溶菌酶(从蛋清和蛋壳水中提取)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第326页（1899字）

制法

(1)从蛋清中制备溶菌酶

①预处理 取新鲜或冷冻鸡蛋清(冷冻蛋清要让其自然融化)，用试纸检查pH值在8．0左右，然后过铜筛，除去杂物。

②吸附 将处理过的鸡蛋清冷至5℃左右，移入搪瓷桶中，在搅拌下加入已处理好的724树脂(按质量分数14%加724树脂)，使树脂全部悬浮在蛋清中，在0～5℃条件下，搅拌吸附6h左右，然后在0～5℃静置20h以上，待分层后，弃去上层清液。下层树脂用清水反复洗几次，以除去杂蛋白，最后滤干树脂，移入另一搪瓷缸中。

③洗脱 在上述树脂中加入等体积pH值6．5、0．15mol／L的磷酸钠缓冲液，搅拌洗脱20min，滤除洗脱液(含杂物)，再按同法处理2次。最后将除去杂物的树脂，加入等质量浓度为10%的硫酸铵溶液，搅拌洗脱30min，滤出洗脱液，重复洗脱树脂3次，滤出洗脱液，一起将洗脱液倒入沉淀缸中。

④沉淀 在沉淀缸中按洗脱液质量加入质量分数32%的固体硫酸铵粉末，搅拌使其完全溶解，在4～10℃处放置过夜，虹吸去上清液，用离心机分出沉淀物。

⑤透析 将沉淀物用蒸馏水全部溶解，然后装入透析袋中，在10℃水中透析过夜，以除去硫酸铵，收集透析液。

⑥盐析 将透析液移入搪瓷桶中，用4%的氢氧化钠溶液调节pH值至8．5～9．0，如有白色沉淀，应立即于离心机上离心除去，然后用1∶5(质量比)的盐酸(即1kg盐酸加5kg水)调节pH值至3．5，最后加入5%的固体氯化钠，搅拌均匀，置冷处48h左右，于离心机上收取溶菌酶盐析物。

⑦干燥 将沉淀的盐析物倒入丙酮中，不断搅拌，放置2h左右，滤除丙酮(回收)，沉淀物干燥即得溶菌酶产品。

(2)从蛋壳制备溶菌酶

①提取 取新鲜的或冰冻的带有残留蛋清的蛋壳膜或粘壳蛋的蛋壳，用水冲洗干净后，敲碎，放入提取锅中，按蛋壳量加入3／4质量的1%氯化钠溶液，搅拌均匀，用1∶10(质量比)盐酸调节pH值至6．0，继续搅拌，加热到40℃左右，提取30～40min，随时调节pH值至6．0。抽提完毕后，用尼龙窗纱过滤，收集滤液备用，滤渣再加1／2质量的1%氯化钠溶液抽提一次，合并两次滤液，滤渣可放入下批再提取。

②去除杂蛋白 将上面的提取液用20%～30%乙酸调节pH值至4．6，在沸水中迅速加热到75～80℃，促使卵蛋白在等电点沉淀，用冷水速冷至室温，沉淀10h左右，然后用尼龙布吊滤，除去杂蛋白，收集滤液。

③聚丙烯酸凝集 把滤液用20%氢氧化钠溶液调节pH值至6．0左右，搅拌滴加10%的聚丙烯酸(用量为滤液体积的1／4)。当凝聚物产生后，溶液的pH值为3．0左右。静置15～30min，凝聚物黏附于容器底部，倾去上层清液。

④凝聚物解离 在盛有凝聚物的容器中，加入少量蒸馏水(10kg蛋壳应加60ml蒸馏水)，搅拌下滴加少量纯碱，使凝聚物溶解，调节pH值至4．0左右，然后滴加50%氯化钙溶液，使溶菌酶离解。用布吊滤，分出沉淀(可用硫酸处理后，除去硫酸钙，回收聚丙烯酸)，收集滤液。

⑤结晶 在滤液中，滴加20%氢氧化钠溶液至pH值为9．5，静置4～6h，用尼龙布过滤，分出清液，再加氯化钠至浓度达5%，静置3～4h，产生粗结晶。

⑥再结晶 粗结晶用pH值4．6的乙酸溶解，过滤后，分出不溶物，静置再结晶，干燥后即得产品。每千克蛋壳膜可得再结晶溶菌酶约1g左右。

溶菌酶，又称胞壁质酶或N－乙酰胞壁质聚糖水解酶。是一种碱性球蛋白，非常稳定。广泛应用于医学临床，主要用于治疗五官科多种黏膜疾病，也用于治疗皮肤科带状疱疹、扁平疣等。在食品工业中用于食品的抗腐保鲜剂。