衣原体

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第485页（3860字）

衣原体营严格细胞内寄生，含DNA和RNA两种核酸，对某些抗生素敏感(如四环素、氯霉素、青霉素等)。

衣原体呈球形，大小可为0．2～1．5μm，革兰氏染色阴性，以马基阿韦洛氏法和姬姆萨氏法染色，着色良好。

衣原体对理化因子的抵抗力不强，在56～60℃，仅能存活5～10min。在干燥的情况下，它们在外界至多存活5周；在冻干或-20℃以下，可以存活两年以上。对去污剂及脂溶剂较敏感，一般常用的消毒药品如甲醛、新洁尔灭及碘酊等，均能在短期内将其灭活。

衣原体在鸡胚卵黄囊内生长繁殖良好，也能在细胞培养中生长。在寄主细胞有其特殊的发育周期。

1．原体或称原生小体(Elementary body) 形体较小，球状，直径约0．2～0．4μm，具有传染性，衣原体的感染即由原体引起。

2．始体或称原始体(Initial body) 进入寄主细胞的原体，经过发育演化，转变为始体。始体较大，呈球形或椭圆形，直径约0．8～1．5μm。始体为衣原体的繁殖型，不具传染性。始体经分裂增殖后的个体，再发育为成熟的具有传染性的原体。

衣原体有两种不同类型的抗原，一种是属抗原，另一种是种抗原。属抗原为所有衣原体均含有，故不同种之间可起交叉反应，这种抗原耐热(100℃，30min)，耐石碳酸(0．5%)，可溶于乙醚，通常所用的补体结合抗原的耐热组分就是它。种抗原对热敏感(56℃，1h)，存在于衣原体的胞壁中，可用琼脂扩散、间接血凝试验等血清学方法检查。

衣原体在脊椎动物可致多种疾病，其传播不依赖节肢动物介体。

衣原体现列为一个目［衣原体目(Chlamydiales)］，衣原体目下设一个科［衣原体科(Chlamydiaceae)］，科下设衣原体属(Chlamydia)一属，衣原体属中公认的有两个种，即沙眼衣原体和鹦鹉衣原体。前者与兽医关系不大。

一、鹦鹉衣原体(Chlamydia psitaci)

(一)病原特性 在寄主细胞质内有发育周期。形态为球状，因所处发育阶段不同，大小可为0．2～1．5μm。在细胞质泡囊内形成疏松的微集落。围绕病原体微集落的包囊膜在细胞感染早期即破裂。细胞质内散布各发育阶段的衣原体。碘染色反应阴性。

鹦鹉衣原体最容易在鸡胚卵黄囊中生长繁殖，不被磺胺嘧啶钠所抑制(每胚1mg)。也能在细胞培养中生长。

鹦鹉衣原体抵抗力不强，对热敏感，感染了的鸡胚卵黄囊在-20℃下可以保存数年。各致病株均含有耐热的共同抗原，不同株之间存在有抗原上的差异。

(二)病原性 来源于不同动物的致病株，可以感染17种哺乳动物和130多种禽类，在鸽、火鸡、鸭、鸡以及其他非鹦鹉类禽鸟引起鸟疫。

在家畜可以引起牛、羊、猪的流产、肺炎、关节炎、结膜炎；牛的脑脊髓炎；马和猫的肺炎等等。

(三)微生物学检查 动物感染衣原体后，一般不具特殊的有诊断意义的症状表现，确诊需进行病原学检查和血清学试验。

1．样品采集 最适合的检查材料要从有症状的动物的病变部位采取。如流产胎儿的器官，胎盘或子宫分泌物；关节炎病例为关节液；脑脊髓炎病例为大脑或脊髓；肺炎病例为肺、支气管淋巴结；肠炎病例为肠道粘膜等。衣原体对卡那霉素和链霉素具有强大的抵抗力，可于每ml病料中加入500～1000IU进行处理，以除去污染杂菌。

在严重感染的病例，如牛、羊、猪流产的子叶，其涂片用姬姆萨氏染色，进行显微镜检查即可得出初步诊断结果。对于其他大多数的可疑病例，仅用涂片检查难以得出结论，还必须进行病原分离培养。

2．分离培养 最常用的分离培养方法是将材料接种于鸡胚卵黄囊，有些菌株能很快适应于鸡胚传代，有些则需盲传5代以上才能作出结论。

在初次分离时，也可将病料接种于小白鼠或豚鼠。小白鼠作鼻内、腹腔内或脑内接种。豚鼠作腹腔或鼻内感染。

大多数菌株可在细胞培养中(如Hela细胞等)生长繁殖，并形成不同形态的核旁包涵体，在细胞培养中的衣原体，可用直接免疫荧光试验来证明。

3．疑似衣原体鉴定要点

(1)在人工培养基上不生长。

(2)感染细胞的细胞质内可查见病原体，主要为原体，也可以见到始体。感染细胞破裂后，病原体被释放于细胞外。

(3)碘染色反应，鹦鹉衣原体为阴性，沙眼衣原体为阳性。

(4)在鸡胚卵黄囊内的生长，沙眼衣原体可被磺胺嘧啶钠抑制，而鹦鹉衣原体则不被磺胺嘧啶钠抑制。

(5)用补体结合试验可检查衣原体的耐热的属抗原。

4．血清学检查 最常用的是补体结合试验，抗原可用感染鸡胚的卵黄囊膜制备。动物一般于感染后7～10天出现补体结合抗体。由鹦鹉衣原体引起的牛、羊、猪流产，在流产后14天，补体结合抗体滴度升高，4个月后开始下降，9～11个月后很少查出。补体结合反应的判断标准，各国不一，我国暂定为1∶16以上为阳性，1∶8为可疑反应，1∶4以下为阴性。

间接血凝试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验以及血清中和试验等也可用于诊断和病原研究。

二、马基阿韦洛(Macchiaveello)氏染色法的染色液配制及其染色步骤

(一)染色液的配制

1．0．25%的碱性复红液：碱性复红0．25g，溶于100ml无离子水中，滤纸过滤。

2．0．5%柠檬酸液：柠檬酸0．5g，溶于100ml无离子水中(最好新配)。

3．1%美蓝：美蓝1g，溶于100ml无离子水中，滤纸过滤。

(二)染色步骤

1．涂片自然干燥，微微加热固定；

2．用碱性复红液染色5～10min；

3．倾去复红液，水洗后用柠檬酸液脱色数秒钟；

4．水洗后用美蓝染色20s；

5．水洗，吸干，用油镜检查。原体呈红色，单在或二、三成链，初体和组织细胞呈蓝色。但如脱色过度，原体也可呈蓝色。

三、碘染色法

1．碘溶液配制碘5g，碘化钾10g，溶于100ml无离子水中即成，用时10倍稀释。

2．染色法：涂片用甲醇固定后用碘溶液染色10min，水洗，吸干，油镜检查，染色阳性为棕黄色，不显色为阴性。

四、磺胺嘧啶钠抑制试验

挑选含有丰富衣原体的卵黄囊膜，无菌磨碎后用生理盐水稀释成10^-4，在此稀释液每ml中加磺胺嘧啶钠2．0mg4℃下作用4h，取0．5ml接种7日龄鸡胚卵黄囊(mg／胚)，复置37℃下继续孵育。鹦鹉衣原体对磺胺嘧啶钠具有抵抗力，故能致死鸡胚，沙眼衣原体则否。

五、用感染鸡胚卵黄囊膜制备补体结合抗原的方法

制造用衣原体株对鸡胚的毒力不应低于10^-8。接种鸡胚卵黄囊繁殖后，选择衣原体含量较多的卵黄囊膜在无菌条件下加适量pH7．2，0．1M磷酸盐缓冲液，将此乳剂移入装有玻璃珠的灭菌瓶中，在4℃下放置3天，每天摇振两次，然后2000～3000r／min离心20min，吸取中间液体如法重复离心20min后，吸取中间溶液体，10000～20000r／min离心1h，弃去上清液，每只卵黄囊膜的沉淀物用pH7．2，0．1M磷酸盐缓冲液平均稀释成2ml，在水浴中煮沸20min，冷却后超声波粉碎6min，加入0．3%叠氮钠，4℃下存放3周，每天摇振一次，其效价不低1∶256即可应用。