维生素C的测定(2，6-二氯靛酚滴定法)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第620页（3068字）

(一)适用范围 本法用于还原型抗坏血酸的测定，基于其分子结构中稀二醇结构所具有的还原性，能还原2，6-二氯靛酚为测定基础，是目前维生素C测定最常用的方法。

(二)试剂配制

1．2%草酸溶液 20g草酸(H₂C₂O₄·2H₂O，三级)溶于水，稀至1L，贮存于避光处。

2．抗坏血酸标准溶液 20．0mg抗坏血酸(二级)，溶于2%草酸溶液，并用2%草酸稀至100m1，此液约含抗坏血酸0．2mg／ml。置冰箱中保存，临用前当天进行标定。

3．2，6-二氯靛酚溶液 52mg碳酸氢钠溶解于200ml温水(＜40℃)中。再称取2，6-二氯靛酚钠盐(C₁₂H₆NO₂C1₂Na)50mg，溶解在上述碳酸氢钠溶液中，冷却后加水至250m1。贮存于棕色瓶中，置冰箱中保存，使用前用抗坏血酸标准液标定其准确浓度。并计算其滴定度T。

4．0．1000N碘酸钾溶液 称取在105℃烘过2h的碘酸钾(KIO₃，一级)0．3567g溶于水，定容至100m1。

5．0．001N碘酸钾溶液 取0．1000N碘酸钾溶液1．00ml，定容至100m1。此液浓度为0．00100N的碘酸钾溶液。约每星期应重新稀释配制一次。

6．1%淀粉溶液。

7．6%碘化钾溶液。

(三)测定步骤

1．抗坏血酸标准液浓度的标定 吸取抗坏血酸溶液5．00m1于50m1三角瓶中，加入2%草酸溶液10ml，6%碘化钾溶液0．5m1，和1%淀粉溶液5滴，用0．001N碘酸钾标准液滴定至溶液突变为浅蓝色为止(应耗用0．001N碘酸钾约11m1)。计算抗坏血酸正确的浓度：

式中：N，V＇——所用KIO₃标准液的当量浓度和毫升数；

V₂——所取抗坏血酸溶液的毫升数；

88——抗坏血酸的当量(mg)。

2．2，6-二氯靛酚溶液浓度的标定 吸取经标定的抗坏血酸标准溶液5m1(含抗坏血酸约1mg)于50m1三角瓶中，加入2%草酸溶液10m1，摇匀，用2，6-二氯靛酚染料溶液滴定至溶液呈浅红色，约在15秒内不退色为止(应耗用染料约10m1)。计算每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，即滴定度T(约为0．1mg／ml)

式中：C，V₁——所用抗坏血酸标准液的浓度(mg／ml)和体积(ml)；

V₂——所用2，6-二氯靛酚标准液的体积(ml)。

3．样品测定 从采集的分析样品中，取代表性样品100g，在瓷盘中用刀迅速切成小块，放入电动搅碎机中，加入等量(100g)2%草酸溶液，在搅碎机中，快速转动1min打成均匀的浆状。处理样品的整个过程应在10min内完成，以免还原型抗坏血酸在空气中暴露过久而被氧化。在小烧杯中称取20－40g匀浆状样品(实际样品重量为其1／2)，使含抗坏血酸1－5mg为宜。移入100ml容量瓶中，用2%草酸定容(如有泡沫可在定容前加2滴辛醇除去)。

如无电动搅碎机时，可将样品5－15g放在瓷研钵中，加入适量纯石英砂和2%草酸浸提剂在瓷研钵中研磨至浆状，全部移入100ml容量瓶中用2%草酸溶液定容。石英砂须先用1∶1盐酸浸泡2h，然后用水洗至无氯离子后使用。

多汁果蔬果样品(如西瓜、葡萄、柑桔等)可以直接压汁后，量取10－20m1汁液(含抗坏血酸1－5mg)，立即用2%草酸定容至100m1。

吸取上述制备的待测液5－10ml(约含抗坏血酸0．2－1mg)于50m1三角瓶中，立即用半微量滴定管中的2，6-二氯靛酚标准溶液滴定至呈浅红色，约在15s内不褪色为终点。同时做试剂空白试验，即取与待测液同体积的2%草酸代替样品液，用2，6-二氯靛酚标准液滴定。此空白位通常不得超过0．08－0．10m1。

如待测液色泽深妨碍滴定终点观察时，可在滴定前加入2－3ml二氯乙烷，在滴定过程中不断摇动(但不要强烈振摇，防形成乳浊液而影响滴定)，当三角瓶内的二氯乙烷由无色转为粉红色时表示终点。此外还可用白陶土(须测定其对维生素C的回收率)吸附脱色，过滤后再滴定。对色泽较浓的蕃茄、山楂等样品尚无合适的脱色方法，可用2%草酸液稀释10倍，再进行滴定。

(四)结果计算

式中：V——滴定样品滤液消耗的2，6-二氯靛酚的毫升数；

V₀——空白试验所消耗的2，6-二氯靛酚的毫升数；

T——2，6-二氯靛酚的滴定度，即1ml此液所相当于还原型抗坏血酸的毫克数；

W——样品重(g)；

取用量倍数——样品定容体积与测定体积之比。

(五)注释

①制备待测液时应用不锈钢刀切样。切忌铁、铜等金属与之接触，以防抗坏血酸氧化。

②处理样时应先加入草酸。可阻止氧化酶氧化抗坏血酸，而增加其在提取液中的稳定性。草酸溶液不应置于日光下，以免产生过氧化物。当有催化剂(如金属离子)存在时，过氧化物能破坏抗坏血酸。

③2，6-二氯靛酚呈氧化型时有色，还原型时无色。氧化型时的颜色随介质pH不同而异，在酸性条件下呈红色，碱性条件下呈蓝色。本实验用2，6-二氯靛酚钠盐所配制的氧化型碱性溶液是深蓝色溶液。滴定时与待测液中抗坏血酸作用时，2，6-二氯靛酚被还原，而转为无色。当抗坏血酸全部因还原2，6-二氯靛酚生成脱氢型抗坏血酸，而无还原能力时，滴入待测液中的2，6-二氯靛酚，则受酸性介质影响，而呈红色，即指示终点。因抗坏血酸与2，6-二氯靛酚反应是极灵敏的，而其它还原性物质还原2，6-二氯靛酚的速度均较抗坏血酸慢。所以滴定以15s粉红色不褪为终点。滴定时开始可以迅速加入，直至红色不立即消失时，才尽可能一滴一滴加入，并要不断摇动三角瓶。同时判断粉红色消色时间。

表27－3 水果和蔬菜中抗坏血酸的含量(mg／100g)