叶绿素铜钠盐

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第108页（3212字）

结构式

分子式：C₃₄H₃₁O₆N₄CuNa₃(叶绿素铜三钠)，C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂(叶绿素铜二钠)

相对分子质量：724．17(叶绿素铜三钠)，684．16(叶绿素铜二钠)

一、叶绿素铜钠盐的鉴别

1．物理状态

为墨绿色粉末。易溶于水，略溶于醇和氯仿，微溶于乙醚。偏酸性(pH6．5以下)。如果钙离子存在时则有沉淀析出。

2．吸收峰的测定

取样品0．1g溶于水，并稀释至100mL。此液最大吸收峰为405nm与630nm，吸光度之比E₄₀₅／E₆₃₀为3．2～4．0。

3．铜钠离子试验

将样品灼烧灰化后溶于10mL3mol／LHCI中，在水浴上加热溶解，过滤后稀释至10mL，以此试液，进行如下试验。

3．1 取试液作焰色试验。开始呈绿色，后呈黄色。

3．2 取试液5mL，加入0．1%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液0．5mL时，产生褐红色沉淀。

4．pH

用重蒸馏水把样品配成1%溶液，用酸度计测定其pH为9．0～10．7。

二、叶绿素铜钠盐百分消光系数及消光比测定

1．试剂和溶液

1．1 磷酸盐缓冲液的制备(pH7．5)取0．15mol／LNaHPO₄21份与0．15mol／LK₂HPO₄4份混合。

2．仪器

751分光光度计。

3．测定方法

称取经105℃干燥1h的样品0．1g(称准至0．0002g)，加水溶解，移入100mL容量瓶中加水至刻度摇匀。再将上述水溶液以pH7．5磷酸盐缓冲液，稀释100倍摇匀，即为0．001%溶液，用分光光度计测定，在15min内以1cm的比色杯在405nm与630nm波长测定吸光度(E)，以缓冲液作空白对照。

4．分析结果的表述

式中 1000——试样1mg折算到1的系数

三、食品中叶绿素铜钠盐的测定

1．试剂和溶液

1．1 聚酰胺粉 80目。

1．2 氢氧化钠 0．1mol／L溶液。

1．3 甲醇。

1．4 醋酸铵 0．1mol／L、0．2mol／L溶液。

1．5 氯化铵。

1．6 氢氧化铵。

1．7 冰乙酸。

2．仪器

2．1 分光光度计。

2．2 G3耐酸漏斗。

2．3 抽滤瓶(500mL)。

2．4 玻璃柱(0．7cm×5cm)可自制。

2．5 玻璃棉 预先用2mol／LNaOH浸泡，再用水漂洗干净，用2mol／LHCl浸泡，再用水漂洗干净，最后用蒸馏水洗至中性，烘干备用。

3．测定方法

3．1 饮料酒 将酒样摇匀，用移液管吸取10～20mL于100mL烧杯中，加入0．2mol／LCH₃COONH₄溶液30mL，在55～60℃的水浴加热10～15min(以驱除二氧化碳)，调pH5～6。预先称取0．5g聚酰胺于小烧杯中，加蒸馏水调成浆状，加入样品中，充分搅拌，使样品中的着色剂完全被吸附，然后将样品液置于G3耐酸漏斗中抽滤，用约200mL蒸馏水分次洗涤。再用0．1mol／L氢氧化物－甲醇(1∶10)分数次解吸着色剂，收集全部滤液，并用上述溶液定容至50mL，用分光光度计在1cm比色杯、405nm波长下测定其吸光度。

3．2 糖果 将样品置于瓷研钵中研细，混匀，保存在干燥瓶中备用。

准确称取50g已研细的样品于100mL烧杯中，用0．1mol／LCH₃COONH₄溶解后转移到250mL容量瓶中，并用原溶液稀释至刻度。

吸取上述溶液50mL于100mL烧瓶中，加入预先称取并调制的0．5g聚酰胺粉浆，充分搅拌，使样品中着色剂完全被吸附后，用G3耐酸漏斗抽滤，用约200mL60～70℃蒸馏水充分洗涤，用0．1mol／L氢氧化钠－甲醇(1∶10)分数次解吸着色剂，收集全部滤液，并用上述溶液定容至50mL，同饮料酒一样进行吸光度测定。

3．3 青豆、苦瓜 将样品置于捣碎机中充分捣碎，称取2～5g，混匀浆液于50mL烧杯中，加15mL冰醋酸抽提着色剂，搅匀后放置片刻，转移到小玻璃柱(下垫玻璃棉)中，抽提，用10mL冰乙酸洗涤残渣数次，直至着色剂全部被解吸完。

将着色剂抽出液合并于100mL烧杯中，加1mol／L醋酸调到pH5～6，加入预先称取调制好的0．5g聚酰胺粉浆，充分搅拌，将样品中着色剂完全被吸附，用G3耐酸漏斗抽滤，用约200mL蒸馏水充分洗涤，用0．1mol／L氢氧化钠－甲醇溶液(1∶10)分数次解吸着色剂，收集全部滤液，并用上述溶液定容至50mL，同饮料酒一样进行吸光度测定。

3．4 标准曲线 分别配制以解吸液为介质、浓度为2μg／mL，4μg／mL，6μg／mL，8μg／mL，10μg／mL的标准系列，同样品操作法进行吸光度测定，绘制标准曲线。

4．分析结果的表述

以所得样品溶液的吸光度，在标准曲线上查出对应叶绿素铜钠盐浓度(μg／mL)，按式(5－9)计算样品中叶绿素铜钠盐含量(μg／g)：

式中 ρ₁——从标准曲线上查得的叶绿素铜钠盐浓度，μg／mL

V——定量体积，mL

m——样品质量，g