蜜蜂检疫实施方法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第200页（1728字）

(一)取样及计算标准

1．蜂群的取样：实检蜂群不得少于蜂群总数的10%。

2．蜜蜂的取样：按实检蜂群每群取蜜蜂20只以上，检查蜂螨时每群应取蜜蜂100只以上。

3．子脾的取样：按实检蜂群每群取封盖或未封盖子脾1－2张，检查蜂螨时应挑取封盖的雄蜂房或工蜂房。

4．计算标准：

(3)子脾的判定标准：在取样子脾中凡查到患病个体，即定为患病。

(二)检疫方法

1．症状检查。观察巢门口和附近场地上以及巢内框梁上是否有病蜂出现，并仔细观察病蜂的临床症状。同时观察巢内封盖或未封盖子脾上是否有病、死的幼虫或蛹出现，并仔细观察其临床症状。

(1)在巢门口或附近场地上发现有翅残缺不全或无翅的幼蜂爬行，以及死蛹被工蜂拖出等情况时，可疑为蜂螨为害。

(2)在巢门口出现黑头黑尾、腹部膨大或不膨大、两翅颤抖、失去飞翔能力的病蜂，开箱检查又有较多的病蜂被健康蜂驱赶到框梁上或蜂箱的四角时，应疑为患孢子虫病。

(3)在封盖子脾上出现油光、湿润、有针头大的穿孔，死亡幼虫呈咖啡色并具有粘性时，可疑为患美洲幼虫腐臭病。

(4)在未封盖子脾上出现幼虫房与空房相间的“插花子脾”，死亡幼虫呈浅黄色或褐色，无粘性时，应疑为患欧洲幼虫腐臭病。

(5)在封盖子脾上出现穿孔，或已封盖的幼虫房又重新被工蜂咬开，死亡幼虫呈灰褐色或暗褐色，内充满颗粒状液，尸体呈囊状时，应疑似囊状幼虫病。

2．实验室检查。在症状检查尚不能确定患何种病害时，可进一步作实验室检查。

(1)当蜂群可疑为蜂螨为害时，可从蜂群中取出工蜂100只，封盖幼虫房(主要取雄蜂房)50个，用扩大镜仔细检查，计数并计算寄生密度。

(2)当蜂群可疑为患美洲幼虫腐臭病时，可从蜂群中抽取封盖子脾1－2张，从中挑取死亡幼虫5－10条，置于瓷研钵中，加少量无菌水研磨，制成悬浮液，用玻棒粘取少许涂片，火焰固定，用孔雀绿番红芽孢染色法染色，在1000－1500倍的显微镜下检查，若发现有大量呈游离状态的芽孢存在，可确定为美洲幼虫腐臭病。

孔雀绿番红芽孢染色检验方法：

①涂片，火焰固定；

②滴加5%孔雀绿水溶液，加热至发生蒸气，约经3－5分钟；

③水洗，以0．5%番红水溶液复染1分钟；

④水洗，吸干，以油镜镜检。芽孢呈绿色，菌呈红色。

(3)当蜂群可疑为患欧洲幼虫腐臭病时，可从蜂群取3－4日龄未封盖的幼虫脾1－2张，从中挑取死幼虫5－10条，用同美洲幼虫腐臭病的检查方法进行镜检。若发现有略呈披针形的链球菌，并有许多杆菌和芽孢杆菌等多种微生物，可确定为欧洲幼虫腐臭病。

(4)当蜂群可疑为患孢子虫病时，可从蜂群中取病蜂20只，取出消化系统，置瓷钵中研磨，加无菌水5毫升，制成悬浮液，直接涂片镜检。若发现有大量呈椭圆形、转动微动螺旋见有蓝色折光、似谷粒般的孢子时，可确定为孢子虫病。