，冬季化验时阳性检出率不高，因此要按当地气温等情况，尽可能安排在其他季节进行，为了提高检出率，必须做到三送六检。

1．采粪量，每头牛不少于半斤。

2．采粪方法，粪样要新鲜、防止冰冻和日晒。为了避免污染，采粪时所用的树枝不能连续使用，一支采一头牛粪，直肠采粪时每采一头牛后，必须将手洗干净再采另一头牛。

3．包装送检，采得粪样，可用宽阔的瓜、菜、树叶或油纸、废塑料薄膜等妥善包扎，但禁用包过农药、化肥及其他化学药品的纸张。包装时应附上送粪卡，填写送粪卡必须使用铅笔或圆珠笔，以免受潮后字迹不清。

4．编号登记，牛粪送到化验地点后，应有专人负责进行登记编号，记载化验结果。

(四)洗粪

1．洗粪过滤。受检粪样依次放在预先排列好的洗粪杯旁，将送粪卡和新编号码移贴其上。洗粪量应有100克(约两个鸡蛋大)，尽可能选取带有粘液或脓血的部分，于洗粪杯内加入捣碎成糊状，再通过每英寸40孔或60孔的铜纱滤杯过滤入另一杯中。或将粪样投入铜纱滤杯中，直接过滤于杯内，过滤时要浸于水中充分搅拌，力求洗净，然后弃去粪渣。

2．尼龙筛兜淘洗。将滤出的粪液，倒入每英寸260孔的尼龙筛兜内滤干，然后边加水边振摇或通过两至三道清水充分淘洗，直至滤出水液变清为止，然后将粪渣移入三角烧瓶中孵化观察。

3．沉淀换水，无尼龙筛兜的情况下，可采用沉淀换水的方法。经铜纱滤杯滤出的粪液，于量杯中静置30分钟待粪渣下沉后进行第一次换水。第一次换水时，只能倒去二分之一左右。第二次换水时间为20分钟，此后每隔15分钟换水一次，直至水色清亮为止。换水时要轻拿轻放，不能倒倒停停，以免沉渣上翻，把虫卵倒去。如系广底溶器，更应多加注意。

当水温在15℃以上时，第一次换水应改用1．0－1．2%的盐水，以抑制毛蚴过早孵出；当水温在18℃以上时，全部洗粪和沉淀用水均应改用1．0－1．2%的盐水。但是，孵化用水应为淡水。

(五)孵化和观察

1．孵化。将经淘洗或沉淀换水后的粪渣置于500毫升的三角烧瓶中加水进行孵化。同时，应将粪样标签移贴在三角烧瓶上。亦可采用顶管和试管装置进行孵化。

孵化温度以22－26℃为宜。室温在20℃以上时，无需加温，可直接进行孵化。孵化时应具有一定的光线。

2．观察。样品孵化后，于第1、3、5小时各观察一次。每次每个样品的观察时间应在2分钟以上。发现毛蚴即判为阳性，并立即进行登记。

毛蚴往往在距水面4厘米的范围内活动，灰白色，折光强，梭形，多呈与水面平行或斜向的直线运动。观察毛蚴应在光线充足的地方进行，为便于观察，可衬以黑色背景。

观察时，毛蚴必须与水虫严加区别。尤其在孵化瓶中所见草履虫的形态、颜色、运动方式等与毛蚴极为相似。毛蚴的大小比较一致，草履虫则因系分裂繁殖的关系大小不一致，一般所见略微大于毛蚴。显微镜下观察，毛蚴前端较宽，有一突起，体前部有明显的原肠和头腺。草履虫体呈鞋底状，体侧有一明显的口沟。