细胞缓慢生长保存法
出处：按学科分类—生物科学 农业出版社《植物细胞培养手册》第289页（2697字）
除上述以及其他状态水或其他物质来取代液态水的方法之外，细胞也可保存在缓慢生长状态下。这方法类似于日本园丁所用的Bonsai法，即将树栽培在小盆中，可保持存活几百年，通过限制各种生长因子而使生长过程减少到最低限度。这方法用于组织培养体，主要使用1-4℃的温度，但也可将温度提高到26℃，而通过低氧压或通过荷尔蒙来降低生长能力。
1．温度 这种方法是由Lundergan和Janick(1979)报道的。他们将苹果的茎尖培养在人工培养基上，然后贮藏在1-4℃下，在储藏12个月后仍能存活，当移回到26℃时，这种茎尖能长出新茎。
2．低氧压 氧气压力可通过环境或分压来调节，这种方法的可行性与应用将作进一步讨论。
另外，Caplin(1959)分析了矿物油覆盖对保存的作用。胡萝卜愈伤组织保存在试管中，上面覆盖一层矿物油以隔绝氧，在26℃下每隔5个月继代一次，这样组织可保持活力三年。
3．激素 用植物生长调节剂来延缓愈伤组织生长也是可行的。2，2-二甲基酰肼琥珀酸(B-9)就是所用的生长调节剂之一。它主要是缩短植物的节间。如用它处理马铃薯，同时降低温度至10℃，光强至4000-50001x，那么两次继代的间隔期可延长到2年，而遗传稳定性并未改变。
4．生活力的鉴定 植物材料生活力的测试方法只有一种，保证贮藏过的组织或细胞重新长成植株。这一方法需要许多时间和精力，因此不适合于基本研究。为了基本研究需要，测试要能在解冻和植物再生长过程中的任何状态下均能进行，当然愈伤组织经解冻后能再生长，也表明细胞是有活力的。
染色法比上述方法费时少得多。有两种不同的具体方法，第一种，是用荧光双醋酯染料，它只作用于活细胞。用一滴荧光双醋酯(0．1%)与一滴解冻的细胞悬浮体混合，在显微镜下用正常光和紫外光观察，数出细胞数，计算两者比例，就是存活百分率。
第二种方法，是用三苯基四唑化氯(TTC)，通过TTC的降解产生大量甲
来鉴定细胞的存活率。这一反应会产生粉红色，具体步骤如下：
①缓冲液：78%Na2HPO22H2O溶液(0．05M)；22%KH2PO2溶液(0．05M)。
②TTC溶液：0．18MTTC溶于缓冲液中。
③大约150mg细胞样本中加3mlTTC溶液，放在30℃下恒温15h。
④将TTC溶液倒干后用蒸馏水清洗细胞。
⑤细胞经离心、抽提后加入7ml酒精(95%)，80℃水浴中放置5min。
⑥抽提物冷却后用95%酒精加到10ml。
⑦用分光光度计于530nm处记录其吸光值(粉红色)。
必须记住两种染色法都不能取代植物的重新生长实验，用染色法只能估计起始生活力的大小。
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