Lane-Eynon铜还原直接滴定法测定还原糖

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第610页（1597字）

(一)适用范围 本法属大量法，测糖范围为：15－50ml糖液中含糖50mg，可作为淀粉水解后测定其中还原糖的方法。因本法在加热情况下滴定，操作须熟练，方可得正确结果。

(二)试剂配制

1．斐林试剂甲：34．639g硫酸铜溶于少量水中，再倒入500ml容量瓶中，加水至刻度。

2．斐林试剂乙：173g酒石酸钾钠及50gNaOH溶于少量水，再倒入500ml容量瓶中，加水至刻度，过滤备用。

3．0．5%次甲基蓝：0．5g次甲基蓝溶于100ml水中。

4．10%中性醋酸铅：100g化学纯醋酸铅溶于水，过滤后，稀释至1L。

5．标准蔗糖溶液及斐林试剂的标定：称取纯蔗糖9．5g溶于60ml水中，加6N HCl5ml，加热煮沸15min，使蔗糖转化，冷却后转入1L容量瓶中。定容，摇均匀。吸取100ml糖液放入500ml容量瓶中，加酚酞2－3滴，以6NNaOH中和至淡红色，定容，即为转化糖溶液(每毫升含转化糖2mg)。

准确吸取斐林试剂甲、乙各5．00ml，放入100ml三角瓶中，由滴定管中滴入标准转化糖液10ml，在酒精灯上加热煮沸，加次甲基蓝2－3滴，再由滴定管中徐徐滴入糖液，边滴边摇动，至溶液蓝色完全褪尽(出现砖红色Cu₂O沉淀)为止。根据滴定所用转化糖的毫升数，计算10ml斐林试剂相当于转化糖毫克数(全部滴定过程须在沸腾状态下进行，以使水的蒸气充满瓶内空间，以隔绝空气对次甲基蓝的氧化而呈现蓝色)。计算10ml斐林试剂相当还原糖的毫克数A。

表27－1 按别尔特朗法查测得葡萄糖(mg)

抄自《植物生物化学研究法》，科学出版社，1956年。

(三)测定步骤

1．样品的制备(可溶性糖的提取)：称取切碎混匀的样品25g，置于研钵中搅碎，转入250ml容量瓶中，加水稀释至约为150ml，振荡15min(也可80℃水浴保温30min)，加甲基红2－3滴，如呈酸性，须用0．1NNaOH中和至显黄色。加10%中性醋酸铅2－5ml以沉淀蛋白质，过量的醋酸铅用无水Na₂SO₄除去(加1－2g无水Na₂SO₄)，摇匀，用水定容，过滤。将滤液倒入滴定管中备用。

2．还原糖的测定：吸取斐林试剂甲、乙各5ml，放入100m，三角瓶中，先由滴定管中滴入样品液10ml，在酒精灯上加热煮沸，加次甲基蓝2－3滴，继续由滴定管中徐徐滴入样品液，边滴边摇动，至溶液蓝色褪尽(出现Cu₂O)，记下样品液用量的毫升数。如此重复滴定三次(第一次为约测，后两次滴定时先加入比实际滴定量少0．5－1ml左右，然后再在沸腾状态下滴定至终点)。糖液浓度最好配制为使其滴定用量在15－50ml范围内(含糖约50mg)。

(四)结果计算

式中：A——10ml斐林试剂相当于还原糖的毫克数；

B——滴定时所用样品毫升数；

1000——由毫克化为克；

待测液定容体积(ml)——本试验中为250。