维生素E的测定

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第194页（2101字）

维生系E(生育酚)能将三价铁离子还原为二价铁离子，利用所生成的二价铁离子与α，α－联氮苯产生的颜色反应，可进行比色测定。

试剂

(1)2N氢氧化钾甲醇溶液：称11．2克氢氧化钾溶于甲醇中，用甲醇定容至100毫升。

(2)2%氢氧化钾溶液。

(3)乙醚。

(4)无水乙醇。

(5)甲醇。

(6)0．2%三氯化铁(使用前配制)。

(7)0．5%α，α－联氮苯无水乙醇溶液。

(8)吸附柱的制备：用纯化过的吸附剂(Floridinxs装满12×30mm柱。

吸附剂的纯化方法：取吸附剂加盐酸置沸水浴上蒸煮1小时，再用新的酸在室温下处理一次。然后用水洗涤至不含酸。再用乙醇和苯相继洗涤，在室温下干燥备用。

操作步骤

1．样品的提取与皂化

(1)准确称10g样品，置烧杯中，加入40毫升水搅拌均匀，移入250毫升分液漏斗中，分别加入氨水5毫升，乙醇35毫升，摇匀，然后用乙醚进行抽提，每次用乙醚40毫升，共抽提3次。收集乙醚层，每次用水100毫升洗涤乙醚层，共3次。水层再用30毫升乙醚进行抽提一次，合并所用乙醚。

(2)在索氏脂肪抽提器中蒸发除去乙醚，或在氮气流下蒸发除去乙醚。使瓶内乙醚蒸发除尽。

(3)脂肪瓶上连接回流冷凝管，在氮气流中，用2毫升2N氢氧化钾甲醇溶液在72℃～74℃温度下皂化10分钟。皂化液用8毫升甲醇稀释，并移入分液漏斗中，加10毫水升，然后用乙醚萃取3次，每次50毫升。合并乙醚提取液，用水洗涤，再用2%氢氧化钾水溶液洗涤，再用水洗至洗液无碱性。提取液过无水硫酸钠柱脱水，在CO₂气流中，减压蒸发至干。

2．纯化

(1)将皂化过的提取物，溶解于5毫升苯液中，通过预先用苯润湿的吸附柱，然后用苯洗提至洗出液容积为25毫升。

(2)吸附柱上的颜色被类胡萝卜素变为微绿蓝色，被维生素A变为暗蓝色。若无胡萝卜素存在，可直接溶解提取物于25毫升乙醚中。

3．标准曲线的绘制

(1)维生素E标准贮备液的配制：称10毫克维生素E，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容至100毫升(此液100微克／毫升)。

(2)维生素E标准工作液的配制：取贮备液10毫升定容至100毫升。(此液10微克／毫升)。

(3)取6只10毫升容量瓶，编号，分别加入维生素E标准工作液0．0，1．0，2．0，3．0，4．0：5．0毫升，用无水乙醇定容至10毫毫升。

(4)从各瓶中分别取1毫升标准液，加0．2%三氯化铁乙醇溶液1毫升，混匀，加1毫升0．5%α，α′－联氮苯的乙醇溶液混匀，用无水乙醇定容至25毫升，摇匀后放置10～15分钟后，于分光光度计520nm波长处测定光密度(以无水乙醇作空白)

以光密度为纵坐标，以标准维生素E浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4．样品的测定：取1毫升样品溶液，加0．2%三氯化铁乙醇溶液1毫升，混匀，再加1毫升0．5%α，α′－联氮苯的乙醇溶液，混匀，用无水乙醇定容至25毫升，摇匀后放置10～15分钟，于520nm波长处测定光密度。(按同法制备一空白试样)。从标准曲线查得相应含量。

5．计算

式中：V：样品液总体积(毫升)；

V₁样品测定时所用体积(毫升)；

A：标准曲线查得，样品维生素E含量(微克)；

W：样品称重(克)。