血糖的测定
出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第95页（3174字）
方法一：Fo1in——吴宪法测定血糖
血糖浓度是反映糖代谢情况的一项重要指标，Fo1in——吴宪法过去曾在国际上普遍应用。该方法是利用葡萄糖还原碱性铜盐试剂中的Cu++生成Cu2O，然后使Cu2O与磷钼酸作用，生成钼蓝，可作比色测定。
该法所测血糖值比真正的还原糖值高一些。这是因为血滤液中还存在一些其它还原性物质，如谷胱甘肽，葡萄糖醛酸，尿酸，维生素C等。因此在表示血糖值时，应注明所用方法。
试剂
(1)10%钨酸钠溶液：此溶液应为中性或弱碱性，否则蛋白质沉淀不完全。其校正方法为取10毫升此溶液，加入0．1N硫酸溶液0．4毫升，再加入1%酚肽1滴，溶液应呈粉红色，否则应用酸或碱调节。
(2)2／3N硫酸溶液：取18．67毫升分析纯浓硫酸(比重1．84)，注入水中并定容至1000毫升。
(3)碱性铜试剂：在400毫升水中加入40克无水Na2CO3(A、R、)，然后转移至1000毫升容量瓶中，加入7．5克酒石酸(A、R、)和4．5克CuSo4·5H2O(A、R、)全部溶解后加水稀释至1000毫升。
(4)磷钼酸试剂：称35克钼酸，5克钨酸钠，200毫升10%NaOH和200毫升水置一大烧杯中混合，煮沸20～40分钟以驱除试剂中的氨。冷却后稀释至约350毫升，添加85%磷酸12．5毫升，再加水稀释至500毫升。
(5)葡萄糖标准液：准确称取分析纯在干燥器中干燥过的葡萄糖1000毫克，置100毫升容量瓶中，以饱和苯甲酸溶液作溶剂溶解之并稀释至刻度，此为贮存液，可长期保存。临用前用水稀释50倍，使葡萄糖含量为0．2毫克／毫升。此应用液4℃保存一周。
(6)新鲜血液试样：以氟化钠或草酸铵为抗凝剂。
操作步骤
(1)以奥氏吸管准确吸取1．00毫升血样。置50毫升锥形瓶中，(血样放出时应控制血液缓慢流下，吸管内壁应不见明显的血液附着其上)。加入7毫升蒸馏水，混匀，加入1毫升2／3N硫酸，混匀后慢慢滴加1．00毫升10%钨酸钠，一面滴加一面轻轻旋摇锥形瓶。蛋白质发生沉淀。
(2)放置5分钟后，用优质不含氮的干滤纸过滤或离心，除去沉淀，过滤时在漏斗上盖一表面皿，减少Cu++与空气的接触。滤液应清澈透明无色。
如此制得的无蛋白滤液中糖的浓度为全血的1／10。
(3)取Fo1in－吴宪血糖管3支(25毫升刻度血糖管)，编号后按表5进行操作。
表5 Folin——吴宪血糖测定操作示意 单位：毫升
(4)将以上3支管同时进行沸水浴，煮沸8分钟，准时取出流水冷却。向各管分别加入2毫升磷钼酸试剂，再加蒸馏水至25毫升刻度。以塑料薄膜包裹的橡皮塞塞紧后颠倒混匀。在721型分光光度计上于620～640nm波长处进行比色测定。读取光密度值。
(5)计算：
注：O．D为不同样品的光密度值。
方法二：Nelson-Somogyi法测定血糖：
本法作了改进，使用ZnSO4与Ba(OH)2作用生成Zn(OH)2－BaSO4胶状沉淀物沉淀血样中的蛋白质，制取无蛋白滤液，该蛋白质沉淀剂可以除去除葡萄糖之外的谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、尿酸等其它还原性物质，因此得到的血糖值接近于真正的葡萄糖值。本法碱性酮试剂含有大量Na2SO4。可减少Cu2O的再氧化，可以不必使用特制的血糖管。本法采用砷钼酸代替磷钼酸使最后获得的比色物质较稳定，可放置24小时以上。本法需要血样少，均为本法优点。但本法需要严格规定反应条件，才能得到可重复性结果。
试剂
(1)10%草酸钾溶液(抗凝剂)。
(2)4．5%Ba(OH)2溶液：密封保存，以防吸收CO2。
(3)5%ZnSO4。
(4)碱性铜试剂：称取无水磷酸氢二钠29克，酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)40克，溶于700毫升蒸馏水中，加入1NNaOH100毫升，一边搅拌一边加入10%硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液80毫升，再加入无水硫酸钠180克，溶解后用蒸馏水定容至1000毫升，静置2天后过滤。长期保存如出现沉淀，过滤后使用。
(5)砷钼酸试剂：
A液：称钼酸铵〔(NH4)6Mo7O24·H2O〕50克，加水900毫升，再缓缓加入浓H2SO442毫升，搅拌使钼酸铵完全溶解。
B液：称砷酸氢二钠(Na2HAsO4·7H2O)6克溶于50毫升水中。
将A、B两液混合，在37℃放置48小时后置棕色瓶中保存。该试剂应呈黄色，如呈蓝绿色时不可使用。
(6)葡萄糖标准液：同Folin－吴宪法。
操作步骤
(1)用0．2毫升微量吸管准确取0．2毫升血液，用滤纸擦净吸管外壁，然后小心缓慢的将血样放入干燥试管底部，最后一点要吹出并靠落在试管内壁上。然后加入1．9毫升Ba(OH)2溶液和1．9毫升ZnSO4溶液，充分振摇混匀后，以3000转／分离心5分钟。
(2)取10毫升带磨口玻璃塞的刻度试管3支，标号后按表6添加试剂。
表6 Nelson-Somogyi法测定血糖操作示意 单位：毫升
(3)盖上玻璃塞，将以上3支试管沸水浴中加热20分钟(水浴保持沸腾)。
(4)取出流水冷却，各管分别加入砷钼酸试剂1毫升，混匀，加入10毫升蒸馏水至刻度，混匀。
(5)于721型分光光度计上比色测定，在480nm波长。以空白调零，测光密度值。
(6)计算：
注：O．D为不同样品的光密度值。