抗氧化剂的测定
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《焙烤工业实用手册》第610页（4912字）
(一)没食子酸丙酯(PG)的测定
1．原理
样品经石油醚提取后再用乙酸铵萃取后，没食子酸丙酯(PG)与亚铁酒石酸盐反应生成紫红色的化合物，在波长540nm处测定吸光度，与标准系列对照后定量。本法适用于油脂中没食子酸丙酯(PG)的测定。
2．试剂
(1)石油醚 沸程30～60℃。
(2)乙酸铵 10%及1．67%乙酸铵水溶液。
(3)显色剂 (酒石酸亚铁盐溶液)称取0．100g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和0．500g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O)，加水溶解，稀释至100mL。临用时配制。
(4)PG标准溶液 精密称取50mg没食子酸丙酯(PG)溶于水中，并用水稀释至1000mL。此溶液每毫升相当于50μg没食子酸丙酯(PG)。
3．仪器
分光光度计。
4．操作方法
(1)样品处理：称取10g样品，用100mL石油醚溶解，移入250mL分液漏斗中，加20mL1．67%乙酸铵溶液振荡2min，静置分层，将水层放入125mL分液漏斗中(如乳化，连同乳化层一起放下)，石油醚再用1．67%乙酸铵溶液重复抽取2次，每次20mL，合并水层。石油醚层用水振摇洗涤2次，每次15mL，水洗液并入同一125mL分液漏斗中，振摇，静置。将水层通过干燥滤纸，滤入100mL容量瓶中，用少量水洗涤滤纸，加入10%乙酸铵溶液2．5mL，加水至刻度，摇匀。将此溶液用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液供比色测定用。
(2)测定：精密吸取20mL上述样品提取液于25mL具塞比色管中，加入1mL显色剂，加4mL水，摇匀。
另精密吸取0．0、1．0、2．0、3．0、4．0、6．0、8．0、10mL PG标准溶液(相当于0．0、50、100、200、300、400、500μg PG)，分别置于25mL带塞比色管中，加入10%乙酸铵溶液2．5mL，准确加水至24mL，加入1mL显色剂，摇匀。
用1cm比色皿，以零管调节零点，在波长540nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
5．计算
式中 m1——样品溶液中PG的含量(μg)；
m——样品质量(g)；
V1——提取后样液总体积(mL)；
V2——测定用吸取样液的体积(mL)。
6．结果的表述
报告算术平均数二位有效数。
允许差：相对相差≤10%。
7．注意事项
(1)用1．67%醋酸铵溶液提取没食子酸丙酯(PG)时容易产生乳化现象，需要经过干滤纸过滤，使溶液澄清。如果不产生乳化现象，就不需要过滤。
(2)本法最低检出量为50μg，测定样品相当2g时，最低检出浓度为25mg／kg。
(二)丁基羟基茴香醚(BHA)的测定
1．原理
样品经石油醚萃取后，根据BHA在石油醚相和含水乙醇相中分配系数的不同，使BHA转入72%乙醇相中，再与2，6－二氯醌氯亚胺－硼砂溶液的显色剂作用，生成一种特有的蓝色化合物，在620nm波长下测定其吸光度，与标准系列对照定量。
2．试剂
(1)0．01%2，6－二氯醌氯亚胺溶液：称取0．01g的2，6－二氯醌氯亚胺，溶于无水乙醇中，并稀释至100mL。临用时配制，并于冰箱中保存。
(2)2%的硼酸溶液。
(3)72%乙醇溶液。
(4)石油醚：沸程30～60℃。
(5)无水乙醇。
(6)BHA标准溶液：准确称取100mg BHA，用无水乙醇溶解后，移入100mL容量瓶中，并用无水乙醇稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含丁基羟基茴香醚1mg。使用时将此标准溶液稀释成每毫升含1μg和5μg的丁基羟基茴香醚的标准工作液。
3．仪器
分光光度计。
4．操作方法
(1)标准曲线的绘制：吸取每毫升为1μg的标准溶液0．0、1．0、3．0、5．0、7．0、9．0mL，另取每毫升为5μg BHA的标准溶液3．0、4．0、5．0、6．0、7．0mL，分别置于比色管中，然后加入72%乙醇溶液至总体积为8mL，再分别加入0．01%2，6－二氯醌氯亚胺溶液1mL，充分混匀，再加入1mL硼砂缓冲溶液，摇匀后，静置20min，于620nm波长下，测定光密度，绘制标准曲线。
(2)样品分析：准确称取磨碎样品10g(视样品含量而定)置于150mL带塞的三角烧瓶中，加入50mL石油醚，置于振荡器上振荡20min，静止。吸取上层清液25mL，置于分液漏斗中，以72%乙醇溶液15、10、10mL分次提取，收集乙醇溶液层于50mL容量瓶中，并用72%乙醇溶液定容至刻度，混匀。吸取样品乙醇溶液4mL，加入72%乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入0．01%2，6－二氯醌氯亚胺溶液1mL，以下操作同标准曲线的绘制，根据测得的光密度，从标准曲线上查得相应的BHA的含量。
5．计算
式中 m1——相当于标准的量(mg)；
m——测定时样品溶液相当于样品的质量(g)。
6．注意事项
2，6－二氯醌氯亚胺溶液见光易变质，应将此溶液配制在棕色容量瓶中，最好临用时配制。配制的溶液保存于冰箱中可供3d使用。
(三)二丁基羟基甲苯(BHT)的测定
1．原理
样品通过水蒸气蒸馏，使BHT分离，用甲醇吸收，遇邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色，用三氯甲烷提取，与标准系列比较定量。
2．试剂
(1)无水氯化钙。
(2)甲醇。
(3)50%甲醇。
(4)三氯甲烷。
(5)邻联二茴香胺溶液：称取125mg邻联二茴香胺于50mL棕色容量瓶中，加25mL甲醇，振摇使之全部溶解，加50mg活性炭，振摇5min过滤，取20mL滤液，置于另一50mL棕色容量瓶中，加盐酸(1mol／L)至刻度。临用时现配，避光保存。
(6)0．3%亚硝酸钠溶液，避光保存。
(7)BHT标准溶液：准确称取0．050g BHT，用少量甲醇溶解，移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0．5mgBHT。
(8)BHT标准使用液：临用时吸取1．0mL BHT标准溶液，置于50mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于10μg BHT。
3．仪器
(1)水蒸气蒸馏装置图4－2－7。
图4－2－7 测定BHT的水蒸气蒸馏装置图
(2)甘油浴。
(3)分光光度计。
4．操作方法
(1)样品处理：称取2．00～5．00g样品(约含0．4mg BHT)于100mL蒸馏瓶中，加16g无水氯化钙粉末及10mL水，当甘油浴温度达到165℃恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发生装置及冷凝管。冷凝管下端浸入盛有50mL甲醇的200mL容量瓶中，进行蒸馏，蒸馏速度每分钟1．5～2mL，在50～60min内收集约100mL馏出液，连同原盛有的甲醇共约150mL，蒸汽压不可太高，以免油滴带出，以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。
(2)测定：精密吸取25mL上述处理后的样品溶液，移入用黑纸(布)包扎的60mL分液漏斗中，另精密吸取0．0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0mL BHT标准使用液(相当于0．0、10、20、30、40、50μg BHT)，分别置于黑纸(布)包扎的60mL分液漏斗，加入50%甲醇至25mL。分别加入5mL邻苯二茴香胺溶液，混匀，再各加2mL0．3%亚硝酸钠溶液，振摇1min，放置10min，再各加10mL三氯甲烷，剧烈振摇1min，静置3min后，将三氯甲烷层放入黑纸(布)包扎的10mL比色管中，管中预先放入2mL甲醇，混匀。用1cm比色皿，以零管调节零点，于波长520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
5．计算
式中 A——测定用样液BHT的含量(μg)；
m——样品质量(g)；
V1——蒸馏后样液总体积(mL)；
V2——测定用吸取样液的体积(mL)。
结果表述：报告算术平均值的二位有效数。