曲霉属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第504页（7349字）
本属分18个群，132个种和18个变种。目前已发现45个种产生近百种不同程度的有毒代谢产物(其中包括5种致癌物质)，引起畜禽、野生动物和试验动物中毒发病和死亡。
真菌的基本形态，分生孢子梗顶端膨大成近球形、椭圆形顶囊，顶囊上着生瓶形小梗(单层或双层)，小梗顶端着生链状分生孢子(球形、椭圆形、筒形)。
一、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)
本菌在土壤中和腐败有机质上普遍存在，引起饲草和饲料发霉变质。产生23种不同程度的有毒代谢产物、主要为烟曲霉震颤素A和B(Fumitremorgin A、B)，腹腔接种(1mg／kg)小鼠，导致震颤，5mg／kg引起持久性震颤和70%死亡。毒素也可引起牛震颤性中毒。
本菌是禽类呼吸系统和牛真菌性流产的主要病原之一。禽类的肺和气囊膜呈结节性病变。牛胎盘增生、坏死和皮肤损伤。
1．真菌检查
(1)分离 饲料和饲草的分离方法同镰孢属真菌，但鉴定培养基用蔡氏(Czapek)琼脂，27℃培养7天进行镜检。病变组织分离可无菌采取结节病灶和胎儿胃内及羊水内羽状菌丝块，培养在蔡氏琼脂斜面上。
(2)形态特性 培养性状，菌落生长迅速，绒状至一定的絮状、最初白色，后暗烟绿色，老熟后颜色变深。一些菌系菌落背面无色、另一些菌系菌落背面呈黄褐色、绿色、暗红褐色。
镜检特性，分生孢子头短柱状，致密，长短不一，长达400μm，直径50μm，但一般很短。分生孢子梗，短，光滑，直径5～8μm，长300μm，偶尔达500μm，常为不同程度的绿色。顶囊烧瓶形，直径20～30μm，带绿色，仅上半部可育。小梗，单层，具不同程度的绿色，密集，一般为6～8×2．5～3．0μm，大致与分生孢子梗轴平行。分生孢子，成堆时绿色、球形或近球形，具细刺，一般直径为2．5～3．0μm，变幅2．0～3．5μm。
2．毒素检测 (烟曲霉震颤素A和烟曲霉震颤素B)
(1)提取 饲料样品以3～5倍剂量三氯甲烷或乙酸乙酯震荡提取1～2h，水浴浓缩至干，薄层层析时用少量三氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 震颤素A用硅胶G-HR板，点样后以三氯甲烷—丙酮(93∶7v／v)展开，Rf值0．30；以甲苯—乙酸乙脂—甲酸(5∶4∶1v／v／v)展开，Rf值0．65。在可见光下毒素呈鼠灰一蓝色斑，紫外线下呈芥子色斑。层析板以50%乙醇硫酸处理后可直接显层。
震颤素B用硅胶60—HR板，点样后，以乙醚一二氯甲烷(5∶95v／v)展开，Rf值0．67。以丙酮一二氯甲烷(5∶95v／v)展开，Rf值0．38。层析板以20%乙醇三氯化铝处理，100℃加热10min，在紫外线下呈亮蓝色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌同绿垂曲霉(Aspergillus viridenutans)区别如表21-9。
表21-9 烟曲霉与绿垂曲霉的鉴别
二、棒曲霉(Aspergillus clavatus)
本菌在土壤、腐败有机质、麦粉、大麦芽和高粱上都能分离到。产生9种有毒代谢产物，主要有细胞松弛素E(Cytochalasin E)．，色氨震颤素A和C(Tryptoquivaline A、C)及展青霉素(参考展青霉)。
细胞松弛素E，大鼠口服LD50为9．1mg／kg，腹腔2．6mg／kg。色氨震颤素可诱导大鼠持久性震颤。上述三毒素引起牛(特别是奶牛)震颤、流涎、充血、渗出。肝、肾、脾和胰脏坏死。小肠、脑水肿和肺出血。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性 培养性状，菌落生长迅速，培养10天，直径可达3～3．5cm，绒状或形成厚毡状，部分菌株略带皱纹，蓝-灰绿色。有些菌株有腐臭气味。
镜检特性，分生孢子头初期棍棒状，老熟后分裂成数个短柱。分生孢子梗粗大，长1．5～3．0mm，直径20～30μm，光滑无色。顶囊棍棒状，长达200～300μm，宽40～60μm，全部可育。小梗单层，密集，顶囊上部的小梗大小为7～8×2．5～3．0μm，顶囊下部小梗大小为2．5～3．5×2～3μm。分生孢子椭圆形，光滑，壁厚，大小为3～4．5×2．5～3．5μm。
2．毒素检测 (细胞松弛素、色氨震颤素A和C)
(1)提取 饲料样品以2倍剂量正己烷脱脂过夜，残渣用二氯甲烷提取5～8h，滤液水浴浓缩至干，薄层层析时加少量二氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 以硅胶GF254板点样，在丙酮—正己烷(2∶3(v／v)中展开，Rf值0．25～0．3。以硅胶G—HR板点样，在甲苯—乙酸乙酯—甲醇(5∶4∶1v／v／v)中展开，Rf值为0．6。50%乙醇硫酸处理，110℃加热10min，毒素(细胞松弛素E)在紫外线下呈暗紫色荧光斑。
色氨震颤素A和C、可用硅胶GF254板点样，在苯—丙酮(9∶1v／v)中展开。
3．鉴别诊断 本菌同巨大曲霉(Aspergillus giganteus)的区别是后者分生孢子头长度通常为1～5mm，前者分生孢子头长度不超过4．0mm。本群另一个种为短棒曲霉(Aspergillus clavato-nanica)，其分生孢子头长度为1．0mm。
三、阿姆斯特丹曲霉(Aspergillus amsteldami)
本菌在自然界分布很广，具有嗜干性特点，可引起有机物和饲草、谷物霉变。共产生10种代谢产物(毒性尚不完全明了)，主要有新刺孢曲霉素A、B、C、D、E(Neoechinulin A、B、C、D、E)。这些产物对家兔具有毒性。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性 培养性状，菌落生长局限，室温(24～26℃)培养2～3周，直径2．5～3cm，平坦或致密皱纹。因闭囊壳混有不育菌丝及分生孢子头，菌落从黄色至污黄灰绿色，背面无色至黄色，老后变褐色。
菌落在20%蔗糖蔡氏琼脂上生长扩延，培养2周直径可达8～10cm，略带皱纹和同心环带，闭囊壳丰富，有时形成致密闭囊壳层，亮黄色，分生孢子头区浓绿色，闭囊壳区背面持久的黄色。
镜检特性，分生孢子头放射状或略疏松的柱状，直径120～150μm，偶尔更大。分生孢子梗无色或淡黄绿色，275～350×10～12μm，光滑。顶囊近球形，直径18～25μm。小梗单层5～6．5×2．5～3．5μm。分生孢子近球形或末端略扁平的椭圆形，具细刺，大小差异很大，长达3．5～5．2μm，但一般为4．5～5．0×3．5～4．0μm。闭囊壳近球形至球形，直径115～140μm，有时达160μm，硫黄色。子囊10～12μm，8个子囊孢子，子囊孢子双凸镜形，具明显的V型赤道沟及双圆钝鸡冠状凸起，壁全面粗糙，4．7～5．0×3．6～3．8μm。
2．毒素检测包括 新刺孢曲霉素及新刺孢曲霉素A、B、C、D、E。
(1)提取 饲料用5倍剂量乙酸乙酯提取5～8h，滤液水浴浓缩至干，层析时加少量乙酸乙酯溶解。
(2)薄层层析 点样在硅胶HF254(Silica gel HF254)板上，以乙酸乙酯—正己烷(2∶1v／v)为展开剂，其Rf值分别为0．75、0．24、0．77、0．80、0．37和0．51。
3．鉴别诊断 本菌和匍匐曲霉(Aspergillus repens)，赤曲霉(Aspergillus ruber)、谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)区别如表21-10。
表21-10 四种曲霉的鉴别
四、黄曲霉(Aspergillus flavus)
本菌是各种谷物、饲料和饲草的常在菌。共产生14种有毒代谢产物、主要有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1(Aflatoxin B1、B2、G1、G2、M1)5种。孢子被禽类吸入后，肺和气囊膜形成结节性病变和炎症，是禽类曲霉病病原之一。依动物对黄曲霉毒素的敏感性，可分成三类，1mg／kg体重LD50的动物有雏鸭、幼火鸡、兔、狗、豚鼠和红鳟鱼，增加10倍剂量达到LD50的动物有猪、犊牛、雏鸡、奶牛、猴、鹌鹑和鲑鱼，抵抗力最强的动物有绵羊和小鼠。B1、B2、G1和M1对动物均有致癌作用。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性
培养性状，菌落生长迅速，25～27℃、培养10～14天，直径达3～4或6～7cm，初期带黄色，后变成黄绿色，老熟后颜色变暗，平坦或略有辐射状皱纹，背面无色或略带褐色。
镜检特性，分生孢子头疏松放射状。分生孢子梗长1mm，直径10～20μm，壁极粗糙。顶囊烧瓶形或近球形，直径25～45μm。小梗双层或单、双层同时生于一个顶囊上，小型顶囊仅生单层小梗，梗基6～10×4～5．5μm，小梗6．5～10×3～5μm。
2．毒素检测 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2
(1)提取 饲料样品加2倍剂量乙醚脱脂5～8h，过滤后残渣用5倍剂量乙醇提取2次，合并乙醇提取液，水浴挥发干，薄层层析时加少量乙醇溶解。
(2)薄层层析 点样在硅胶G板上，先用无水乙醚展开至前沿20cm处，取出吹干，然后在三氯甲烷—丙酮(93∶7v／v)中展开，在紫外线下B1和B2呈鲜蓝色荧光斑，Rf值分别为0．33和0．31；G1和G2呈蓝绿色荧光斑，Rf值分别为0．29和0．27。
3．鉴别诊断 本菌同寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)的区别是后者小梗单层，菌落趋向于暗绿色。
五、赭曲霉(Aspergillus ochraceus)
本菌主要侵害含水16%以上的谷物和饲料。产生11种有毒代谢产物，主要为赭曲霉毒素A(Ochratoxin A)。危害的动物有猪和禽，马和牛很少发病。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性
培养性状，菌落略局限，平坦或略具皱纹，赭色或淡黄色至带红的浅黄色或鹿皮色，背面黄褐至绿褐或紫红色。
镜检特性，分生孢子头幼时球形，老熟散成2～3个圆柱。分生孢子梗长1．0～1．5mm，直径10～14μm，污黄色至淡褐色，具麻点、壁厚粗糙。顶囊球形、壁薄无色，全部可育，直径35～50μm。小梗双层，梗基15～20×5～6μm，小梗7～11×2．0～3．3μm。分生孢子球形、近球形，直径2．5～3．0μm，壁略粗糙或光滑。
2．毒素检测(赭曲霉毒素A)
(1)提取 饲料样品加5倍剂量三氯甲烷-甲醇(1∶1v／v)，在索氏(Soxhlet)提取器内提取12h，滤液水浴浓缩至干，层析时用少量三氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 点样于硅胶G板上，以甲苯—乙酸乙酯—90%甲酸(5∶4∶1v／v／v)展开，Rf值0．70；甲苯—三氯乙烯(Trichloroethylene)—戊醇—甲醇(80∶15∶4∶1v／v／v／v)展开，Rf值0．60。毒素在紫外线下呈绿色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和孔曲霉(Aspergillus ostianus)、蜂蜜曲霉(Aspergillus mellous)、雅致曲霉(Aspergillus elegans)、佩特曲霉(Aspergillus petrakii)的区别如表21-11。
表21-11 五种曲霉的鉴别
六、杂色曲霉(Aspergillus versicolor)
本菌分布广泛，谷物、饲料和禾本科草类均有污染。产生6种有毒代谢产物，毒力最强的为柄曲菌素(Sterigmatocystin)。该毒素动物小剂量长期口服可导致肝癌和肉瘤。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长局限，致密交织的绒絮状，中心隆起或扣状，淡黄色、橙色、黄褐色，局部可能出现淡绿、灰绿至粉红色。背面无色至黄橙色或玫瑰色。
镜检特性，分生孢子头松散放射状，直径100～120μm。分生孢子梗，无色或黄色，壁厚，光滑，500～700×5～10μm。顶囊半球形或半椭圆形，直径12～16μm，上半部或上3／4区域可育。小梗双层，梗基5．5～8．0×3μm，小梗5～7．5×2～2．5μm。分生孢子球形，具细密小刺、2～3μm。
2．毒素检测
柄曲菌素
(1)提取 饲料用2倍剂量正己烷脱脂后，再以5倍剂量三氯甲烷振荡提取2～3h、滤液浓缩至干，层析时加少量三氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 在硅胶G板上点样，在三氯甲烷—甲醇(98∶2v／v)中展开，Rf值0．5，毒素在紫外线下显示橙红色斑，用乙酸处理呈黄色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和聚多曲霉(Aspergillus sydowi)、树曲霉(Aspergillus silvaticus)、垫落曲霉(Aspergillus pulvinus)的区别如表21-12。
表21-12 四种曲霉的鉴别
七、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)
本菌分布广泛，谷物，饲料和饲草均有污染。产生3种有毒代谢产物，主要为柄曲菌素、黄西林X(Xanthocillin-X)。两毒素均为肝脏毒，前者导致动物肝癌，后者引起肝变性、坏死。本菌为禽类曲霉病病原之一．
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长较快，绒状，绿色，闭囊壳黄褐色，背面紫红色。
镜检特性，分生孢子头短柱形，40～80×25～40μm。分生孢子梗极短，常弯曲，长75～100μm、褐色，壁光滑。顶囊半球形，直径8～10μm。小梗双层，梗基5～6×2～3μm，小梗5～6×2～2．5μm。分生孢子球形，粗糙，直径3～3．5μm。闭囊壳球形，暗紫红色。子囊孢子双凸镜形，紫红色，约4×5μm，有两个鸡冠状突起。
2．毒素检测 见杂色曲霉。
3．鉴别诊断 本菌和无冠构巢曲霉(Aspergillus nidulans var acristatus)、异宗曲霉(Aspergillus heterothallicus)的区别如表21-13。
表21-13 三种曲霉的鉴别
