马传染性贫血病毒
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第715页（2617字）
马传染性贫血(马传贫)是马属动物的一种以持续感染，免疫抑制，贫血以及反复发病转归死亡的传染病。
一、样品采集
无菌采取肝、脾、骨髓、淋巴结和抗凝血。
二、病毒分离
主要应用细胞培养。
1．采取健康驴或马的抗凝血，分离白细胞。
2．加原血浆量1～2倍体积的生长液(含50%牛血清)混匀分装于培养瓶内。
3．培养24～48h后，细胞贴壁并伸出突起。吸去生长液，按10%营养液量接种被检材料，加入上述生长液，继续培养。
4．一般需盲传，每次7～10天。
5．被检材料中如有本病毒，在盲传三代后出现以细胞变圆、破碎、脱落为特征的细胞病变。这时可用血清学试验进一步鉴定。
欲从慢性病马分离病毒，可采抗凝血分离白细胞，用上法培养。7～10天后，将培养物冻融3次，再接种于该马新的白细胞培养内，重复上述培养进行盲传。
三、血清学试验
(一)免疫扩散
1．在1%琼脂凝胶板上打成七孔型，中央孔径为4mm，外周孔径为6mm，孔距为3mm。
2．外周2、5孔加阳性血清，其余1、3、4、6孔分别加被检血清，中央孔加抗原(用白细胞培养提取)。
3．放置室温中3天，逐日观察，记录结果。
(二)补体结合试验(半微量补体稀释法)
1．抗原分为V抗原(感染马传贫病毒的白细胞培养提取物)和C抗原(未接病毒)。
2．被检血清和阳性对照血清分别用GVB液按1∶1稀释，58℃30min(马血清)或62℃30min(驴、骡血清)灭能处理。
3．操作程序 按常规进行。
用补体结合试验测白细胞培养物抗原时，基本按上述方法进行，大致改动如下。
①接种被检材料或接种已知马传贫病毒的细胞培养物，经三次冻融和吐温-80处理后做为V抗原；未接毒培养物同样处理作为C抗原。
②被检血清换为已知马传贫阳性血清。
(三)间接ELISA 有诊断试剂盒，盒内备有全部试验所需的微量滴定板和试剂，使用颇为方便。
(四)单克隆抗体酶标斑点试验(BT)
1．将受检血清及阳性和阴性对照血清用微量取样器吸2．5μl，点在硝酸纤维素膜上，室温干燥。
2．将膜浸入含有0．25%明胶的0．02mol／lPBS(pH7．2)溶液1h。
3．用含0．05%吐温-20的0．02mol／lPBS(pH7．2)漂洗3次，每次3～5min。
4．将膜浸入马传贫病毒抗原溶液中(抗原用2项的溶液稀释)，室温下作用1h。
5．漂洗后，将膜置入2项溶液稀释的马传贫单克隆抗体-酶结合物溶液中1h。
6．漂洗后，膜浸入DAB底物溶液显色。
7．用蒸馏水漂洗终止反应。
8．判定结果。显红棕色斑点者为阳性。
(五)免疫荧光(直接法或间接法) 用以检测白细胞涂片，组织冰冻切片或白细胞培养中的病毒抗原。
(六)循环免疫复合物检测(抗原特异性法)
1．将新采取的血清(冻结保存，避免反复冻融)10倍稀释，取1ml置离心管内，加聚乙二醇(分子量6000)，使其终浓度为2．5%，于4℃作用1h，然后移到37℃作用30min。
2．以1300×g离心10min，弃上清，沉淀用2．5%PEG洗2次。
3．在沉淀中加入10μl马传贫荧光抗体，于37℃作用2h。
4．加入适量PEG，使终浓度为2．5%，4℃作用1h，移于37℃作用30min。
5．按第2项洗涤。
6．将离心管内的悬液移入微量滴定板孔内100μl，再加100μl底物溶液，室温放置20～30min后测OD492。
7．判定。以被检血清样品的吸收值大于或等于2为阳性。
(七)疫苗免疫马与自然感染马的鉴别诊断
1．临床及血液学检查 疫苗免疫马无任何临床及血液学变化。
2．以抗马传贫弱毒的型特异性单克隆抗体做斑点试验，如为阴性，再以琼扩试验检查，出现阳性者可认为是感染马。
3．血清加热后做琼扩试验，将被检血清3倍稀释，于65℃水浴加热20min，阳性血清加热35min。出现阳性者可认为是感染马。