青霉属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第513页（4866字）
本属共分4组、41个系、137个种和4个变种。目前已发现48个种产生62种不同程度的有毒代谢产物，其中7种毒素能引起动物致癌。该属有毒真菌经常涉及人类的食品和动物饲料霉变，造成急性和慢性中毒。
真菌基本形态，分生孢子梗顶端生有扫帚状的分支轮，称帚状枝。帚状枝由单轮或双轮以至多轮分枝构成，对称或不对称，最顶端一级分支为产生分生孢子的细胞，称小梗，着生小梗的细胞称梗基，支持梗基的细胞称副枝。小梗以断离方式产生分生孢子，分生孢子球形、近球形、椭圆形和短柱形。依据帚状枝的形状和层次分为4组，即单轮青霉组、对称双轮青霉组、不对称青霉组和多轮青霉组。依据菌落质地也可分成绒状青霉组、絮状青霉组、绳状青霉组和束状青霉组。
鉴定培养基用蔡氏琼脂和麦芽浸汁琼脂，23～28℃培养5～7天(显微镜检查)和10～14天(菌落特性检查)进行鉴定。
一、黄绿青霉(Penicillium citreoviride)
属单轮青霉组、斜卧青霉系。本菌分布广泛，可从土壤、霉变米和其他物质中分离出来。共产生2种毒素，黄绿青霉素(Citreoviridin)和桔青霉素(Citrinin)。前者可引起哺乳动物进行性上行性脊髓麻痹等系列症候群，具有强烈毒性及较高的死亡率。少量引起肝肿瘤和贫血，后者见下述桔青霉。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长局限，培养10～14天直径2～3cm，表面皱褶和钮扣状，有时菌落中央凸起或凹陷，绒状或略现絮状，淡黄灰色，仅微具绿色、渗出液很少或缺乏，有时呈柠檬黄色、背面及培养基亮黄色，后者见下述桔青霉。
镜检特性，分生孢子梗壁光滑，50～100×1．6～2．2μm。帚状枝大部为单轮，偶尔呈现主轴延长或从低节上生出1或2个分支，产生次级小梗轮生体。分生孢子链略平行或稍散开，长达50μm以上。小梗8～12个密集簇生、多数9～12×2．2～2．8μm，具有长的梗颈。分生孢子球形、壁薄、光滑或近于光滑、2．2～2．8μm，成链时具明显的孢隔。
2．毒素检测(黄绿青霉素)
(1)提取 饲料样品用2倍剂量正己烷或石油醚脱脂、过滤后残渣以5倍剂量乙醇提取3次，水浴挥发干，加热苯溶解，置4℃冰箱过夜，过滤后滴加正己烷，得黄色粉末沉淀，除上清液，层析时，加少量乙醇溶解粉末。
(2)薄层层析 在硅胶G板上点样，以正己烷—丙酮(1∶1v／v)为展开剂，Rf值0．45；以乙酸乙酯—甲苯(1∶1v／v)为展开剂，Rf值0．50；以三氯甲烷—甲醇(9∶1v／v)为展开剂，Rf值0．35。在紫外线下毒素呈鲜黄色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和鲜红青霉(Penicillium chermesinum)、斜卧青霉(Penicillium decumbens)的区别如表21-14。
表21-14 三种青霉的鉴别
二、桔青霉(Penicillium citrinum)
属不对称青霉组，绒状青霉亚组，桔青霉系。本菌分布广泛，土壤、谷物、饲料和草类等均可找到。共产生2种毒素，即桔青霉素(Citrinin)和曲酸(Kojic acid)。前者是动物的肾脏毒、猪最为敏感。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长局限，23～25℃培养10～14天，直径不超过3cm，具放射状沟纹，多数菌系绒状，部分菌系絮状，灰绿色，有极窄白边，渗出液透明淡黄色，背面黄至橙色，基质颜色相似或带粉红色。
镜检特性，分生孢子梗50～200×2．2～3．0μm，壁光滑，一般不分支，偶尔有1至数个长25～35μm分支。帚状枝由梗基和小梗组成，壁光滑，梗基3～4个轮生，略松散，12～20×2．2～3．0μm；每个梗基上簇生6～10个略密集而平行的小梗、8～11×2～2．8μm。分生孢子球形、近球形，光滑或近似光滑、大部分2．5～3．0μm。
2．毒素检测
桔青霉素
(1)提取 饲料样品加4倍剂量三氯甲烷静止过夜，加40%盐酸液，其量约三氯甲烷的1／7，静止30min后过滤。保留三氯甲烷层，该溶液用水漂洗，并用0．1M碳酸氢钠溶液提取。提取液加浓盐酸酸化至pH2．5后，再用三氯甲烷提取。浓缩提取溶液、水洗，再用0．1M碳酸氢钠提取。水层酸化至pH2．5，过滤收集毒素，层析时加少量三氯甲烷溶解。
(2)薄层层析 点样在硅胶G板上，以甲苯—乙酸乙脂—甲酸(5∶4∶1 v／v／v)为展开剂，Rf值0．8，在紫外线下毒素呈黄绿色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和顶青霉(Penicillium corylophilum)，歧皱青霉(Penicillium steckii)的区别如表21-15。
表21-15 三种青霉的鉴别
三、红色青霉(Penicillium rubrum)
属对称二轮青霉组，产紫青霉系。从玉米、麦麸、豆类、花生、葵花子和植物基质上均能分离出本菌。产生4种有毒物质，红青霉毒素A和B(Rubratoxin A，B)、曲酸和卵孢菌素(Oosporein)。马、牛、猪喂饲红青霉培养的玉米导致神经症状、内脏出血和肝的变性坏死。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长局限，23～25℃培养12～14天，直径达1～2cm。有些菌株菌落由1mm厚的毡状基部菌丝组成，有明显皱纹；另一些菌株菌落较薄，表面近似平坦，常略具环纹。整个菌落或局部区域分生孢子发育丰富，一般菌落边缘发育最厚。分生孢子区域呈黄色至淡灰绿色，近似豌豆绿至藿香绿色。色素菌丝不形成分生孢子区或略形成分生孢子区，一般为橙红色。背面亮橙红色至樱桃红色，基质颜色略浅。
镜检特性，分生孢子梗光滑或偶有小颗粒，长200μm以上，宽2．2～3．0μm。帚状枝双轮对称，梗基5～10个轮生，8～10×2．0～2．5μm。小梗披针形，顶端细尖，5～8个轮生，10～12×2．0～2．2μm。分生孢子壁光滑，在一些菌株为典型的椭圆形，3．0～3．5×2．0～2．5μm；在另一些菌株呈卵形或近球形，2．2～2．8×2．0～2．5μm。
2．毒素检测
红青霉毒素A和B
(1)提取 毒素B用乙醚或乙酸乙脂—苯和乙醚提取，过滤后挥发至1／10体积，待形成结晶后用乙醚冲洗几次，将最后获得的结晶溶于少量丙酮内，备层析用。
毒素A用丙酮或乙酸乙脂提取。
(2)薄层层析 点样在硅胶HF254板上，以冰醋酸—甲醇—三氯甲烷(2∶20∶80v／v／v)为展开剂，在紫外线(253nm)下，毒素B呈黑色斑，Rf值为0．54～0．59；毒素A呈黑色斑，Rf值0．70。
用硅胶G板点样，以三氯甲烷—甲醇—冰醋酸—水(80∶20∶1∶1v／v／v／v)为展开剂，展开后层析板200℃处理10min，毒素呈绿色荧光斑。
3．鉴别诊断 本菌和产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、棘孢青霉(PenicilliUm aculeatum)、变幻青霉(Penicillium variabile)的区别如表21-16。
表21-16 四种青霉菌的鉴别
四、展青霉(Penicillium patulum)
属不对称青霉组，束状青霉亚组，展青霉系。本菌分布广泛，土壤、谷物饲料及禾本科饲草均能找到。产生2种毒素，展青霉素(Patulin)和灰黄霉素(Griseofulvin)。前者可使牛致死(实质器官出血、水肿)，后者引起动物肝损伤和肝癌。
1．真菌检查
(1)分离 见烟曲霉。
(2)形态特性。
培养性状，菌落生长局限，12～14天培养，直径2～2．5cm，具放射状沟纹，边缘平截，中心略隆起、表面颗粒状，边缘有明显菌丝束，有的呈絮状，厚密。分生孢子区灰绿至亮褐色。背面淡黄色至橙褐色或红褐色，略扩散于基质中。
镜检特性，分生孢子梗一部分单生，一部分集结成束，呈波纹状弯曲，壁光滑，400～520×3～4μm。帚状枝不对称，疏松散开，3～4层分支，一般40～50μm，分生孢子链略散开，长50～100μm。副枝散开，15～20×3～3．5μm。梗基较短，常为楔形，2～4个不整齐轮生，6．2～9×3～3．5μm。小梗短，长颈瓶形，4．5～6．5×1．8～2．6μm，8～10个密集成一簇。分生孢子椭圆形，后变成近球形，壁薄，光滑，2．8～3．6×2．1～2．8μm。
2．毒素检测
展青霉素
(1)提取 饲料样品用2倍剂量正己烷除掉干扰物质后，过滤，残渣用乙腈提取30min，乙腈滤液再用正己烷提取2次，乙腈层水浴挥干。
(2)薄层层析 点样在硅胶G和硅胶GF板上，以三氯甲烷—甲醇(4∶1v／v)展开，Rf值0．75；以三氯甲烷—异丁酮(4∶1v／v)展开，Rf值0．20。在紫外线下检查硅胶GF板，毒素呈黑色吸收斑；硅胶G板用茴香醛—冰醋酸—浓硫酸(0．5∶85∶5)处理，130℃加热10min，在可见光下呈淡红色斑，在紫外线下毒素呈黄色斑。
3．鉴别诊断 本菌和扩展青霉(Penicillium expansum)的区别如表21-17。
表21-17 展青霉与扩展青霉的鉴别
