可溶性糖的测定(索姆吉法测还原糖)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第629页（1949字）

(一)适用范围 本法为微量法，适测含糖较少的样本，如植株茎、叶等，要求在5ml浸提液中含糖0．3－2．5mg范围内。

(二)试剂配制

1．索姆吉试剂 将25g无水Na₂CO₃和25g酒石酸钾钠(KNaC₄H₄O₆·4H₂O)放入2L烧杯中，加水约500ml使溶解，不断搅拌，并将直立漏斗插入液面以下，从漏斗加入75ml10%CuSO₄·5H₂O溶液。再加入20gNaHCO₃，使完全溶解后再加5gKI，然后移入1L容量瓶中，加入250ml0．100N KIO₃，用水定容。用微孔玻璃漏斗过滤，放置过夜后备用。

2．KI-K₂C₂O₄ 溶解2．5gKI及2．5g草酸钾(K₂C₂O₄)于100ml水中，每周现配现用。

3．0．005N Na₂S₂O₃标准溶液：配法与斐林碘量法同，用时稀释。

4．70－80%乙醇溶液 95%乙醇70－80ml，用蒸馏水稀至95ml。

5．饱和氢氧化钡(约6%)。

6．5%硫酸锌。

7．2%盐酸 60毫升浓盐酸加水稀至1L。

8．饱和碳酸钠。

9．6N盐酸。

(三)测定步骤 称取相当于干样为0．5－1．5g的新鲜植株，在电动捣碎机中捣碎，将捣碎样与适量95%乙醇相混，使提取液最终乙醇浓度为70－80%(因鲜样含水，所以用95%乙醇)。如果用干样，则可称取0．5000－1．500g，直接加入约为样重50倍的70－80%乙醇溶液，置70℃水浴上提取30min，提取过程中要经常搅动。然后二者都按下列步骤测定：将已与70－80%乙醇溶液相混的样液，用已知重量的滤纸过滤，滤纸上残渣反复用70－80%乙醇溶液洗涤，对含有叶绿素的样品，应洗至无绿色为止。滤液与洗涤液合并可供测可溶性糖，残渣供测多糖(淀粉)。

将合并在一起的滤液与洗涤液，在水浴上加热以蒸去乙醇，当溶液呈黑色浆状时，边搅边加入饱和氢氧化钡溶液10－15ml。然后滴加5%硫酸锌溶液，以除去多余的钡盐。溶液中加二滴1%酚酞，再逐滴加入硫酸锌直至上层清液呈极淡红色为度。过滤并用蒸馏水洗净沉淀及滤纸，滤液及洗涤液收集于100ml容量瓶中，定容摇匀，即可供可溶性糖的测定。吸取15ml待测液于50ml容量瓶中，加6N盐酸2ml在25℃室温放置过夜或在70℃水浴上加热8min，使蔗糖转化为还原糖。转化结束后，加入甲基红指示剂二滴，用饱和碳酸钠中和至微黄色，定容摇匀。

吸取5ml(约含0．5－2．5mg还原糖)待测液放入25×200mm试管中，加5ml索姆吉试剂，摇动均匀。同时以5ml水代替糖液作空白标定试验。试管口盖以玻璃球或漏斗，在沸水浴中加热15min；小心将试管平稳地置于流动冷水浴中4min。然后去盖，沿管壁加入2mlKI-K₂C₂O₄及3ml2N H₂SO₄(溶液为碱性时不要摇动)，充分摇动混匀，使Cu₂O完全溶解；再于冷水浴中放5min，并摇动2次。然后用0．005N Na₂S₂O₃滴定，以淀粉为指示剂。由空白标定与样品测定所用的0．005N Na₂S₂O₃毫升数之差，从表28－1查得相当的还原糖毫克数。用已知量的标准糖溶液同样进行测定，可以校验表28－1上的数值。

表28－1 索姆吉法还原糖——Na₂S₂O₃当量

(四)结果计算

以此净耗0．005N Na₂S₂O₃的毫升数查表28－1即得还原糖的毫克数。

(五)注释

①用乙醇提取后的样液过滤时如不做碳水化合物系统分析(即不必求知残渣重)，则用一般滤纸即可。

②滤液加热蒸去乙醇后加入饱和氢氧化钡，是为沉淀样品中蛋白质、单宁、色素、胶体等物质。加入硫酸锌是消除多余的钡盐。如剩少量钡盐未除净时，对分析影响不大。