牛锥虫病间接血凝试验操作技术

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第125页（1114字）

(一)材料准备

1．被捡血清。

2．锥虫抗原致敏红细胞诊断液。

3．非致敏红细胞悬液。

4．PBSpH7．2磷酸盐缓冲液(1／15M磷酸氢二钠72毫升，1／15M磷酸二氢钾28毫升，氯化钠0．85克，充分混匀即成。如pH不合要求，分别上述第一或第二液调整)。

5．主要检测器材。96孔“V”形血凝反应板、50微升容量的微量移液器、1毫升注射器及号人用针头、恒温箱等。

(二)操作方法

1．先将12×8的96孔“V”形血凝反应板按血清编号，每份血清做2排，每排用6个孔，每孔分别加入用PBS作不同稀释度的血清，每排第1、2、3、4、5、6孔各为5、10、20、40、80、160倍稀释，第2－6孔稀释好的血清量应是各50微升、稀释方法如下：

2．第一排孔为测定排，每孔用1毫升注射器，号针头吸取抗原诊断液，各加1滴，第2排孔为对照排、每孔用1毫升注射器号针头吸取对照红细胞悬液。

3．将各孔中红细胞液充分摇匀，于26－30℃中放1－2小时，待对照排有孔中红细胞全部沉入孔底，呈一边缘整齐的小红点时即可判读结果。

(三)结果判定

(1)红细胞全部下沉到孔底中央，形成圆点，周缘整齐……阴性(－)。

(2)红细胞多数沉入孔底中央，于孔底中央见一较阴性为小的圆点，周围有少量凝集血球，呈分散的小红点……弱阳性(+)。

(3)红细胞少数沉于孔底中央，于孔底中央见一更小圆点，周围有一薄层凝集红细胞，呈淡红色一薄层……较强阳性(++)。

(4)红细胞呈明显颗粒状凝集，均匀地散布于孔底，形成一薄层……强阳性()。

(5)红细胞呈明显颗粒状凝集。均匀地散布于孔底，形成一薄层且周边呈深红色不整齐的边缘……特强阳性(#)。