植株中尿囊素态氮的测定(铁氰化钾比色法)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第636页（1754字）

(一)适用范围 本法通过对尿囊素的测定再换算成尿囊素态氮。方法简单，快速而准确。作物体内的尿囊素在加热过程中形成尿素和二羟乙酸，然后在0．02N酸度条件下，与盐酸苯肼作用，再在冰冷强酸情况下与铁氰化钾作用生成红色物质，依颜色深浅进行比色测定。

(二)试剂配制

1．0．5N氢氧化钠。

2．0．5N盐酸。

3．浓盐酸。

4．0．33%盐酸苯肼溶液 称0．05g盐酸苯肼溶于15ml水中(现用现配，不能超过6h)。

5．1．67%铁氰化钾溶液 称0．25g铁氰化钾〔K₃Fe(CN)₃〕，溶于15ml水中(当天现配)。

6．0．01N氢氧化钠溶液。

7．尿囊酸钾及其标准液的制备 将2．8g尿囊素(C₄H₄O₃N₄)，放入20ml 1N氢氧化钾溶液中，且使溶液温度在75℃情况下，保持30min，冷却后加入200ml 95%乙醇，放在冰箱(℃)过夜，此时约产生3．79g尿囊素钾(理论产量)。加极少量的热水和20∶1的乙醇，再结晶一次，在100℃温度下烘干，研成粉末(熔点约为183－185℃)。再置105℃下烘2h。称取25mg，放入1L容量瓶中，以0．01N氢氧化钠稀至刻度，此为25ppm尿囊酸钾标准母液(每三个月配一次)。

(三)测定步骤 称取干样本1．000g，放入250ml三角瓶中，准确加85℃蒸馏水100ml，浸提振荡10min，过滤。吸取滤液1－5ml，于25ml刻度比色管中(待测液不是5ml者，加水至5ml)，加0．5N氢氧化钠lml，于沸水浴中加热7min，立即移至20℃水中冷却，加0．5N盐酸1．25ml，摇匀，再加0．33%盐酸苯肼lml，摇匀。再放入沸水浴中煮2min，取出立即放入-10℃的冰盐浴中，冷却至开始冻结后约3min取出，再加已冷却到-10℃的浓盐酸3m1，摇匀，再加1ml1．67%铁氰化钾充分摇匀，30min后以蒸馏水稀释至刻度，摇匀静止片刻，用520nm波长读取吸光度，从工作曲线上查得相应尿囊酸钾ppm数。

工作曲线绘制：吸取尿囊酸钾标准液(25ppm)，0，1．25，2．5，5，l0，15，20，25m1，分别置25ml容量瓶中，以0．01N氢氧化钠稀释至刻度，摇匀。分别吸取5m1于25m1刻度比色管中，加0．25m1(5滴)0．5N盐酸，1ml0．33%盐酸苯肼，摇匀。即按“放入沸水浴中煮2min……”的测定步骤进行测定，读取吸光度。此系列标准液浓度为0，0．25，0．5，1，2，3，4，5ppm(尿囊酸钾)。

(四)结果计算

式中：A——显色时所取待测液毫升数；

0．738——尿囊酸钾(C₄H₇O₄N₄K，分子量214．222)；换算为尿囊素(C₄H₆O₃N₄，分子量158．1164)的因数。

0．3542——尿囊素换算为尿囊素态氮的因素。

(五)注释

①尿囊酸钾作标准液比尿囊素好，因钾盐较稳定，且易提纯。但计算时需换算成尿囊素含量。

②实验要求0．5N氢氧化钠与0．5N盐酸浓度必须准确一致，试剂用量要求准确。

③在冰盐浴中如果不冻结，可在冰箱中冷却30min。冰盐浴配制如下：100g冰与30g氯化钾混合。