开氏法测定粗蛋白质

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第571页（1253字）

(一)适用范围 本法适谷物及油料作物种子中粗蛋白质测定，是农牧渔业部部颁标准法，即用开氏法测总氮量，再乘以蛋白质换算因数，而得粗蛋白质含量。

(二)试剂配制

1．0．02N硫酸标准液(此浓度适用于谷类作物种子)或0．05N硫酸标准液(此浓度适用于大豆种子)。

2．其余试剂同第二十二章第一节中硫酸—混合盐消煮法。

3．蔗糖(分析纯)。

(三)测定步骤 将选有代表性种子，按四分法取样后，置60℃烘箱中干燥，用粉碎机磨碎，通过0．5mm孔径，置磨口广口瓶中保存。

称样0．5000－0．1000g，放入50ml开氏瓶中，加入2－4g混合盐催化剂和5－8ml浓硫酸，混匀放置过液。将开氏瓶倾斜置于电炉上，开始用小火加热，待泡沫停止后加大火力，保持开氏瓶中液体连续沸腾，沸腾的酸应在开氏瓶颈中部冷凝回流，待消煮液无微小碳粒并呈透明的浅绿色时，继续消煮30min(含蛋白质高的样品，如豆类，需煮60min)。

待消煮液稍冷却后，无损地移入100ml容量瓶中，多次用水洗涤，冷却后定容。放置澄清。

用移液管吸取待测液5．00或10．00ml(含NH₄-N约1mg)，放入半微量定氮蒸馏装置中，加入约5ml40%氢氧化钠进行蒸馏。具体测定步骤可见第九章土壤全氮测定。

按同样条件，称0．1g蔗糖代替样品做空白试验。

(四)结果计算

式中：V——滴定样品时所用标准酸的毫升数；

V₀——空白测定所用酸的毫升数；

N——标准酸的当量浓度；

0．014——氮的毫当量(g)；

取用量倍数——本操作步骤中为100／5或100／10，即为20或10；

W——称样重(g)；

K——蛋白质的换算因数。一般情况下为6．25，这是由蛋白质平均含氮量为16%计算而得，即100／16=6．25。但由于各种作物蛋白质中含氮量不同，其换算因素也各不相同。各类作物蛋白质换算因数，可见表26-3。

表26-3 各类作物的蛋白质换算因素