(2)棉籽、植株和土壤中残留量检测方法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第476页（3937字）

山西省农业科学院植物保护研究所 秦曙 王霞 周华 乔雄梧 朱九生

精噁唑禾草灵(AEF046369)和它的苯氧丙酸代谢物(AEF088406)用乙腈／HCl(90∶10，V／V)，混合液回流提取，液-液分配净化，在130℃下被酸酐(吡啶作为催化剂)衍生化，生成的衍生物乙酰基苯并噁唑酮(AEF083312)用硅胶柱层析净化，气相色谱法(ECD)测定。残留量最后用相当于精噁唑禾草灵的量来表达。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪电子捕获检测器(ECD)

旋转蒸发器

循环水式多用真空泵

普通摇床

电热恒温水浴锅

氮吹仪

固相萃取装置

回流装置

高速万能粉碎机

层析柱 Φ10mm×100mm

20mL顶空瓶 具聚四氟乙烯／硅橡胶密封垫(20mm)和密封铝盖(20mm)

2．主要试剂

乙腈、石油醚、二氯甲烷、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、乙酸酐、吡啶、浓盐酸、无水硫酸钠

乙酰化试剂 乙酸酐／吡啶(5∶1，V／V)

淋洗剂 乙酸乙酯／正己烷(2∶98，V／V)

薄层层析硅胶G 130℃下烘4h以上，加1．5%水减活，放置平衡过夜

精噁唑禾草灵标准品、乙酰基苯并噁唑酮标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 棉籽、棉叶

称取10g粉碎后的样本，置于250mL具塞三角瓶中，分别以60mL、40mL乙腈(棉籽60mL乙腈)振荡提取两次，每次30min。经快速定性滤纸过滤，合并滤液。定量取提取液(棉籽80mL、棉叶90mL)于250mL圆底烧瓶中，加入10mL浓盐酸和50mL蒸馏水，在水浴84℃上回流6h，冷却，用50mL蒸馏水从回流装置顶部冲洗回流管。

3．1．2 土壤

取20g土壤样本用滤纸筒包好，放置在250mL索氏提取器的提取管中，在250mL的平底烧瓶中加入90mL乙腈和10mL浓盐酸，安装好装置，从冷凝管顶部加入50mL蒸馏水，在90℃水浴上回流提取6h。冷却，从回流装置顶部用50mL蒸馏水冲洗回流管。

同时称取土壤约5．00g于铝盒中，放入105℃烘箱中过夜，测定土壤含水量。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将水解后的溶液摇匀，棉叶取出49mL、棉籽取出65mL(相当于2g样量)、土壤取出62mL(相当于4g样量)置于500mL梨形分液漏斗中，加入200mL2%硫酸钠溶液。用50mL×2石油醚洗涤，弃去有机相。水相用50mL×2二氯甲烷萃取，每次1min。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠(用二氯甲烷预淋)过滤于250mL三角瓶中，用旋转蒸发器(＜40℃)慢蒸至近干，用氮气吹干。

3．2．2 乙酰化

用丙酮分多次漂洗上述三角瓶，并转移至20mL顶空瓶中，用氮气吹干。加入1mL乙酰化试剂，使用压盖器将瓶口用聚四氟乙烯／硅橡胶密封垫(20mm)和密封铝盖(20mm)密封，在130℃条件下反应3h。常温下冷却后，加入5mL2%硫酸钠水溶液，振摇以破坏过量的乙酰化试剂。用3mL×2正己烷萃取，每次1min。吸取上层正己烷于10mL具塞刻度试管中，用氮气吹至约2mL，待柱层析净化。

3．2．3 柱层析净化

在层析柱中，用正己烷湿法装柱，依次装入2g硅胶和2cm无水硫酸钠。用少量正己烷将上述残余溶液转移至柱上，并用正己烷淋洗，弃去40mL淋出物。改用2%乙酸乙酯石油醚淋洗剂淋洗，弃去前13mL，收集后25mL洗脱液。浓缩至适当体积，待测。

3．3 气相色谱法测定

检测器 ECD

色谱柱 HP-5，25m×0．32mm，0．25μm

检测温度 进样口230℃；检测器260℃；柱温150℃，1min，5℃／min，190℃，30℃／min，250℃，5min

载气 高纯氮，柱头压80kPa

进样量 1μL，不分流进样，1min后打开分流阀

保留时间 7．49min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

样本中精噁唑禾草灵的残留浓度用外标法以峰面积定量计算：

式中 C——样本中精噁唑禾草灵的残留浓度，mg／kg

C₀——AEF083312标准溶液浓度，μg／mL

A₀——AEF083312标准溶液的峰面积

A₁——待测样本的峰面积

V₁——待测样本的定容体积，mL

V₁——样本提取液的总体积，mL

V₂——水解时分取提取液的体积，mL

V₃——水解后加水后的总体积，mL

V₄——用于液-液分配分取的水解水溶液体积，mL

W——样本的取样量，g

1．71——精噁唑禾草灵与AEF083312的分子量比。若测定AEF088406代谢物的残留浓度，则其数值为1．58。

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．0×10^－11g(精噁唑禾草灵的乙酰化产物，AEF083312)

最低检测浓度 精噁唑禾草灵在棉籽及土壤中为0．02mg／kg。在棉叶中为0．10mg／kg

回收率 土壤、棉叶和棉籽中添加精噁唑禾草灵和AEF088406(苯氧丙酸代谢物)0．02～1．00mg／kg时，平均回收率分别为81．0%～101．4%和73．2%～94．5%，见表3-17-3、表3-17-4。

相对标准偏差 3．1%～21．6%，见表3-17-3、表3-17-4。

表3-17-3 土壤、棉叶、棉籽中精噁唑禾草灵添加回收率及相对标准偏差实验结果

表3-17-4 土壤、棉叶、棉籽中精噁唑禾草灵代谢物AEF088406添加回收率及相对标准偏差实验结果

6．棉籽、植株和土壤中精噁唑禾草灵乙酰化产物(AEF083312)的气相色谱测定谱图

见图3-17-2。

图3-17-2 棉籽、植株和土壤中精噁唑禾草灵乙酰化产物(AEF083312)的气相色谱测定谱图