肠道病毒属

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第663页（4490字）

本属有100个成员以上，都寄居于脊椎动物消化道，在肠道细胞中增殖，并能侵害神经系统和其他组织，所引起的临床表现极为多样化。其中包括一些重要的人畜病原体，如人的脊髓灰质炎病毒、猪的水泡病病毒、猪传染性脑脊髓炎病毒、鸭肝炎病毒等，还有一些病毒的致病性不明显，通常引起轻症或亚临床感染。

一、牛肠道病毒(Bovine enterovirus)

一般在肠道不引起疾病，但有的可引起不孕、流产、死胎或产后立即死亡。

(一)样品采集 流产胎儿、死胎、子宫分泌物。

(二)病毒分离

1．鸡胚接种 有些毒株可在羊膜腔中生长，并能在绒尿膜上出现痘斑，有些能适应绒尿膜、尿囊或卵黄囊接种途径。

2．细胞培养 能在犊肾细胞上生长引起细胞病变。

3．实验动物 乳鼠或乳仓鼠可致与考萨基A病毒相似的病变。怀孕豚鼠可引起流产。

二、猪肠道病毒(Porcine enteroviruses)

(一)猪传染性脑脊髓炎病毒(Porcine encephalomyelitis virus) 猪脑脊髓炎又名捷申(Teschen)病或Talfan病。

本病毒只感染猪，通常引起隐性感染，或仅出现散发性临床病例，但也可引起严重的流行暴发。病毒先在消化道及其有关淋巴结内增殖，引起病毒血症、侵犯中枢神经系统，引起脑脊髓炎。

1．样品采集 脑脊髓、肠内容物。

2．病毒分离 将样品作成乳剂后接种猪肾原代细胞，能引起细胞病变。必要时盲传几代。细胞培养适应后的毒株能在PK15细胞系中生长。分离株可用中和试验鉴定。

(二)猪水泡病病毒(Swine vesicular disease Virus) 猪水泡病是近20年来新发现的一种疫病。病猪发热(41～42℃)，并于鼻镜和蹄部皮肤上出现水泡。

1．样品采集 取病猪未破溃的水泡液，或刚破溃的水泡皮。水泡皮经洗净研磨、稀释成1∶5～1∶10，置4℃浸泡一夜，或室温4h，离心沉淀取上清液，即为待检病毒液。

2．病毒分离

(1)细胞培养 病料接种猪肾原代细胞，IB-RS-2、PK-15等猪肾传代细胞。一般在20～24h内即可出现典型的细胞病变。也可接种于仔猪睾丸、仓鼠肾或乳鼠肾原代细胞和人羊膜传代细胞FL细胞系上。如果初代不出现CPE，盲传2～3代。

(2)实验动物 将病料接种于1～3日龄的乳鼠或乳仓鼠，出现特异的麻痹症状，四肢强直，经2～3天死亡。其他实验动物、3日龄以上的乳鼠和2周龄以上的仓鼠均不发病。与其他水泡性疾病的区别见表39-1。

3．血清学试验

(1)中和试验 是诊断猪水泡病常用的方法，较易得出确切的诊断结果。

①用已知血清鉴定未知病毒：选用1～2日龄的乳鼠，颈部皮下注射猪水泡病高免血清0．1ml，18～24h后接种待检样品。注射过血清的7只乳鼠中5只接种病毒液，留2只不接种，作为血清健康对照，3只未注射免疫血清的乳鼠，也同时接种病毒液。

接种病毒后，每天观察2～3次，连续6天。如注射免疫血清的乳鼠被保护，血清对照鼠均健活，病毒对照鼠死亡，则被检病料为猪水泡病病毒。

②用已知病毒鉴定未知血清 本病中和抗体出现很快，病猪在出现水泡的当天血清中即可测出相当水平的中和抗体，2天达高峰，一直维持至40天稍有下降。

(2)反向间接血凝试验

①将水泡皮作成1∶3悬液，如上制成待检抗原。然后在小试管中用含1%兔血清、0．05%聚乙二醇(分子量12000)和0．1%叠氮化钠的pH7．2，0．1mol／L PBS作倍比稀释，自1∶6…1∶768。

②于微量滴定板的第一排1～8孔内分别滴加8个不同稀释度的抗原，每孔2滴，第9孔加稀释液2滴，作为阴性对照，第10孔加水泡病标准抗原1∶30稀释液2滴，作为阳性对照。

③于1～10各孔内滴加水泡病红细胞诊断液1滴(即以提纯的豚鼠抗水泡病IgG致敏的醛化绵羊红细胞)，轻轻摇震，使红细胞均匀悬浮后，置室温下经1．5～2h判定结果。

④有两孔出现++以上凝集者，即可判为水泡病，但阴性对照孔应不凝集，阳性对照孔应凝集。红细胞凝集++以上的抗原最高稀释度，即为该被检抗原的效价。

反向间接血凝试验虽然灵敏度较高，但个别被检抗原可能在低倍稀释孔内出现非特异凝集。必要时，应以正常豚鼠的IgG同样致敏已固定的绵羊红细胞，制成正常红细胞液作对照。根据水泡病诊断液和对照液两排凝集滴度之差进行判定，以相差两孔以上者为阳性。

(3)补体结合试验

一般应用微量补体结合试验，将水泡皮等被检病料如上作成浸出液后，直接检测。也可先行细胞培养，待出现明显细胞病变后，取细胞培养物检测病毒抗原。

(4)荧光抗体法

加有盖玻片的IB-RS-2、PK-15或原代猪肾细胞培养上接种如上制备的1∶10水泡皮浸出液0．2ml，吸附并加维持液后，37℃孵育，经不同时间后取出盖玻片，用直接或间接荧光抗体法检测病毒抗原的存在。

(5)对流免疫电泳 用已知血清与待检样品作对流电泳，可在2～3h内作出判定。

三、禽肠道病毒(avian enteroviruses)

(一)禽脑脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis Virus) 禽脑脊髓炎又名流行性震颤，主要发生于2～3周龄的幼鸡，其特征为病鸡站立不稳，共济失调，并出现头、颈震颤症状，最后倒地死亡。

1．样品采集 取发病2～3天以内的鸡脑脊髓。

2．病毒分离

(1)鸡胚接种 受精卵必须来自易感鸡群，最好是SPF鸡群。将脑脊髓乳剂接种卵黄囊，感染鸡胚萎缩，神经变性，且常发生脑积水。分离得病毒以后，用已知阳性血清在鸡胚上作中和试验，以便与其他的鸡肠道病毒区别。有时鸡胚不死，孵出后在10天内观察临床症状。

(2)动物试验 将病脑悬液脑内接种1日龄雏鸡，观察临床症状，1～4周内收获脑作传代之用。

3．血清学试验

(1)病毒中和试验 一般在鸡胚中进行。

(2)免疫荧光 直接法和间接法都已广泛应用，常用以检查病鸡脑和胰的冰冻切片，也用于组织培养中的病毒感染。

(3)免疫扩散 检测鸡和鸡胚中的病毒抗原，但敏感性不够高。

(4)免疫酶 ELISA已经建立，效果甚为满意。

(二)鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus) 鸭肝炎病毒分3型，除2型属嗜肝病毒科外，1和3型属肠道病毒，但抗原性不交叉。病毒侵害3日龄至3周龄甚至更大的雏鸭，传播迅速，病势急剧，雏鸭可能在出现症状后的1h内死亡，死亡率可达90～95%。3型的致病力较低，死亡率不超过30%。病变主要在肝，肝明显肿大并水肿，有大小不等的出血点和出血斑。

1．样品采集 病鸭有典型出血的肝。

2．病毒分离

(1)禽胚接种 将肝制成10%悬液，加10%氯仿摇振15min，离心后取上清液，接种于10日龄禽胚的尿囊腔内。1型能在鸭胚(必须无母源抗体)或鸡胚中生长，前者更适宜，死亡率较高，病毒浓度较大。鸭胚大部分经3～4天死亡，部分鸡胚经4～6天死亡，死亡率约60%。3型只能感染鸭胚，胚胎死亡率较低。受感染的胚胎发育停滞，水肿、肝水肿和坏死，很多胚液和卵黄变浅绿色，肝呈绿色，其上布满黄色坏死点，如果胚胎不死，应盲传三代。

(2)细胞培养 1型能在鸡胚肝细胞中生长，无CPE、继代后病毒量渐下降。在鸭胚肾细胞中生长较差，继代后可以适应，引起CPE。有些毒株经盲传后也可能在鹅胚肾细胞中生长。弱毒株在鸡胚细胞培养中滴度很低。3型仅能在鸭胚肝和肾细胞培养中生长。

(3)动物接种 病料接种1～7日龄易感雏鸭，肌肉0．1～0．2ml，16h后开始死亡，48～72h几乎全部死亡。

3．血清学试验

(1)病毒中和试验 用于分离株的鉴定和血清抗体的检测。本试验可在禽胚或细胞培养中进行。

(2)间接血凝 将病毒抗原致敏绵羊RBC作间接和间接抑制血凝，据说比中和试验更敏感。

(3)免疫荧光 病鸭肝冰冻切片作直接法检查，结果快速而准确。

(4)免疫扩散 此法简易，但特异性尚有争论。