0．1NHCl浸提(双硫腙比色法)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第686页（3406字）

1．适用范围及原理本法适用于酸性及中性土壤有效锌及铜的浸提，不适用于石灰性土壤。

锌与双硫腙(简写作Dz)反应生成红色螯合物——双硫腙的酮型盐，即Zn(HD_z)₂。Zn(HD_z)₂不溶于中性和无机酸的水溶液中，而能溶于CCl₄或CHCl₃中，使溶液呈紫红色，可用作锌的比色测定。其最大吸收值的波长在538nm处。

用双硫腙比色法测锌，首先在含有柠檬酸铵的溶液中，用D_z-CCl₄溶液萃取锌，其最适pH为8．2－8．5，在其他pH时萃取百分率降低，故必须严格控制酸碱度。同时萃取出的元素有Cu、Co、Ni、Pb等，能干扰Zn的比色测定。由于Zn(HD_z)₂在稀酸中(如0．01N HCl)能被破坏，而Cu等干扰元素的双硫腙盐则对酸稳定，故加0．02N HCl于有机相中，则Zn²⁺即进入水相(称用酸反萃取)而Cu等仍留在有机相中而与Zn²⁺分离。

2．试剂配制

(1)无锌蒸馏水：将普通蒸馏水用不含锌的硬玻璃蒸馏器再蒸馏一次。

(2)重蒸馏6N盐酸：将1∶1水和浓盐酸混合液用硬玻璃蒸馏器蒸馏，弃去初蒸馏出来的蒸馏液，收集恒沸点盐酸，其浓度为6N。

(3)0．1N盐酸(浸提剂)：量取16．6ml的重蒸馏盐酸，稀释至1L，用标准碱标定，以酚酞作指示剂。用稀盐酸或纯水调整至正确的0．1N盐酸。

(4)0．02N盐酸：将0．1N盐酸200ml稀释至1L。

(5)柠檬酸铵缓冲溶液：溶解225g柠檬酸铵于1L水中，放在2L的分液漏斗中，加浓氨水使pH至8．5(用酚酞作指示剂)，连续用100mlD_z／CCl₄提取二次〔见(7)〕，以除去溶液中金属杂质，再连续用100mlCCl₄浸提二次，使水溶液无D_z试剂的颜色。

(6)锌标准溶液：溶解0．1g金属锌于50ml₀．02N盐酸中，加水至1L，浓度约为100μg锌／ml。计算其准确浓度，吸取10m1用水稀释成为2μg锌／m1(即2ppm)。或用硫酸锌配制：将0．0880gZnSO₄·7H₂O溶解于100m1水中，吸取10m1稀释成1L，成为2μg锌／m1。

(7)双硫腙／四氯化碳溶液(简写为D_z／CCl₄)：将0．2g双硫腙(D_z Dithizon，Diphenyl thiocarbazon分子式C₁₃H₁₂N₄S)和1LCCl₄放于大分液漏斗中，振荡分液漏斗约15min使之溶解，再加2ml0．02N NH₄OH，摇动分液漏斗，使双硫腙进入水相，而金属杂质的双硫腙盐则留在CCl₄中，使CCl₄呈紫红色。放置分层后，弃去CCl₄溶液。于水相中再加50m1CCl₄萃取，放置分层后弃去CCl₄溶液，如此用CCl₄反复萃取，直到CCl₄溶液为绿色为止。最后加500mlCCl₄和50m11N盐酸。摇动分液漏斗使双硫腙进入CCl₄中。然后用CCl₄稀释成2L。贮存在硬质玻璃瓶中，放在暗处或冰箱内(温度为2－3℃)。

(8)0．25%二乙基二硫氨基甲酸钠溶液(DDTC)：将2．5gDDTC钠盐(Sodium diethyldithiocarbamate，又名Cupral简称DDTC分子式C₅H₁₀NS₂Na)溶于lL水中，移入分液漏斗，加50m1CCl₄萃取，除去金属杂质，弃去CCl₄层，DDTC溶液贮于棕色瓶中，存放于冰箱中。

3．测定步骤 有效锌的浸提：称取25．00g风干土(过1mm筛)与250m10．1N HCl在振荡机上振荡1．5h。用离心机或漏斗滤出清液备用。

有效锌的测定：取部分清液(含锌5－20μg)放入125m1分液漏斗中，加5ml柠檬酸铵溶液，加2滴酚酞指示剂，用NH₄OH调节溶液pH至8．3－8．5(淡红色)，加Dz／CCl4溶液20ml，摇动3min，静置使CCl₄层和水层分开，将CCl₄层放入第二个分液漏斗中，其中盛有50ml0．02N HCl。在第一个分液漏斗中再加10m1D_z-CCl₄溶液作第二次萃取，将CCl₄层并入第二个分液漏斗中。若第二次萃取时CCl₄层仍呈明显的紫红色，表明加入的D_z-CCl₄溶液不足，应再加5－10m1D_z-CCl₄溶液进行第三次萃取。最后用5m1CCl₄洗涤水溶液，将CCl₄与Dz-CCl₄萃取液合并，其中含有全部锌和其他双硫腙金属。弃去水溶液。

将盛有Dz-CCl₄萃取液和50m10．02N HCl的第二分液漏斗振荡3min进行反萃取，于是锌及少数其他金属进入HCl层。分层后放出并弃去CCl₄层，用少量CCl₄洗涤HCl层两次。

在第二分液漏斗中加10N NH₄OH约1．5m1，柠檬酸铵溶液5ml(使溶液pH8．3－8．5)以及DDTC溶液10m1，摇匀后再准确加入D_z／CCl₄溶液10m1。摇动分液漏斗4min，放置使水层和CCl₄层分开，用虹吸排出水液，弃去。

于CC1₄层中加入0．01N NH₄OH50m1，摇动2min，以除去CCl₄层中多余的D_z试剂，擦净分液漏斗的内颈，将分液漏斗中的紫红色的锌络合物提取液倒入比色槽中，用535nm滤光片进行比色。

同时用1N HCl3m1按上法作空白试验。

标准曲线的绘制：吸取含锌标准溶液1－25μg，配制成系列标准溶液。为此可吸取2ppm(即含锌2μg／m1)锌标准溶液2．5，5．0，7．5，10．0，12．5m1，同上法进行显色，最后于10m1CCl₄中，即得含锌为0．5、1．0、1．5、2．0、2．5ppm系列标准显色溶液，以锌ppm数为横座标，吸收值为纵座标，在方格纸上绘制标准曲线。

4．结果计算

5．注释

(1)双硫腙比色法测锌必须小心操作，注意防止污染或损失锌。所用玻璃器皿均应选用不含锌的硬质玻璃制品(如上海产GG-17号玻璃，北京产95料玻璃，Pyrex玻璃)。测定过程中所用的试剂，都应经过提纯，除去所含的微量锌。普通蒸馏水中含锌，应用不含锌的硬质玻璃蒸馏器重蒸馏，或用离子交换纯水器提纯。所有玻璃器皿除用一般方法洗净外，还应用6N HCl洗涤一次。并随即用纯水彻底洗去HCl(酸洗后不应再用自来水冲洗)后使用。

(2)用0．1N HCl，特别是用DTPA浸提土壤(见后DTPA浸提-双硫腙比色法)是一个非平衡体系。因此，影响土壤与浸提剂间的反应速率的因子，都会影响所浸出的锌、铜等的浓度，因而提取条件必须标准化。例如土壤的粉碎程度、振荡时间、振荡强度、提取液的酸度、提取时的温度等都应固定下来，否则测定结果不能与习用的评价标准来进行比较。DTPA浸提法所要求的条件：土壤用塑料棒在塑料板上压碎，通过1mm筛孔的尼龙筛；土壤盛在150inl三角瓶中，使用往复振荡机，每分钟往复振荡180次；浸提时室温应保持在25℃左右；浸提剂的pH值应为7．30；浸提时间为2h。

(3)必须严格控制萃取时溶液的酸度，使之在pH8．3－8．5。过高或过低的酸度将导致锌的提取不完全。为了准确控制萃取时溶液的酸度，在调节溶液pH时最好使用pH计而不用酚酞指示剂。