淀粉的测定(比色法)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第633页（1828字）

(一)适用范围 本法适用于含淀粉较少的植株样本。方法是鉴于淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中。当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以蓝色化合物形式(碘—淀粉)沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液，而进行比色测定。

(二)试剂配制

1．80%硝酸钙(W／V)。

2．0．5%碘液 称5．00g结晶碘和10．00g碘化钾，放入研钵中，开始时混合干研，然后加10ml蒸馏水，研至全部碘溶解，将溶液转移至1L容量瓶中，用水定容，混匀后保存于磨口试剂瓶中。

3．5%的含碘硝酸钙溶液取10ml80%硝酸钙装入量筒中，用水稀至160ml，加入3ml0．5%的碘液，混匀。现用现配。

4．0．1N氢氧化钠。

5．1N盐酸。

6．淀粉标准液 称取纯淀粉50mg于研钵中，加3ml80%硝酸钙溶液，研细，转移到100ml三角瓶中，用15ml80%的硝酸钙溶液冲洗研钵，洗涤洗并入三角瓶中。将三角瓶置沸水浴中煮5min。冷却后全部转入50ml容量瓶中，定容。此液为1mg／ml的淀粉标准液。

(三)测定步骤 称取约含有5－50mg的淀粉样品(叶子约1－3g)置研钵中，加5ml80%的硝酸钙溶液，研磨。将研磨成浆状的溶液移入100ml三角瓶中，用10ml80%硝酸钙冲洗研钵，洗涤液并入三角瓶中，瓶口盖以小漏斗，置电炉上加热至沸，再以文火加热3－5min，使样品中淀粉转变成胶体溶液(含淀粉较少的叶子加热3min，含淀粉多的样品可加热5min，但时间不能延长，以免引起淀粉水解)。

煮沸结束后向三角瓶中加入20ml蒸馏水，再用蒸馏水冲洗漏斗。将三角瓶内混合液转入离心管中，以每分钟2000－3000转的离心速度，离心2－3min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100ml容量瓶中(如淀粉含量少时可转入50ml容量瓶中)。三角瓶内混合液多时可分次在同一离心管中离心。并将离心后的浑浊液并入同一容量瓶中。三角瓶及其中沉淀物用5－10ml热水冲洗，同样离心，离心液也并入上述容量瓶中。共洗涤2－3次。定容，摇匀即为淀粉待测液。提取淀粉后留于离心管中的残渣可供测半纤维素用。

吸取5．00－10．0ml淀粉待测液，移入含有2ml0．5%碘的离心管中，混匀，静置15min钟后离心，倒掉上层清液，将底部沉淀(碘—淀粉络合物)用5%的含碘硝酸钙溶液冲洗两次。向冲洗后的沉淀中加入10ml0．1N的氢氧化钠，混匀。将离心管浸入沸水中5min，使沉淀溶解。将溶液转入50ml容量瓶中，加入0．3ml0．5%碘液，用水稀至约40ml，加入2ml1N盐酸，用水定容。摇匀后在580－610nm处测读吸光度。并从工作曲线上查得相应淀粉浓度。

淀粉液工作曲线绘制：吸取每毫升含1mg的淀粉标准液0，0．5，1，2，3，4，5ml于离心管中，用20%硝酸钙将各体积补足至5ml。再向每个离心管加2ml0．5%碘液，混匀，静置15min离心……按上述样品淀粉待测液步骤继续进行。显色后此系列淀粉标准液浓度分别为0，10，20，40，60，80，100μg／ml。根据相应的吸光度绘制工作曲线。

(四)结果计算

式中：C——工作曲线上查得淀粉液浓度(μg／ml)；

50——显色时体积(ml)；

取用量倍数——待测液总体积与用碘沉淀淀粉时所取体积之比；

W——样品重(g)；

10^-4——将微克换算成百分含量。