(4)棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法一)

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第51页（3420字）

江苏省农药研究所 方慧珍 于传宗 杨建

样本用甲醇提取，弗罗里硅土柱层析净化，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

真空旋转蒸发器

超声波发生器

K-D浓缩器

层析柱 Φ18mm×370mm

2．主要试剂

丙酮(重蒸)、石油醚(60～90℃，重蒸)、二氯甲烷、无水硫酸钠

pH8缓冲溶液 0．827g磷酸氢二钠+33．916g磷酸二氢钠溶解并定容至1000mL

弗罗里硅土 180～250目

丁硫克百威标准品、克百威标准品、3-羟基克百威标准品

3．检测步骤

3．1 棉叶中丁硫克百威、克百威的提取和净化

3．1．1 提取

称取20g切碎的棉叶，加10mL缓冲液和90mL甲醇，浸泡3h，过滤。

3．1．2 净化

3．1．2．1 液-液分配

取1／2量滤液置于分液漏斗中，加10g氯化钠和100mL水，用50mL×3二氯甲烷萃取，每次2min。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水后，浓缩至近干。

3．1．2．2 柱层析净化

在层析柱中依次装入1cm无水硫酸钠、5g弗罗里硅土和2cm无水硫酸钠，用石油醚预淋。将上述样本残余物用石油醚转移至柱顶，用石油醚／乙酸乙酯／异丙醇(70∶30∶1，V／V／V)洗脱。收集70mL洗脱液，浓缩定容至相应体积，待测。

3．2 土壤中丁硫克百威、克百威的提取和净化

称取50g样本，加30mL缓冲液和70mL丙酮，浸泡过夜。离心，取上清液，残渣再用50mL丙酮浸泡洗涤两次。合并上清液，浓缩去除丙酮。以下净化步骤同棉叶。

3．3 棉籽中丁硫克百威、克百威的提取和净化

3．3．1 提取

称取25g粉碎棉籽样本，加20mL缓冲液、100mL丙酮，振荡提取1h，过滤。滤渣用25mL丙酮洗涤两次。

3．3．2 净化

合并滤液，浓缩除去丙酮，加100mL水和10g氯化钠，分别用100mL、50mL、50mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，浓缩至近干。以下柱净化同棉叶。

3．4 棉叶、土壤中3-羟基克百威的提取和净化

3．4．1 提取

称取10g棉叶(或25g土壤)置于圆底烧瓶中，加100mL0．37mol／L盐酸溶液，于95℃水浴中回流1h。用30mL0．25mol／L盐酸溶液冲洗冷凝管，冷却后过滤，滤渣用50mL0．25mol／L盐酸抽提。

3．4．2 净化

3．4．2．1 液-液分配

合并滤液，置分液漏斗中，加10g氯化钠，用100mL、30mL、30mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，浓缩至近干。

3．4．2．2 柱层析净化

将残余物用石油醚转移至弗罗里硅土柱上，用110mL石油醚／乙酸乙酯(70∶30，V／V)淋洗，弃去。再用石油醚／乙酸乙酯／异丙醇(60∶40∶1，V／V／V)洗脱，收集70mL洗脱液，浓缩至适当体积，待测。

3．5 棉籽中3-羟基克百威提取和净化

3．5．1 提取

称取25g粉碎脱绒棉籽置于圆底烧瓶中，加100mL0．37mol／L盐酸溶液，于95℃水浴中回流2h。用0．25mol／L盐酸溶液30mL冲洗冷凝管，冷却后过滤，滤渣用50mL0．25mol／L盐酸抽提。

3．5．2 净化

合并滤液，置于分液漏斗中，加20g氯化钠和5mL4%十二烷基磺酸钠水溶液，用50mL×3二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，浓缩。柱净化步骤同棉叶和土壤。

3．6 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 1m×3mm玻璃柱，2%OV-17／ChromosorbW，150～180μm

检测温度 柱温240℃；进样口260℃；检测器260℃(丁硫克百威)

柱温为170℃；进样口240℃；检测器240℃(克百威)

柱温170℃；进样口220℃；检测器220℃(3-羟基克百威)

载气 高纯氮，50mL／min

燃烧气 氢气36mL／min，空气150mL／min

进样量 1μL

保留时间 丁硫克百威5．5min，克百威4．5min，3-羟基克百威6．0min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 丁硫克百威4．5×10^－11g，克百威8．4×10^－11g，3-羟基克百威3．4×10^－10g。

最低检测浓度 丁硫克百威0．005mg／kg，克百威0．006mg／kg，3-羟基克百威0．002mg／kg。

回收率 土壤、棉叶和棉籽中添加丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威0．1～5．0mg／kg时，平均回收率分别为82．3%～91．2%、84．1%～94．2%和67．1%～78．5%，见表1-6-8。

相对标准偏差 2．0%～12．4%，见表1-6-8。

表1-6-8 土壤、棉叶和棉籽中丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威添加回收率及相对标准偏差实验结果