瘤座孢科
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第491页（9033字）
分生孢子梗无色；分生孢子有一至多个隔，无色或鲜色，近梭形至镰刀形、椭圆形至圆筒形，偶有球形。本科常见四个属，仅发现一个属真菌引起动物中毒，这个属就是镰孢属(Fusarium)。
本属气生菌丝长0．5～1．0mm或低于0．3～0．5mm，有些形成稀疏的气生菌丝，甚至完全无气生菌丝，由基质菌丝直接生出粘孢层，内含分生孢子。小分生孢子头状着生，少数种链状或假头状和链状一并着生。
小分生孢子，卵形、梨形、椭圆形、长椭圆形、纺锤形、披针形、腊肠形、柱形、锥形和圆形，有1～3个隔。
大分生孢子，镰刀形、线形、纺锤形、披针形、柱形、腊肠形、蠕虫形、鳗形弯曲形和直或近直形。顶细胞喙形、锥形、钩形、线形和柱形，逐渐变细或突然收缩。
厚垣孢子间生或顶生，单生、双生、串生和结节生，无或具不同颜色，壁光滑或粗糙。
本属真菌65个种，55个变种，已发现有毒镰孢27种，有毒代谢产物27种。
一、拟分支孢镰孢(Fusarium sporotrichioides)
本菌寄生于燕麦、小麦、玉米和豌豆上。产生8种毒素，主要有T-2毒素(T-2 toxin)、丁烯酸内脂(Butenolide)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone)和新茄病镰孢烯醇(Neosolaniol)。这些毒素引起动物骨髓造血组织坏死，内脏出血，营养不良性白细胞增多；末梢坏死；不孕和流产。
1．真菌检查
(1)分离
粒饲料，取10g样品放入250ml无菌三角瓶中，加100ml无菌水，摇洗一次，用稀释法分离其中真菌。洗过的粒饲料，用1%升汞液浸1min，然后用无菌水洗3～5次，然后将料粒接种在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平皿内，每皿4～5粒。
粉饲料，取10g样品放入250ml三角瓶中，加100ml无菌水(内含0．2%Tween-80)，振摇均匀，10倍稀释至10万倍，每10倍稀释度各培养5个PDA平皿，每皿0．1～0．2ml。
饲草，将样品剪成1cm小段，无菌水洗涤3～5次，移植在PDA平皿内。
接种样品置温箱中25～27℃培养2～5天，从中挑选单个菌落，移植于PDA斜面上，25～27℃培养15天以上，进行镜检。
(2)形态特性
培养性状，气生菌丝白色，高、棉絮状，疏松或粒状。基质呈现暗紫色。
镜检特性，厚垣孢子串状，结节状、间生，赭色。大分生孢子镰刀形至纺锤形，椭圆状弯曲，向两端逐渐变细，顶细胞较短．逐渐变细，基部有足细胞，典型5隔，成堆时呈赭色或橙红色。大分生孢子大小为：3隔24～39×3～4．9μm，4隔28～48×3．5～4．5μm，5隔43×4．18(32～51×3．5～5．5)μm。
2．毒素检测(T-2毒素)
(1)提取 饲料样品10g，加乙酸乙酯提取2次，每次250ml。用5%硫酸洗涤乙酸乙酯提取液3次，每次60ml，乙酸乙酯层在真空条件下浓缩成油状物。溶于180ml甲醇—水(1∶1V／V)中。用正己烷除掉其中杂质3次，每次60ml。甲醇—水层加水处理，成为1∶1甲醇水溶液。然后用氯仿—乙酸乙酯提取3次，每次200ml，在减压条件下浓缩，得褐色油状物。
(2)柱层析 以硅胶(100～200目)为载体，每两克油状物用150g硅胶，装柱后用氯仿—丙酮(6∶1V／V)洗脱，洗脱液在水浴上减压浓缩至2～5ml(依据样品量)，然后在苯—乙烷中2次重结晶，得白色针状结晶。
(3)薄层层析 层析板20×10cm，硅胶G(10～40μm)2．5g，加蒸馏水8．0ml，制成薄板，110℃干烤1h，在板下沿3cm处点样，间距2cm，按0．5、1．0、1．5和2．0μl各点一点，在层析槽内用氯仿—甲醇(95∶5V／V)展开，至前沿15cm处，取出层析板，在紫外灯下检查，Rf0．55处呈天蓝色荧光斑点。用浓硫酸喷雾层析板，120℃加热20min，Rf0．55处呈灰色斑。
3．鉴别诊断 本菌同三隔镰孢(F．tricinctum)区别如表21-1．
表21-1 拟分支孢镰孢与三隔镰孢鉴别表
二、木贼镰孢(Fusarium equiseti)
本菌在稻、小麦和其他杂草上寄生和腐生。产生11种毒素，主要有丁烯酸内酯，二醋酸基藨草镰孢烯醇(Diacetoxyscirpenol)，T-2毒素，玉米赤霉烯酮，镰孢烯酮-x(Fusarenon-x)。这些毒素引起牛末梢坏死和动物骨髓造血组织坏死、内脏出血、不孕和流产。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性 培养性状，气生菌丝白色，苍白橄榄色，高，疏松，棉絮状或低短较紧密。
镜检特性，厚垣孢子串状和结节状，多数间生，少数顶生，圆形，成堆时暗肉桂色。大分生孢子，纺锤形，纺锤—镰刀形，中部直径最大，向两端狭细，椭圆状弯曲。顶细胞均匀逐渐狭细、圆锥形，平直或略弯曲。基部有明显足细胞。多呈典型5个分隔、成堆时淡赭色，橙红到玫瑰红色。PDA培养基培养15天大小为：3隔29～41×3．7～4．5μm，4隔31～41×4．5μm，5隔41～47×4．49～5．17μm，6隔40～47×5．2～5．8pm，7隔53～59×5～6．8μm。
2．毒素检测(丁烯酸内酯)
(1)提取 饲料样品用乙酸乙酯提取，过滤后，溶液减压浓缩至干，加少量乙酸乙酯溶解，再加乙酸乙酯-环己烷使其成白色结晶，除上层溶液，结晶加少许乙酸乙酯使其溶解，备薄层层析用。
(2)薄层层析 用硅胶G制板(同T-2毒素)，点乙酸乙酯提取物，以甲苯-乙酸乙酯-90%甲酸(6∶3∶1v／v／v)展开Rf值0．1，三氯甲烷-甲醇(9∶1v／v)展开，Rf值0．57。层析板用茴香醛(P-anisalde hyde)处理，在可见光下呈灰色斑点，2，4-二硝基苯肼处理，100℃加热15min，呈黄色斑点。
3．鉴别诊断 本菌同泡木贼镰孢(Fusarium equiseti var bullatum)和藨草镰孢(Fusarium scirpi)的区别如表21-2。
表21-2 三种真菌的鉴别表
三、禾本科镰孢(Fusarium graminearum)
本菌寄生于小麦、玉米、水稻、高粱、豆类和油菜上。产生9种毒素，主要有玉米赤霉烯酮(Zearalenone)、丁烯酸内酯、脱氧雪腐镰孢烯醇(Deoxynivalenol)和镰孢烯酮-x等毒素。可引起动物流产，末梢坏死和骨髓、胸腺、肠粘膜、卵巢及睾丸细胞核裂解。能抑制DNA和蛋白质的合成。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性 培养性状，气生菌丝初期白色，然后白～玫瑰色，白洋红色或白砖红色，中央常有黄色菌丝区，背面深洋红色或淡砖红赭色。
镜检特性，本菌一般无厚垣孢子，如有也极少，间生。但在菌丝中可见膨大细胞。
大分生孢子，近镰刀形，纺锤形，披针形，略弯曲，两端稍窄细，顶细胞末端稍尖或略钝，足细胞有或无，典型5隔，一般3～5隔。其大小为：3隔28～40×4～5(25～47×3。3～6)μm，5隔30～55×4～5．5(28～60×3．3～6)μm，6～7隔45～60× 4．5～6(40～70×4～6．5)μm。
2．毒素检测［F-2毒素(玉米赤霉烯酮)］
(1)提取 饲料样品先用正己烷脱脂，然后以三氯甲烷提取18h，水浴减压浓缩至干，备薄层层析用。
(2)薄层层析 用硅胶G制板(同T-2毒素)，样品提取物加少量三氯甲烷，使其溶解，点板后，在层析槽内，以乙醚-环己烷(3∶1v／v)展开剂展开，Rf值为0．52，在短波紫外线下呈蓝绿色荧光斑，用浓硫酸处理，115℃加热10min，呈褐色斑。
3．鉴别诊断 本菌和柔毛镰孢(Fusarium flocciferum)，异孢镰孢(Fusarium heterasporium)的区别如下表21-3。
表21-3 三种真菌的鉴别表
四、半祼镰孢(Fusarium semitectum)
本菌寄生于水稻、小麦等植物上，也可在土壤中腐生。产生3种毒素，即丁烯酸内酯、T-2毒素和二醋酸基藨草镰孢烯醇。毒素可引起牛末梢坏死和骨髓造血组织坏死。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性 培养性状，气生菌丝白～赭色，子座肉桂色、黄肉桂色、深肉桂色。
镜检特性，厚垣孢子间生于菌丝和大分生孢子之间，单孢和串状，初平滑，成熟时具小刺。大分生孢子纺锤形，纺锤～披针形，少数为纺锤-镰刀形或椭圆-鳗状弯曲形或近平直，向两端逐渐变细，基部有或无足细胞，典型5隔，成堆时赭色。大小为：3隔29～30×4～4．21μm(26～43×3．4～4．5)μm，4隔33～52×3．5～4．5μm，5隔31～46×4．1μm，6隔44×4．1μm。
2．毒素检测(二醋酸基藨草镰孢烯醇)
(1)提取 饲料样品以2倍剂量正己烷脱脂，然后用4倍剂量甲醇-1%氯化钠(55∶45v／v)振荡提取30min，离心，上清加等量正己烷，振荡5min除掉干扰物质，水、甲醇层溶液加等量三氯甲烷振荡提取3次、三氯甲烷层水浴至干，贮冰箱备用。薄层层析时加少量三氯甲烷溶解。
表21-4 四种真菌的鉴别表
(2)薄层层析 上述提取物用硅胶G板层析，以三氯甲烷-丙酮(3∶2v／v)展开，其Rf值为0．68，层析板用10%硫酸-甲醇处理，110℃加热10min，毒素呈灰紫色斑、紫外线下呈蓝色荧光。
3．鉴别诊断 本菌同大孢半裸镰孢(Fusarium semitectum var majus)、同色镰孢(Fusarium concolor)和蛇形镰孢(Fusarium anguioides)区别如表21-4。
五、腐皮镰孢(Fusarium solani)
本菌寄生在许多栽培作物及蔬菜上，引起根腐及茎基腐。产生7种毒素，新茄病镰孢烯醇(Neosolaniol)、T-2毒素，二醋酸基藨草镰孢烯醇、镰孢烯酮-x、二醋酸基雪腐镰孢烯醇(Nivalenol diacetate)、丁烯酸内酯和F-2毒素。本菌寄生甘薯后，应激甘薯产生甘薯黑疤二酮(Ipomeanine)等8种有毒物质，引起牛肺水肿、充血和肾慢性中毒。新茄病镰孢烯醇引起马属动物神经症状。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性。
培养性状，气生菌丝棉絮状、低平或蛛丝状，白色、苍白淡紫色、苍白浅赭色、苍白浅黄色、背面浅赭色、浅赭暗蓝色、浅奶油黄色。气生菌丝的粘孢子团呈白、褐、黄、蓝、绿色或它们相间颜色。
镜检特性，厚垣孢子顶生或间生，单孢或双孢，少数菌株呈短链或结节状，光滑或具疣状突起，淡黄赭色或无色、圆形或椭圆形。小分生孢子，假头状着生，椭圆形、卵圆形、长椭圆形、短腊肠形、逗点形，0～1隔，4～15×3～5μm。大分生孢子近镰刀形，纺锤-镰刀形、纺锤-披针形、纺锤-柱形，略弯曲，很大距离的长度上直径相等，顶细胞短，略窄细或变钝，足细胞有或无，壁厚，典型3隔。其大小为：3隔17～44×4～5μm，4～5隔35～55×4．5～5．5μm。6～7隔45～65×5～6．5μm。
2．毒素检测(甘薯黑疤二酮) 用乙醚提取，以硅胶IB-F板点样，在苯-甲醇(9∶1v／v)展开剂中展开，然后用艾氏(Ehrlich′s)试剂处理，微热风吹干检查。
新茄病镰孢烯醇的检测方法如下。
(1)提取 饲料加2倍正己烷过夜除去杂质，过滤后残渣加5倍剂量三氯甲烷提取3次，混合3次提取液浓缩至干备用。
(2)薄层层析 上述浓缩至干的提取样品加少量三氯甲烷溶解，点样在硅胶G板上，以丙酮-正己烷(1∶1v／v)展开剂，Rf值为0．5。样点用20%硫酸处理，110℃加热10min，在365nm紫外线下毒素呈蓝绿色荧光斑点。
3．鉴别诊断 本菌同菜豆镰孢(Fusariam martii var．phascoli)区别如表21-5。
表21-5 腐皮镰孢与菜豆镰孢的鉴别
六、串珠镰孢(Fusarium moniliforme)
本菌寄生在玉米、燕麦、大麦、小麦、黑麦和水稻等禾本科植物上。产生2种毒素，玉米赤霉烯酮和串珠镰孢素(Moniliformin)。前者引起动物不孕、流产、死胎和胎儿畸型，后者使动物循环系统损伤。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性。
培养性状，气生菌丝棉絮状，白色、浅粉红色、淡紫色，基质为较淡的黄色、赭色、紫红色至蓝色。
镜检特性，小分生孢子链状着生，偶而呈假头状，椭圆形，纺锤形，卵形，梨形和腊肠形。0～2隔，直或略弯曲，3～7×2～4．8μm。大分生孢子，稍呈镰刀形、锥形、纺锤形、棍棒形、线形，直或略弯曲，基部有足细胞，典型3隔，一般3～6隔，成堆时白-赭色、赭-玫瑰色、砖红-红色。大小为：3隔36×3(20～60×2．5～3．5)μm，4隔50～56×2．5～3μm，5隔53～64×3μm。
2．毒素检测(串珠镰孢素)
(1)提取 饲料样品用甲醇提取5～10h，过滤后溶液浓缩至干，层析时加少量甲醇溶解。
(2)薄层层析 硅胶G板点样后，在甲苯-丙酮-甲醇(5∶3∶2v／v／v)中展开，Rf值为0．27，层析板用2，4-二硝基苯肼处理，毒素呈红褐色斑。如用硅胶GF板层析，毒素显示吸收斑。
3．鉴别诊断 本菌同乳酸镰孢(Fusarium lactis)、大孢串珠镰孢(Fusarium moniliforme subsp majus)和幼角镰孢(Fusarium neoceras)的区别如表21-6。
表21-6 四种真菌的鉴别
七、燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)
本菌寄生在禾本科、豆科、块根类和牧草等各种植物上。产生5种毒素，镰孢烯酮-x、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、新茄病镰孢烯醇和二醋酸基藨草镰孢烯醇。毒素可导致动物神经症状和流产。
1．真菌检查
(1)分离(见拟分支孢镰孢)
(2)形态特性
培养性状，气生菌丝白色、浅红色、苍白～浅紫色、浅赭～粉红色、生长繁茂，高达7～8mm，有些菌株低平，松散蛛丝状，菌丝层表面覆盖细粉(分生孢子)或粘液层(粘孢团)，背面无色或浅黄、赭、红、紫色或相间颜色。
镜检特性，本菌无或有厚垣孢子。小分生孢子基本不产生，有时数量很少。大分生孢子镰刀形、纺锤形、披针形、蠕虫形，窄细或较宽，壁薄，中央部分几乎圆柱形或不同程度弯曲。顶细胞异常狭细呈线状，很长，平均长度达12～21μm。足细胞有或无，典型5隔。其大小为：3隔35～68×3～4μm，4隔35～70×3～4．5μm，5隔47～67×3～3．9(38～78×3～4．5)μm。
2．毒素检测(镰孢烯酮-x)
(1)提取 饲料样品用3倍剂量正己烷处理10～12h，残渣以5倍剂量甲醇提取12h，过滤甲醇溶液，水浴浓缩至干，薄层层析时加少量甲醇溶解。
(2)薄层层析 在硅胶G板上点样，以苯-丙酮(3∶2v／v)为展开剂Rf值0．41，以三氯甲烷-甲醇(5∶1v／v)为展开剂Rf值为0．89。层析板用浓硫酸处理，100℃加热10～20min，毒素呈紫褐色斑，在紫外线下呈天蓝色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和草类镰孢(Fusarium avenaceum var herbarum)区别如表21-7。
表21-7 燕麦镰孢与草类镰孢的鉴别
八、雪腐镰孢(Fusarium nivale)
本菌寄生在大麦、小麦、黑麦等多种禾本科谷物和牧草上。产生5种毒素，雪腐镰孢烯醇(Nivalenol)、丁烯酸内脂、玉米赤霉烯酮、镰孢烯酮-x和二醋酸基雪腐镰孢烯醇。雪腐镰孢烯醇能抑制亮氨酸和胸苷吸收到蛋白质和DNA中去，动物体重下降、并可导致骨髓、胸腺、肠粘膜、卵巢以及睾丸等的细胞核破裂等变化。
1．真菌检查
(1)分离 见拟分支孢镰孢。
(2)形态特性。
培养性状，气生菌丝白色、玫瑰色、疏松或纤维状。
镜检特性，本菌无厚垣孢子和小分生孢子。在菌丝或粘团中的大分生孢子，纺锤～镰刀形。顶细胞逐渐均匀变窄，圆锥形，椭圆状弯曲，基部无足细胞。典型1～3隔，孢子成堆时攻瑰色、鲑～橙色。其大小为：1隔16×2．8(9～23×2．2～4．5)μm，3隔23×3(13～36×2．3～4．5)μm。
2．毒素检测(雪腐镰孢烯醇)
(1)提取 饲料用3倍剂量正己烷浸泡12h，过滤后残渣再以3～5倍剂量三氯甲烷提取12h，过滤后，三氯甲烷溶液水浴挥干，点样时加少量三氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 提取的样品点在硅胶G板上，以三氯甲烷—甲醇(5∶1v／v)展开，Rf值0．45。以乙酸乙酯—正己烷(3∶1v／v)展开，Rf值0．17。层析板用浓硫酸处理，110℃加热5min，毒素呈桃红-褐色，在紫外线下呈天蓝色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和屈恩镰孢(Fusarium kuehnii)、大型雪腐镰孢(Fusarium nivale var．majus)的区别如表21-8。
表21-8 三种真菌的鉴别
