苋菜红
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第85页（13341字）
结构式
分子式：C20H11N2Na3O10S3
相对分子质量：604．48
一、苋菜红的鉴别
1．试剂和溶液
1．1 乙酸铵 0．02mol／LCH3COONH4溶液。
1．2 无水乙醇。
1．3 正丁醇。
1．4 1%氨水。
2．仪器
2．1 分光光度计。
2．2 新华层析滤纸 1号中速。
2．3 标本缸 Φ100mm×200mm。
2．4 微量进样器 0．01mL。
3．操作步骤．
3．1 0．1g样品溶于100mL水中，呈玫瑰红色溶液，样品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使动物纤维染色。
3．2 在100mL0．02mol／LCH3COONH4溶液中，含有0．001g样品的溶液，其最大吸收波长为(520±2)nm。
3．3 取样品水溶液，做纸上层析，其主色点的Rf应与标准样品相同。
纸上层析条件：
展开剂：正丁醇∶无水乙醇∶氨水(1%)=6∶2∶3。
温度：20～25℃。
试液浓度：0．1g／100mL。
试液用量：0．002mL。
展开剂前沿上升限度：150mm。
二、苋菜红的含量测定
1．试剂和溶液
1．1 硫酸亚铁铵。
1．2 重铬酸钾 0．1mol／L标准溶液，按GB601配制。
1．3 硫氰酸铵 20%溶液。
1．4 硫酸 c(1／2H2SO4)=10mol／L溶液。
1．5 柠檬酸三钠。
1．6 盐酸。
1．7 0．1mol／LTiCl3标准溶液。
1．7．1 配制：取TiCl3溶液100mL和浓盐酸75mL，置于1000mL棕色容量瓶中，用新煮沸过并已冷却到室温的蒸馏水稀释至刻度，摇匀，立即倒入避光的下口瓶中，在二氧化碳气体保护下贮藏。
1．7．2 仪器装置：如图5－1所示。
图5－1
1－锥形瓶(500mL) 2－棕色滴定管(50mL) 3－色黑纸的下口玻璃瓶(2000mL) 4－盛10%碳酸铵和10%硫酸亚铁等量混合液的容器(5000mL) 5－活塞 7－装有水的洗气瓶 6，8－空瓶
1．7．3 三氯化钛标准溶液的标定：称取硫酸亚铁铵3g，置于500mL锥形瓶中，在二氧化碳气流保护作用下，加入新煮沸并已冷却的蒸馏水50mL使其溶解，再加入10mol／L(1／2H2SO4)25mL，继续在液面下通入二氧化碳气流作保护，迅速准确加入0．1mol／L(1／6K2Cr2O7)标准溶液40mL，然后用需标定的TiCl3标准溶液滴定到接近计算量终点，立即加入20%硫氰酸铵溶液25mL，并继续用需标定的TiCl3标准溶液滴定到红色转变为绿色，即为终点，整个滴定过程，均应在二氧化碳气流保护下操作，同时以40mL水代替重铬酸钾溶液，以相同方法做一空白试验。
1．7．4 分析方法的表述
三氯化钛浓度按式(5－1)计算：
式中 V1——重铬酸钾标准溶液体积，mL
V2——滴定重铬酸钾标准溶液用去三氯化钛溶液的体积，mL
V3——滴定空白用去三氯化钛溶液的体积，mL
c1——
K2Cr2O7标准溶液的浓度，mol／L
2．测定方法
称取样品约3g(称准至0．0002g)溶于新煮沸并已冷却到室温的水中，移入500mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。吸取50mL样品溶液置于250mL锥形瓶中，加入柠檬酸三钠15g，水150mL，在液面下通入二氧化碳气流的同时加热至沸，并用0．1mol／LTiCl3标准溶液滴定到无色为终点。同时以50mL水代替样品溶液，以相同方法做一空白试验。
3．分析方法的表述
苋菜红质量分数w按式(5－2)计算：
式中 V——滴定样品用去TiCl3标准溶液的体积，mL
V1——滴定空白用去TiCl3标准溶液的体积，mL
c——TiCl3标准溶液的浓度，mol／L
0．1511——每毫摩苋菜红的质量，g／mmol
m——样品质量，g
三、食品中合成着色剂的测定
(一)高效液相色谱法
1．原理
食品中入工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液－液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性与峰面积比较进行定量。最小检出量，新红5ng，柠檬黄4ng，苋菜红6ng，胭脂红8ng，日落黄7ng，赤藓红18ng，亮蓝26ng，当进样量相当0．025g时最低检出浓度分别为0．2mg／kg，0．16mg／kg，0．24mg／kg，0．32mg／kg，0．28mg／kg，0．72mg／kg，1．04mg／kg。
2．试剂和溶液
2．1 正己烷。
2．2 盐酸。
2．3 乙酸。
2．4 甲醇 经滤膜(0．5μm)过滤。
2．5 聚酰胺粉(尼龙6) 80～100目。
2．6 0．02mol／LCH3COONH4溶液 称取1．54gCH3COONH4，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0．45μm)过滤。
2．7 氨水 量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
2．8 0．02mol／L 氨水－乙酸铵溶液 量取氨水0．5mL，加0．02mol／LCH3COONH4溶液至1000mL，混匀。
2．9 甲醇－甲酸(6+4)溶液 量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
2．10 柠檬酸溶液 称取20g柠檬酸(C6H8O7·H2O)，加水至100mL，溶解混匀。
2．11 无水乙醇－氨水－水(7+2+1)溶液 量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。
2．12 三正辛胺正丁醇溶液 量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
2．13 饱和硫酸钠溶液。
2．14 硫酸钠溶液(2g／L)。
2．15 pH6的水 水加柠檬酸调节pH至6。
2．16 合成着色剂标准溶液 准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0．100g，置100mL容量瓶中，加pH6水至刻度。配成水溶液(1．00mg／mL)。
2．17 合成着色剂标准使用液 临用上述溶液时(2．16)加水稀释20倍，经滤膜(0．45μ．m)过滤。配成每毫升相当50．0μg的合成着色剂。
3．仪器
高效液相色谱仪，带紫外检测器，波长254nm。
4．操作步骤
4．1 样品处理。
4．1．1 橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20．0～40．0g，放入100mL烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。
4．1．2 配制酒类：称取20．0～40．0g，放100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，于水浴上加热驱除乙醇。
4．1．3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5．00～10．00g已粉碎的样品，放入100mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若样品pH较高，用柠檬酸溶液调pH到6左右。
4．1．4 巧克力豆及着色糖衣制品：称取5．00～10．00g，放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤着色剂，到巧克力糖豆无色素为止，合并着色剂漂洗液为样品溶液。
4，2 着色剂提取。
4．2．1 聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调节pH至6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3耐酸漏斗抽滤，用60℃pH4的水洗涤3～5次，然后用甲醇－甲酸混合溶液洗涤3～5次(含赤藓红的样品用4．2．2法处理)，再用水洗至中性，用乙醇－氨水－水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜(0．45μm)过滤，取10μL进高效液相色谱仪。
4．2．2 液－液分配法(含用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5%)10～20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，至有机层无色。合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2～3次，每次5mL。合并氨水溶液层(含水溶性酸性着色剂)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜(0．45μm)过滤，取10μL，进高效液相色谱仪。
4．3 高效液相色谱参考条件。
4．3．1 柱：YWG－C1810μm不锈钢柱4．6mmc(id)×250mm。
4．3．2 流动相：甲醇－0．02mol／L乙酸铵溶液(pH4)。
4．3．3 梯度洗脱：甲醇：20%～35%，3%／min；35%～98%，9%／min；98%继续6min。
4．3．4 流速：1mL／min。
4．3．5 紫外检测器，波长254nm。
4．4 测定 取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
5．分析方法的表述
式中 x——样品中着色剂的含量，g／kg
V2——进样体积，mL
V1——样品稀释总体积，mL
m1——样品质量，g
41——进液体积重着色剂质量，mg
结果的表述：报告算术平均值的2位有效数。
6．允许差
相对相差≤10%。
7．液相色谱图
如图5－2所示。
图5－2 8种着色剂色谱分离
1－新红 2－柠檬黄 3－苋菜红 4－靛蓝 5－胭脂红 6－日落黄 7－亮蓝 8－赤藓红
(二)薄层色谱法
1．原理
水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱或薄层色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。最低检出量为50μg，点样量为1g，样品最低检出浓度约为50mg／kg。
2．试剂和溶液
2．1 石油醚 沸程60～90℃。
2．2 甲醇。
2．3 聚酰胺粉(尼龙6) 60～80目吸附着色剂用；100～140目薄层分析用。
2．4 硅胶G。
2．5 硫酸(1+10)。
2．6 甲醇－甲酸溶液(6+4)。
2．7 氢氧化钠溶液(50g／L)。
2．8 海沙 先用盐酸(1+10)煮沸15min，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液(50g／L)煮沸15min，用水洗至中性，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
2．9 乙醇(50%)。
2．10 乙醇－氨溶液 取1mL氨水，加乙醇(70%)至100mL。
2．11 pH6的水 用柠檬酸溶液(20%)调节至pH6。
2．12 盐酸(1+10)。
2．13 柠檬酸溶液(200g／L)。
2．14 钨酸钠溶液(100g／L)。
2．15 碎瓷片 处理方法同2．8。
2．16 展开剂。
2．16．1 正丁醇－无水乙醇－氨水(1%)(6+2+3)：供纸色谱用。
2．16．2 正丁醇－吡啶－氨水(1%)(6+3+4)：供纸色谱用。
2．16．3 甲乙酮－丙酮－水(7+3+3)：供纸色谱用。
2．16．4 甲醇－乙二胺－氨水(10+3+2)：供薄层色谱用。
2．16．5 甲醇－氨水－乙醇(5+1+10)：供薄层色谱用。
2．16．6 柠檬酸钠溶液(25g／L)－氨水－乙醇(8+1+2)：供薄层色谱用。
2．17 合成着色剂标准溶液 按2．16方法，分别配制着色剂的标准溶液浓度为每毫升相当于1．0mg。
2．18 着色剂标准使用液 临用时吸取着色剂标准溶液各5．0mL，分别置于50mL容量瓶中，加pH6的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0．10mg着色剂。
3．仪器
3．1 可见分光光度计。
3．2 微量注射器或血色素吸管。
3．3 展开槽 25cm×6cm×4cm。
3．4 层析缸。
3．5 滤纸 中速滤纸、纸色谱用。
3．6 薄层板 5cm×20cm。
3．7 电吹风机。
3．8 水泵。
4．操作步骤
4．1 样品处理。
4．1．1 果味水、果子露、汽水：称取50．0g样品于100mL烧杯中。汽水需加热驱除二氧化碳。
4．1．2 配制酒：称取100．0g样品于100mL烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。
4．1．3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖：称取5．00或10．00g已粉碎的样品，加30mL水、温热溶解，若样液pH较高，用柠檬酸溶液(200g／L)调至pH4左右。
4．1．4 奶糖：称取10．0g已粉碎均匀的样品，加30mL乙醇－氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约20mL，立即用硫酸溶液(1+10)调至微酸性再加1．0mL硫酸(1+10)，加1mL钨酸钠溶液(100g／L)，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。
4．1．5 蛋糕类：称取10．0g粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可以)，加入30mL石油醚搅拌。放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理3次，以除去脂肪，吹干后研细，全部倒入G3耐酸漏斗或普通漏斗中，用乙醇－氨溶液提取着色剂，直至着色剂全部提完，以下按4．1．4自“置水浴上浓缩至约20mL……”起依法操作。
4．2 吸附分离 将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0．5～1．0g聚酰胺粉充分搅拌，用柠檬酸溶液(200g／L)调节pH至4，使着色剂完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附着色剂的聚酰胺全部转入G3耐酸漏斗中过滤(如用G3漏斗过滤可以用水泵慢慢地抽滤)，用pH4的70℃水反复洗涤，每次20mL，边洗边搅拌。若含有天然着色剂，再用甲醇－甲酸溶液洗涤1～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇－氨溶液分次解吸全部着色剂，收集全部解吸液。于水浴上除氨。如果为单色，则用水准确稀释至50mL，用分光光度法进行测定。如果为多种着色剂混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即将上述溶液置水浴上浓缩至2mL，后移入5mL容量瓶中，用乙醇(50%)洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。
4．3 定性。
4．3．1 纸色谱：取色谱用纸，在距底边2cm的起始线上分别点3～10μL样品溶液、1～2μL着色剂标准溶液，挂于分别盛有2．16．1和2．16．2的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处，将滤纸取出于空气中晾干，与标准斑比较定性。
也可取0．5mL样液，在起始线上从左到右点成条状，纸的左边点着着色剂标准溶液，依法展开，晾干后先定性后再供定量用。靛蓝在碱性条件下易褪色，可用2．16．3展开剂。
4．3．2 薄层色谱
4．3．2．1 薄层板的制备：称取1．6g聚酰胺粉、0．4g可溶性淀粉及2g硅胶G，置于合适的研钵中，加约15mL水研匀后，立即置涂布器中铺成厚度为0．3mm的板。在室温晾干后，于80℃干燥1h，置干燥器中备用。
4．3．2．2 点样：离板底边2cm处将0．5mL样液从左到右点成与底边平行的条状，板的左边点2μL着色剂标准溶液。
4．3．2．3 展开：苋菜红与胭脂红用2．16．4的展开剂，靛蓝与亮蓝用2．16．5的展开剂，柠檬黄与其他着色剂用2．16．6的展开剂。取适量展开剂倒入展开槽中，将薄层板放入展开，待着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑比较，如Rf相同，即为同一着色剂。
4．4 测定。
4．4．1 样品测定：将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入10mL比色管中，并加水稀释至刻度，作比色测定用。
将薄层色谱的条状色斑包括有扩散的部分，分别用刮刀刮下，移入漏斗中，用乙醇－氨溶液解吸着色剂，少量反复多次至解吸液于蒸发皿中，于水浴上挥发氨，移入10mL比色管中，加水至刻度，作比色用。
4．4．2 标准曲线的制备：分别吸取0．0，0．5mL，1．0mL，2．0mL，3．0mL，4．0mL胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄标准使用溶液，或0．0，0．2mL，0．4mL，0．6mL，0．8mL，1．0mL亮蓝、靛蓝色素标准使用溶液，分别置于10mL比色管中，各加水稀释至刻度。
上述样品与标准管分别用1cm比色杯，以零管调节零点于一定波长下(胭脂红510nm，苋菜红520nm，柠檬黄430nm，日落黄482nm，亮蓝627nm，靛蓝620nm)，测定吸光度，分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。
5．分析结果的表述
式中 x——样品中着色剂的含量，g／kg
m1——测定用液中着色剂的质量，mg
V1——样品解吸后总体积，mL
V2——样液点板(纸)体积，mL
m2——样品质量(体积)，g
结果的表述：报告算术平均值的2位有效数。
(三)微机极谱法
1．原理
苋菜红、胭脂红、柠檬黄、赤藓红、诱惑红和日落黄等着色剂在磷酸盐缓冲溶液中，于滴汞电极上可产生导数极谱波，亮蓝在乙酸盐缓冲溶液中，于滴汞电极上可产生导数极谱波，波高与着色剂的含量成正比。
2．试剂和溶液
2．1 底液A 磷酸盐缓冲液，可作苋菜红、胭脂红、柠檬黄、赤藓红、诱惑红和日落黄的测定底液。
称取13．6g无水磷酸二氢钾(KH2P04)，14．1g无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)，10g氯化钠，加水至1L，摇匀。
2．2 底液B 乙酸盐缓冲液，可作亮蓝的测定底液。
量取57mL冰乙酸，加水约400mL，加入20g氢氧化钠，稀释至1L。
2．3 柠檬酸溶液 200g／L。
2．4 乙醇－氨溶液 取1mL浓氨水，加乙醇(70%)至100mL。
2．5 合成着色剂标准溶液 准确称取按其纯度计算为100%质量的苋菜红、胭脂红、柠檬黄、赤藓红、诱惑红、日落黄、亮蓝各0．100g，分别置于7个100mL容量瓶中，加水至刻度。配成水溶液(1．00mg／mL)。
2．6 合成着色剂标准使用溶液 各吸取上述标准溶液1．00mL，分别置于100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液1mL含10．0μg着色剂。
3．仪器
3．1 微机极谱仪一套(包括打印机)。
3．2 常用玻璃仪器。
4．测定方法
4．1 样品处理。
4．1．1 饮料：取一定量的饮料，用水稀释5～10倍(与合成着色剂标准使用溶液色泽深浅相近)。
4．1．2 表面着色的糖豆：称取5．0～10．0g样品，置于烧杯中，少量、分次用水洗，使其表面着色部分溶解，待糖果表面无色后弃去其余部分，合并洗下的着色剂液，定容至一定量(定容至与合成着色剂标准使用溶液色泽深浅相近。在测定时如果发现峰电位漂移不能测定时，按下面糖果样品处理)。
4．1．3 糖果：称取5．0g样品，加20mL水溶解后，用柠檬酸溶液调节pH4，加入约1g聚酰胺粉吸附着色剂，用漏斗过滤，弃去滤液，用pH=4的水(约100mL)洗去杂质，再用水洗至中性，然后用乙醇－氨溶液解吸附着色剂，滤液于水浴蒸至近干，加水溶解残渣，并定容至一定量。
4．2 测定。
4．2．1 极谱条件：滴汞电极，一阶导数、三电极制，初始电位为－0．2V(诱惑红为－0．3V)，终止电位－0．9V(诱惑红为－1．3V)，扫描速度250mV／s，参考峰电位：苋菜红－0．42V，日落黄－0．50V，柠檬黄－0．56V，胭脂红－0．69V，赤藓红－0．78V，诱惑红－0．57V，亮蓝－0．77V，靛蓝－0．46V。
4．2．2 标准曲线：吸取着色剂标准使用液0．0，0．50mL，1．00mL，2．00mL，3．00mL，4．00mL，5．00mL分别于10mL比色管中，各加入5．00mL底液(亮蓝用B液)、用水定容至10．0mL(浓度分别为0．0，0．5μg／mL，1．00μg／mL，2．00μg／mL，3．00μg／mL，4．00μg／mL，5．00μg／mL)，混匀后，于微机极谱仪上测定。
4．2．3 样品测定：取样品处理液1～2mL或一定量，加底液5．00mL，加水至10．0mL，摇匀后与标准系列溶液同时、同条件测定。
5．分析结果的表述
式中 x——样品中着色剂浓度，g／L(kg)
ρx——样品测定液中着色剂浓度，μg／mL
m——样品质量(体积)，g(mL)
V1——测定液中样品处理液的体积，mL
V2——样品稀释后的总体积，mL
结果的表述：报告算术平均值的2位有效数。
四、苋菜红铝色淀
Amaranth Aluminum Lake
苋菜红铝色淀为：展布于氧化铝水合物上的水溶性食品着色剂苋菜红的色淀。
苋菜红铝色淀的鉴别方法：
(1)取0．5g本品，溶于5mL浓盐酸中，置于500mL容量瓶中，加入0．1mol／LK2HPO4溶液至刻度，摇匀，吸取2mL置于50mL容量瓶中，再用0．1mol／LK2HPO4溶液至刻度，该溶液的最大吸收波长应为(520±2)nm。
(2)取0．1g本品，加入5mL盐酸(1+3)，在水浴上加热约5min，时时摇动使之溶解，溶液澄清，呈黄色溶液，冷却，用氨水(1+2)中和，溶液逐渐变成紫外色胶状沉淀。
(3)取0．1g本品，加入5mL100g／LNaOH溶液，在水浴上加热5min，摇动使之溶解，呈紫红色澄清溶液，冷却，用盐酸(1+3)中和至中性，形成紫红色胶状沉淀。