试管稀释法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第122页（1174字）

一、药物原液的配制

见表8-1。

表8-1 常用抗菌药原液的配制

注意如下事项。

1．某些抗菌药物，规格不同，应按实际含量配制成所需浓度。

2．pH6．5磷酸盐缓冲液的配制：取mol／L无水磷酸氢二钠31．8ml，加mol／L磷酸二氢钾68．2ml即成。

3．pH4．5邻苯二甲酸氢钾的配制：称取邻苯二甲酸氢钾(KHC₈H₄O₄)40．8g，加1mol／L氢氧化钠溶液38．9ml，再加蒸馏水至1000ml即成。

4．某些抗菌药物，其商品常制成钠盐、硫酸盐或伴有赋形剂，如磺胺嘧啶钠218mg相当于磺胺嘧啶200mg。因此，在配制时应换算其实际含量。

5．卡那霉素、新霉素等易潮解，称取时动作要快，并注意防潮。配制后应于冰箱冰冻状态保存。

二、培养基的选择

1．一般细菌，用肉浸液培养基或肉膏液培养基。

2．营养要求较高的细菌，用含0．5%羊血或0．5%兔血的肉浸液或肉膏液培养基。

3．测定细菌对磺胺类药物的敏感性，应用无蛋白胨肉浸液或肉膏液培养基。

三、菌液准备

取一接种环试验菌接种于1ml上述适宜的培养基中，37℃培养，一般细菌，培养6h，再用肉浸液作1∶1000稀释备用；生长繁殖较慢的细菌，如链球菌、肺炎球菌等，培养18h时，再用血液肉浸液作1∶10稀释备用。

四、试验方法

取无菌试管12支，按表8-2所示方法，将药物原液稀释后，再每管接种一定量试验菌菌液，充分混匀后，置37℃培养。

表8-2 对抗生素、呋喃西林的敏感性试验方法

五、结果观察和报告

将试管置37℃培养18h后，观察结果。凡药物最高稀释管中无细菌生长者，该管的浓度即为试验菌对此药物的敏感度。则报告试验菌对多大量的某药敏感。若某些药物肉眼不易观察有无细菌生长，可取一接种环于适宜的平板上，37℃培养18h后观察结果。如无细菌生长，该管的浓度即为试验菌对此药物的敏感度(表8-4)。

表8-3 细菌对磺胺类药物的敏感试验方法

表8-4 试管稀释法敏感度的参考标准

* IU=国际单位。