(2)棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法一)
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第210页（3279字）
山东省农业科学院中心实验室 陈子雷 王文博 陈琦 丁蕊艳 李瑞菊
样本用混合溶剂提取，硅胶柱层析净化，液相色谱法(UV)测定。
1．主要仪器及设备
液相色谱仪 紫外检测器(UV)
高速匀浆机 8000～24000r／min
固相萃取装置
超声波清洗器
往复旋转式振荡器
层析柱 3mLSPE空管柱
2．主要试剂
甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、丙酮(重蒸)、二氯甲烷(重蒸)、正己烷(重蒸)、石油醚(30～60℃，重蒸)、盐酸、氢氧化钠、醋酸铵、氯化钠、无水硫酸钠
层析硅胶10～40μm，150℃处理5h，冷却后，加5%水减活，密封保存
溶剂① 甲醇／5%氯化钠／1mol／L氢氧化钠(65∶27∶8，V／V／V)
溶剂② 0．16mol／L盐酸／5%氯化钠
溶剂③ 0．04mol／L盐酸／5%氯化钠
溶剂④ 甲醇／5%氯化钠(70∶3，V／V)
XDE-105Factor A和Factor D标准品 75．5%+14．4%
XDE-105Factor B标准品 94．0%
XDE-105Factor B of Factor D标准品 97．4%
3．检测步骤
3．1 提取
3．1．1 土壤
称取20g样本于250mL三角瓶中，加入50mL×2溶剂①，超声提取，每次15min，过滤。残渣用20mL×2溶剂①洗涤。合并滤液于250mL量筒中，用溶剂①定容至150mL。
3．1．2 棉叶
称10g棉叶样本于广口瓶中，准确加入100mL溶剂①，以20000r／min匀浆1min，静置过滤于100mL具塞量筒内。
3．1．3 棉籽
称取10g粉碎好的棉籽样本，准确加入100mL石油醚／丙酮(60∶40，V／V)，振荡30min，再用超声波提取10min，过滤。取50mL，用旋转蒸发器(45℃)浓缩至干，用50mL石油醚溶解。
3．2 净化
3．2．1 液-液分配
3．2．1．1 土壤、棉叶
取75mL土壤提取液于500mL分液漏斗内，加入75mL溶剂②(棉叶提取液50mL加50mL溶剂②)，用1mol／L盐酸调节pH至2。加入50mL石油醚，振荡洗涤30s，弃去石油醚相。下层水相用1mol／L氢氧化钠调节pH至10～12，用50mL×3石油醚，用力振荡提取，每次30s。合并石油醚相，经无水硫酸钠层脱水，用旋转蒸发器(45℃)浓缩至近干，用10mL正己烷溶解，待柱层析净化。
3．2．1．2 棉籽
将棉籽提取液转入250mL分液漏斗内，先后用30mL溶剂④和30mL溶剂③冲洗三角瓶并转入分液漏斗中，轻轻振摇30s，弃去石油醚相。水相中加入4mL1mol／L氢氧化钠调节pH至10～12，用50mL×3石油醚萃取，石油醚相经无水硫酸钠脱水后合并，用旋转蒸发器(45℃)浓缩至近干，用10mL正己烷溶解，待柱层析净化。
3．2．2 柱层析净化
称取0．8g硅胶填装于层析柱中，依次用10mL二氯甲烷／甲醇(3∶1，V／V)、6mL乙腈、6mL二氯甲烷和20mL正己烷预淋。将待净化的正己烷溶液加入柱中，用10mL×2正己烷冲洗蒸馏瓶并用于淋洗，弃去。用6mL二氯甲烷／甲醇(3∶1，V／V)洗脱并收集于离心管中，用旋转蒸发器(45℃)浓缩至干，用2mL乙腈／甲醇／2%醋酸钠(1∶1∶1，V／V／V)定容，待测定。
3．3 液相色谱法测定
检测器 UV
波长 250nm
色谱柱 HypersilODS2C18RP-Column，250mm×4．6mm，0．5μm
柱温 30℃
流动相 泵A，2%醋酸铵／乙腈(189∶1500，V／V)；泵B，甲醇
流速 泵A，0．48mL／min；泵B，0．32mL／min
进样量 10μL
保留时间 XDE-105Factor A约为10．90min，D约为12．71min，B约为8．83min，B of D约为10．20min
4．结果计算
外标(峰面积)-标准曲线法定量
5．灵敏度、准确度和精确度
最小检出量 9×10－11g。
最低检测浓度 棉籽、棉叶0．04mg／kg，土壤0．02mg／kg。
回收率 土壤中添加多杀菌素0．05～0．5mg／kg时，平均回收率为72．4%～102．2%；棉叶中添加多杀菌素0．1～2．0mg／kg时，平均回收率为69．0%～108．0%；棉籽中添加多杀菌素0．1～2．0mg／kg时，平均回收率为77．3%～96．0%。见表1-31-3、表1-31-4、表1-31-5。
相对标准偏差 0．8%～17．1%。见表1-31-3、表1-31-4、表1-31-5。
表1-31-3 土壤中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果
表1-31-4 棉叶中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果
表1-31-5 棉籽中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果
