鸡胚接种与收获

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《鸡病诊断技术手册》第104页（2451字）

(1)鸡胚尿囊腔接种法(见图3－2)

图3－2 鸡胚尿囊腔接种

①选用发育良好的9－11日龄鸡胚。

②在暗室中照蛋划出气室界限，并在绒毛尿囊膜发育良好区域内避开大血管处做一记号，定为注射接种部位。

③将鸡胚气室朝上放在蛋盘或蛋架上，用碘酊、酒精分别消毒气室顶端和注射部位蛋壳，其后用钢锥在气室顶端和注射部位各打一小孔。

④用1ml注射器抽取接种物，针头斜向(与卵壳成30°角)刺入注射部位，进针4－6mm达尿囊腔，注射接种物。接种量0．1－0．2ml。

⑤另一种方法只开一小孔，即在距气室底边0．5厘米处的卵壳打一小孔，由此孔进针注射接种物至尿囊腔。

⑥接种后，用熔化的石蜡封闭注射孔和气室小孔、气室朝上继续孵化，每天检卵1－2次，弃去接种后24小时内死亡胚胎，这些死胚多由机械损伤或细菌污染所致。

⑦检视出的死胚，孵育48－72小时的活胚(依病毒性性质不同，要求孵化时间各异)，取出置4℃冰箱过夜，以免收获时出血。

⑧取出冷却后的鸡胚，气室朝上于蛋架上，气室端蛋壳用碘酊、酒精消毒后，用镊子击破气室部顶端蛋壳，并沿气室边缘将蛋壳去掉，防止蛋壳落入蛋内。用无菌眼科镊子以无菌操作，撕开或撕去壳膜，刺破绒毛尿囊膜，再用灭菌吸管吸取尿囊液和羊水，置于灭菌容器内，编号、记录后冻存备用。

⑨取出胚胎置于平皿内，观察胚体变化并与没有接种病料，仅注射灭菌生理盐水或PBS的对照鸡胚比较，做好记录。

(2)鸡胚绒毛尿囊膜接种法(见图3－3)

图3－3 鸡胚绒毛尿囊膜接种

①选10－12日龄发育良好的鸡胚。

②照蛋划出气室界限，标清胚胎位置，并在无大血管处做一记号(接种部位)。

③在气室顶端和记号处用碘酊、酒精依次消毒蛋壳，并用钢锥各打一小孔。

④将卵平置于蛋架上，记号处朝上。在注射部位小孔处滴加一滴灭菌生理盐水或PBS，再用吸头或洗耳球抵住气室顶端小孔向外吸致使记号处的绒毛尿囊膜下陷，生理盐水吸入小孔内，形成人工气室(此时可借助于检卵器观察人工气室形成与否)。

⑤用注射器吸取接种物，于注射点刺入约1mm，注入0．1－0．2ml。轻轻旋转鸡胚，使接种物充分接触人工气室的绒毛尿囊膜上。

⑥用熔化的石蜡封闭气室和注射孔，卵平置于蛋盘上继续孵化。24小时内死亡鸡胚弃去，以后每天检视1－2次。

⑦死亡鸡胚和孵化到时间的活胚取出，用碘酊、酒精消毒人工气室周围蛋壳。

⑧将人工气室上方蛋壳打开，去掉蛋壳，撕去壳膜。以无菌操作剪下人工气室部绒毛尿囊膜置灭菌平皿中，用灭菌生理盐水冲洗后展平，观察变化。注意有无痘斑形成，并描述痘斑的形状、大小和数量，做好记录。收集绒毛尿囊膜冻存备用，或制做病理组织学切片等进行进一步鉴定。

⑨各种书籍中介绍的鸡胚绒毛尿囊膜接种方法较多，其他方法在此不做详细介绍。如需要可自行参阅有关资料。

(3)鸡胚卵黄囊接种法(见图3－4)

图3－4 鸡胚卵黄囊接种

①选6－8日龄发育正常的鸡胚。

②将鸡胚气室朝上放在蛋架上，用碘酊、酒精消毒气室部蛋壳，并在气室顶端打一小孔。

③用带有长针头(3－4厘米)的注射器吸取接种物，针头自小孔垂直刺入，进针2－3厘米，即刺至鸡卵长径的1／2处，注入接种物0．2－0．5ml。

④注射后用熔化的石蜡封闭注射孔，继续孵育，24小时内死胚弃去，每天检视1－2次。

⑤取出孵化到时间的鸡胚，气室朝上于蛋架上，以碘酊、酒精消毒气室部蛋壳。去掉气室部蛋壳，无菌操作撕去壳膜，打开绒毛尿囊膜。

⑥取出鸡胚置于无菌平皿中，观察记录病变。而后用镊子夹住卵黄囊脐带处，小心取出卵黄囊置于平皿中，或其他灭菌容器内冻存备用。

⑦必要时用灭菌生理盐水冲去卵黄，将卵黄囊冻存，用于继代或用于其他检测。

⑧病毒可通过卵黄进入鸡胚，鸡胚的含毒量有时也较高，必要时连同鸡胚一起收获，冻存备用。

以上三种鸡胚培养接种方法是较为常用的鸡胚接种途径。至于鸡胚羊膜腔接种法、鸡胚脑内接种法、鸡胚静脉接种法等接种途径，方法较为复杂，操作技术要求较高且熟练，但使用较少，在此不详细介绍，必要时可参阅书籍。