5′－肌苷酸二钠
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第170页（5168字）
化学名：5′－肌苷酸二钠(Sodium 5′－inosinate)
结构式：
分子式：C10H11N4Na2O8P·XH2O
相对分子质量(无水)：392．17
一、5′－肌苷酸二钠的鉴别
1．试剂和溶液
1．1 硫酸铵。
1．2 异丙醇。
1．3 展开溶液 饱和硫酸铵：异丙醇∶水=79∶2∶19(体积比)。
1．4 滤纸 新华层析滤纸Ⅲ号。
2．仪器
2．1 紫外分析仪(波长254nm)。
2．2 微量注射器。
2．3 紫外分光光度计(配10mm石英比色杯)。
3．操作步骤
3．1 试样液的制备 称取样品1．0g(准确至0．0001g)，用水溶解并稀释至100mL，取10．0mL，用新华Ⅲ号滤纸点样，于展开溶剂中展开30cm，取出晾干或烘干，在紫外分析仪中划出紫外吸收斑点，剪于Φ10mm×100mm的小试管中，4．0mL加0．01mol／LHCl溶液；将试管放入80℃恒温水浴，保温30min，冷却为IMP的试样液。
3．2 最大吸收波长的测定 将试样倒入1cm光程的石英比色杯中，在240～265nm范围内，以0．01mol／LHCl作空白，用紫外分光光度计测定其最大吸收波长。
3．3 结果的处理 最大吸收波长在(250±2)nm内，即为IMP。
二、5′－肌苷酸含量的测定
1．操作步骤
将IMP试样液倒入1cm光程石英比色杯中，以0．01mol／LHCl溶液作空白，用紫外分光光度计测定IMP的最大紫外吸光度。
2．分析结果的表述
式中 400——稀释倍数
527——IMP的相对分子质量
11．7×103——IMP的摩尔吸光系数
0．1——样品定容体积，L
m1——样品质量，g
A1——IMP在波长250nm处的吸光度
3．允许差
同一样品两次测定值之差，不得超过1%。
三、食品中5′－肌苷酸二钠的测定
食品中5′－肌苷酸二钠(别名：肌苷－5′－磷酸二钠)用高压液相色谱定量。在畜禽肉、鱼肉中都存在着天然的肌苷酸。因此，当样品是含有上述原料的食品时，测定结果应是样品中的5′－肌苷酸和所添加的总和。
1．试剂和溶液
1．1 腺苷磷酸二钠。
1．2 乙二胺四乙酸二钠 特级。
1．3 高氯酸 60%，特级。
1．4 活性炭[1] 市售活性炭用下述方法精制，用标准筛筛取105～250μm粒径的活性炭200g，加入1．5L(19→200)盐酸溶液搅拌30min，过滤。再用1000mL水及1．5L氨－乙醇溶液，按上述操作重复2次，加1000mL(0．372→1000)乙二胺四乙酸二钠，搅拌30min，过滤。最后用水反复洗至中性，风干保存。
1．5 活性炭柱(见图8－1) 在玻璃柱下端塞少许脱脂棉，注入水至柱高的一半左右，再将300mg活性炭混悬于10倍量的水中，注入柱中，活性炭沉降后，在上端轻轻压上少量脱脂棉，使水流出后，再用(1→100)盐酸溶液约30mL流过，即可使用。
图8－1 活性炭柱
1．6 酶(5′－核苷酸酶) 向牛精液1mL中加入预先将5mg硫酸精朊溶于1mL水的溶液，0～5℃离心分离，取上清液，于50～60℃加热20min，冷却后，离心分离(9000r／min)，离心20min，该上清液即为酶的标准品，可冷冻保存。
1．7 酶溶液 向1．0～1．25单位酶(5′－核苷酸酶)(按照I．U．B酶委员会单位，1单位∶基质腺苷－5′－二磷酸钠，在pH7．537℃1min能生成1μmol无机磷的酶量)和123．2mg硫酸镁中加5mL0．5mol／LTris缓冲液(pH7．5)，使之溶解。
1．8 乙酸铵 特级。
1．9 乙酸 1．5mol／LCH3COONH4缓冲液(pH3．4)：准确取90g冰乙酸，加水溶解至1000mL，作为A液。再称取115．5g乙酸铵溶于水，准确至1000mL，为B液。将B液加入到1000mLA液中，调节pH到3．4，用0．45μm滤膜过滤器过滤。
1．10 0．5mol／LTris缓冲液(pH7．5) 将60．6g三羟甲基氨基甲烷溶于约500mL水中，用盐酸调节pH至7．5，补加水至1000mL。
1．11 Ttris缓冲液 硫酸镁混合液：123．2mg硫酸镁加5mL0．5mol／LTris缓冲液(pH7．5)溶解。
1．12 Tris(羟甲基)氨基甲烷 特级品。
1．13 硫酸(鱼)精朊。
1．14 硫酸镁 特级。
2．仪器
高压液相色谱仪。
3．测定方法
3．1 样品溶液的制备。
3．1．1 水溶性食品：一般准确取相当1～5mg5′－肌苷酸钠的样品20g以下，加水约90mL，用(19→200)盐酸溶液调节pH约为2后[2]，补加水准确至100mL，即为样品溶液。
3．1．2 水不溶性食品：一般准确取相当1～5mg5′－肌苷酸钠的样品20g以下，加入30mL(2→25)高氯酸溶液，捣碎匀浆，用(2→25)高氯酸溶液定量的洗至离心管中，离心分离(在冷冻条件下，以10000r／min离心分离10min)，分取上清液，再向残渣中加30mL(2→25)高氯酸溶液，同样操作重复2次，合并全部上清液，补加(2→25)高氯酸溶液，准确至100mL，即为样品溶液[3][4]。
3．2 测定液的制备 准确取样品溶液VmL[5]，通过预先准备好的活性炭柱，然后用约20mL水冲洗，直至洗液pH接近中性，接着用20mL(1→10)氨水[6]，以0．5mL／min流速洗脱，收集洗脱液。在水浴上蒸发至干，再准确加10mL水，混匀溶解，即为活性炭处理液。
分别准确取活性炭处理液1mL，加入2个试管中，其中一管加0．2mL酶液，另一管加0．2mLtris缓冲液·硫酸镁混合液，于37℃恒温水浴中保持60min，然后冷却至常温，即为测定液A、B。
3．3 标准液的制备 准确称取5′－肌苷酸钠250mg，加水溶解至100mL，再取此液2mL，补加水至100mL，即为标准原液(冰箱中可保存1周)(此液1mL含5′－肌苷酸钠50μg)。分别准确取标准原液1mL，加入两个试管中，按3．2与活性炭处理液同样操作，即得标准液As、Bs。
3．4 测定方法。
3．4．1 测定条件：高压液相色谱仪，按下述条件进行测定。
填充剂：多孔性离子交换树脂
柱：内径4．6mm，长25cm
柱温：60℃
洗脱剂：乙酸、CH3COONH4缓冲液(1．5mol／L，pH3．4)
流速和压力：1．5ml／min，约0．7MPa
测定波长：254nm
3．4．2 定量：分别准确取5μL标准液As、Bs及测定液A、B，注入液相色谱仪中，从测得的谱图中求出各自峰高，按式(8－2)计算样品中5′－肌苷酸钠含量(mg／100g)。
4．分析结果的表述
式中 m1——标准5′－肌苷酸钠用量，mg
m——取样量，g
V——样品溶液用量，mL
As——标准液As测得的5′－肌苷酸峰高
Bs——标准液Bs测得的5′－肌苷酸峰高
A——测定液A测得的5′－肌苷酸峰高
B——测定液B测得的5′－肌苷酸峰高
注：[1]活性炭的精制活化，不是使吸附能力增加而是降低，使吸附的5′－肌苷酸能定量地洗脱、溶出。
[2]5′－肌苷酸在pH2～4时，易被活性炭吸附。
[3]含油脂多的食品在离心分离时，油脂在离心管的上层，可用吸管把清液取出，不使油脂混入清液中，必要时用硅藻土过滤。
[4]为了从水不溶性食品中抽取5′－肌苷酸钠，也可用热水。
[5]一般用10mL，但是，为了使5′－肌苷酸含量为0．25～0．5mg，可适当增减样品溶液量。
[6]用(1→20)氨水可以将5′－肌苷酸从活性炭上洗下来，也可以用氨－乙醇混合液、氨－正丁醇－乙醇混合液〔氨水∶水∶正丁醇∶乙醇(体积比)(7∶43∶5∶45)〕洗脱，但氨水、醇系比氨水易将活性炭吸附的食品中褐色物与5′－肌苷酸一同洗下来。
[7]测定液中的5′－肌苷酸钠浓度。
