从猪胸腺中提取胸腺素

出处:按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第313页(1233字)

制法

(1)提取 将采集的新鲜或冷冻的胸腺用绞肉机绞碎,倒入搪瓷桶中,加入2倍量的0.9%的氯化钠溶液,用50%的盐酸调节pH值至3.0,然后在10℃以下,搅拌提取4~5h。用四层纱布过滤,滤渣可加1倍质量的0.9%氯化钠溶液,再提取1h左右。合并两次提取液,用30%的氢氧化钠溶液调节pH值至7.0左右,在80℃的条件下保温15min,然后冷至10℃以下,离心除去杂蛋白,收集澄清液。

(2)沉淀 把澄清液移入另一搪瓷桶中,在搅拌下加入预冷至10℃以下的冷丙酮(加量为澄清液体积的5倍),然后静置4~5h,用绸布滤除丙酮液(可回收丙酮),收集沉淀,用丙酮、乙醚脱水,得淡黄色丙酮粉。

(3)除杂蛋白 将淡黄色丙酮粉溶于6倍体积的pH值为7.0、0.01mol/L CPB溶液中,搅拌30min,收集离心液(沉淀后可再处理一次),加入25%硫酸铵,调节pH值至7.0,静置3~4h。再收集离心液,用50%盐酸调节pH值至4.6,加25%硫酸铵,搅拌30min,在4℃下静置2~3h,用离心机收集沉淀。

(4)透析 把沉淀溶于5倍质量的蒸馏水中,调节pH值至7.0,然后装入透析袋中对冷蒸馏水透析至无硫酸根离子(用氯化钠检查无白色沉淀为止),再用pH值为7.0、0.01mol/L CPB溶液透析10h左右,将透析液离心,收集上清液。

(5)柱层析将离心液经DEAE-C柱吸附,然后用pH值为4.0的0.002mol/L CPB溶液洗脱,收集洗脱液,加入4倍量体积的冷丙酮,搅拌均匀后,静置3~4h,过滤收集沉淀。

(6)除杂质 把沉淀物溶于冷的蒸馏水中,用30%的盐酸调节pH值至6,然后加入等量乙醚剧烈搅拌1h左右,用离心机离心(20min,1500r/min),收集离心管中层清液(用吸管吸),再用等量乙醚处理清液2次,合并清液,加入5倍体积的冷丙酮,搅拌均匀,静置2~3h,滤除丙酮液(回收丙酮用),收集丙酮粉,即可出售给制药厂灌封用。

胸腺位于猪胸腔前部,10~12月龄猪的胸腺体最发达,每头猪的胸腺为20~65g。猪胸腺柔软呈灰黄色或淡黄色,外部结缔组织被膜具有明显的小叶结构,与胰脏很相似。采集应确保新鲜。

胸腺素是很有发展前途的药物,主要用于自身免疫病症,还可治疗重症肝炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、复发性口疮。国外主要用于治疗原发性细胞免疫缺陷病和某些肿瘤。

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