柑橘脱毒苗的培育
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树育苗手册》第321页（2237字）
柑橘脱毒苗的培育可以通过茎尖微芽嫁接法和热处理法获得无毒材料。
1．茎尖微芽嫁接法 柑橘体内除胚中不存在病毒外，茎尖中也不存在，所以离体培养成年树的茎尖可获得越过童期的脱病毒苗，茎尖微芽嫁接法主要技术流程包括砧木培养、茎尖培养、嫁接、嫁接苗的移栽。
(1)砧木培养 将果实中充分发育的种子取出，放进砂布内包好，先在45℃左右湿水中浸泡5分钟，再放入55～56℃热水中处理50分钟。取出后吸干水分。在无菌条件下，将种子浸泡在70%酒精溶液中片刻，再放入8%漂白粉澄清液或0．1%升汞中消毒5～10分钟，然后用无菌水冲洗3～5次。剥去种皮，接种于砧木培养基上：MS无机盐类+3%蔗糖+1%琼脂，pH5．7。每支试管接种2～3粒种子，置于黑暗恒定27±2℃温度下发芽培养。待幼苗生长13～14天可作嫁接砧木。嫁接前置于室内散射光下培养1～2天。
(2)茎尖培养(接穗繁殖) 从果园中结果母树上选择生长旺盛的新梢，取枝顶端约5厘米嫩梢，在室内剪成1～1．5厘米长。用自来水冲洗后在75%酒精中消毒10秒钟，再用8%漂白粉过滤液中消毒5分钟，以无菌水冲洗3～5次。将消毒好的嫩梢进一步除去小叶，最后切取1～2毫米茎尖，带2～3个叶原基，接种在MS+BA0．25毫克／升+NAA0．1毫克／升的培养基上。亦可直接作嫁接用。
(3)无菌条件下的茎尖嫁接 可采用倒T形切接和嵌芽腹接。倒T形切接法：将砧木苗从试管内取出，切去过长的根，缩短至4～6厘米。切去茎的上部使上胚轴剩下约1～1．5厘米，把子叶和腋芽去掉，在上胚轴前端切出倒T形缺口，然后把事先剥好的带2～3个叶原基，高约0．2～0．4毫米的茎尖切下，立即转接到制备好的倒T形缺口上(图8－2)，茎尖下切口要平，以利成活。接穗经消毒剂消毒后，残留的消毒剂必须除净，否则嫁接后接穗易发黄，变黑以至死亡。因此，接穗在无菌水反复冲洗后最好浸泡在无菌水中，随取随接，接后容易成活。在剥取茎尖时应特别小心，以免把顶端分生组织和小叶一同切掉。为避免感染病原菌的组织传染其他组织，在每次切除砧木和接穗之后，都要换用一套切割工具。倒T形缺口的切取方法：先在垂直于茎的方向离去顶表面约1～1．5毫米处，横切一刀，接着在切线中间取0．5毫米的宽度处，朝着去顶表面切两刀，再把两刀之间的砧木去掉，一个倒T形缺口即呈现出来。嫁接时，一定要使茎尖底部和砧木切口表面形成层紧密相接。然后将嫁接好的植株入盛有液体培养基的试管中。液体培养基为MS无机盐+VB10．1毫克／升+VB60．5毫克／升+烟酸0．5毫克／升+肌醇100毫克／升+蔗糖7．5%，pH5．7。管内放有中央开孔的滤纸架，根部穿过小孔以固定试管苗。
图8－2 倒T形切接法
嵌芽腹接法：方法与倒T形基本相同，只是嫁接时不切去砧木茎端，在叶子以上茎段1．5厘米处横切两刀，纵切两刀，切成小的口字形缺口，然后将茎尖接在缺口下侧横切面上(图8－3)。
图8－3 嵌芽腹接法
嫁接后的植株先生长在约800勒克斯的弱光下，每天光照12～16小时，温度25～30℃，待长出新叶后，可将光照增至1500～2000勒克斯。培养1周后，用20倍放大镜检查倒T形切接苗，如接芽已成活，应在无菌条件下取出嫁接苗，用解剖刀切除砧木萌蘖，然后放回试管中继续培养。对于接芽已成活的嵌芽腹接苗，同样取出，切去接芽以上的砧木茎段，然后放回试管中。
(4)嫁接苗的移栽 当嫁接苗展开正常叶(第一片叶长约2厘米左右时)，便可移栽。移栽前要对试管苗进行适当的光照锻炼，移栽时大气湿度大，25℃温度最好。移栽时用镊子将小苗轻轻取出，洗掉附着的培养基，栽于营养钵中。营养基质可选择普通苗圃土、炉灰渣、腐熟干粪(均要过筛)各占1／3混合而成，也可选用椰糠、塘泥、腐殖土、细沙按1∶3∶3∶3混合而成。移栽时应使根系紧紧与土壤接触，土壤表面铺上一层干净的细沙，浇足MS培养液，用塑料薄膜或大烧杯罩住，以减少水分蒸发，半个月后，待新叶长出后方可去罩。栽后应在高强度光源和27℃恒温培养室内生长1～2个月后，可移至隔离温室或网室中，使其继续生长，植株到一年半的龄期，就可开花结果。
2．热处理脱毒 若在嫁接前将材料进行合适的热处理，可明显提高脱病毒效果。处理方法是：一容器将材料盛好，罩以塑料罩置于温室中的一间暗室内，或置于热处理箱内，白天28～40℃，夜间27～28℃，如此处理一段时间(表8－3)，速衰病、脉突病、鳞皮病、杂色花叶病等病毒被破坏。也可将少量水放在容器底部进行湿热空气处理。或用旧培养箱，将供作接穗用的幼芽放在无菌培养器内，再置于干燥箱内，在50℃下处理3～22小时。
表8－3 柑橘热处理脱毒
