碱性磷酸酶的测定

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第218页（1307字）

磷酸酶有多种，在碱性(此处指pH＞9)情况下测定的称碱性磷酸酶。

将被测细菌培养于固体培养基24h，括取细菌，悬浮于pH9．0以上的缓冲液中，如pH9．0的0．1M巴比妥钠盐酸缓冲液(溶2．062g的巴比妥钠于100ml蒸馏水中成0．1M的溶液，以此液93．6ml与0．1M的HCl6．4ml混和即成)或pH9．0的0．2M Tris缓冲液或pH10．4的甘氨酸氢氧化钠缓冲液，使菌液浓度为每ml含菌300亿，即10倍于麦氏比浊管第10管的浓度。取此菌液0．3ml置于无菌小试管中，另加0．3ml的基质，即用配菌液同一缓冲液所配成的0．01M的对位硝基磷酸苯脂(NO₂·C₆H₄·O·PO₃H₂，para-nitrophenyl phosphate)溶液，置于37℃下6h，取出观察，如有碱性磷酸酶活性，则将基质分解为对位硝基苯酚与磷酸，前者为黄色，故现黄色者为阳性反应。

1．却浦曼氏(Champman)培养基

(1)成分

牛肉膏 1g

胰蛋白胨 10g

甘露醇 10g

氯化钠 75g

琼脂 15g

蒸馏水 1000ml

0．4%酚红水溶液 6ml pH7．4

(2)制法 上述成分加热溶解，校正pH后加入酚红溶液，121℃15min灭菌，同时倾注平板。

2．缓冲葡萄糖肉汤

(1)成分

蛋白胨 10g

氯化钠 10g

葡萄糖 1g

磷酸氢二钠 2g

肉浸液 1000ml pH7．6

(2)制法 上述各成分加热溶解，按需要分装，121℃15～20min灭菌。