稻品种的同工酶电泳鉴定法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农作物品种鉴定手册》第176页（1904字）

1．一般说明 该法已在我国和国外用于普通水稻品种和杂交种真实性和品种纯度的测定。目前对水稻品种鉴定的同工酶电泳中，最有效的是酯酶同工酶电泳、细胞色素氧化酶等电泳图谱。但是在应用同工酶电泳鉴定品种前，最好先对当地的主要水稻品种进行电泳，获得正确可靠的电泳图谱，以便在正式鉴定时作为比较，确保鉴定结果的正确性。

2．水稻品种的真实性鉴定

(1)样品制备和加样 从每份送验样品随机数取3－4粒稻谷，去壳，切下胚，或者利用萌动种子，用镊子挑出胚，或者从秧苗剪下大约5－10毫克的绿叶，分别放入玻璃小匀浆器(或小研钵)，然后加入50微升20－40%蔗糖电极缓冲液，充分研磨成匀浆，拨出研磨手柄，放入冰箱(4℃)静置澄清30分钟至数小时。

用微量加样器吸取上清液30－50微升，逐个分别加入胶板样品凹槽里。

(2)加入电极缓冲液和电泳 分别在前槽和后槽加入电极缓冲液。前槽加入电极缓冲液要淹没短玻璃板顶端3－5ml，但不能满过长玻璃板；下槽加至淹没电极，再在前槽加入1滴0．1%溴酚蓝作为前沿指示剂。

前槽接负极，后槽接正极，然后通电电泳。通过浓缩胶电流每板10mA(或150V)，通过分离胶电流每板20mA(或300V)，大约电泳时间1．5－2．0小时。

(3)染色和脱色 剥下胶板，注意不要剥破，用无离水冲洗后移入染色液中，置于30－35℃下，至酶带清晰为止。然后用无离水漂洗后，放入7%醋酸溶液固定和脱色，直至背景清楚。

(4)品种的真实性鉴定 根据电泳结果，从电泳图谱鉴定，如各重复之间谱带是一致的，并且与标准样品是相同的，那么就可确定品种。如各重复之间有差异，则需进行更多单粒种子的电泳，以便取得正确的结果。

3。水稻品种纯度测定 其基本方法同品种真实性鉴定，但取样和结果计算有不同。

(1)取样 从送验样品随机数取50－100粒种子，利用种胚或萌动胚芽，分别研碎和进样。

(2)鉴定和计算 凡是同该品种标准图谱相同的，为本品种粒数；凡是与该品种标准电泳图谱不同的，则为异品种，最后计算出品种纯度百分率。

【参考文献】：

〔1〕西北农学院主编(1979)，作物育种学，农业出版社。

〔2〕浙江农业科学院作物育种栽培研究所(1961)，农作物田间试验记载项目及试行标准，《浙江农业科学》编辑室。

〔3〕徐旭增编着(1958)，种子检验技术，农业出版社。

〔4〕颜启传(1984)，水稻杂交种及三系种子真实性鉴定和品种纯度检验，《种子》1984年第3期第15－18页。

〔5〕颜启传(1986)，水稻杂交种及三系种子鉴定技术的进展，《种子世界》，1986年第8期第2－3页。

〔6〕颜启传(1984)，应用聚丙烯酰胺凝胶酯酶同工酶垂直板电泳法鉴定杂交水稻及其三系种子的真实性和纯度，《浙江农业科学》，1984年第4期第196－198页。

〔7〕叶常丰译(1976)，鉴定水稻品种的性状特征标准化译丛，1976年第2期1－4页。

〔8〕颜启传等译(1987)，1985国际种子检验规程，农业出版社。

〔9〕湖北省标准(鄂B／NY039－85)，杂交水稻“三系”亲本及杂交种田间种植检验操作规程，湖北省标准局。

〔10〕K．Rosta(1975)，Variety determination in rice(Oryza Sativa L．)，Seed Sci．& Technol．，(3)：161－169。