果实淀粉的测定

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树施肥手册》第150页（2318字）

淀粉是光合作用形成的单糖缩合而成的一种产物，在果实发育中，叶子所制造的碳水化合物运入果实，以淀粉的形式贮藏起来。淀粉在果实中还可通过淀粉酶水解成糖，这个作用是一个可逆反应，反应式如下：

在果实发育的初期，果实中的积累大于消耗。因此，淀粉含量不断增长，直至呼吸跃变期后，淀粉加速糖化，分解大于积累，淀粉含量逐渐减少。因此，果实淀粉含量在一定程度上与果实的成熟度有关。

方法原理：淀粉遇碘可生成蓝色络合物，在一定浓度范围内，蓝色的深浅与淀粉的含量成正比。用高氯酸作提取剂。显色后在分光光度计上测定其吸光度；同时，用苹果纯淀粉作为标准进行比较。

试剂：

①0．01N碘酸钾溶液：称取在105℃下烘过2小时的KlO₃3．567克，溶于水，洗入1升容量瓶中，加水至刻度，此为0．1N碘酸钾溶液。吸取10毫升，放入100毫升的容量瓶中，加水至刻度即是0．01N的碘酸钾溶液。

②9．2N高氯酸：即60%HClO₄。

③5%碘化钾溶液：5克KI溶于100毫升水中。

④硫代硫酸钠溶液：4克Na₂S₂O₃·5H₂O溶于100毫升水中。

⑤苹果纯淀粉：将未成熟的元帅苹果洗净擦干，在菜擦子上擦碎加去离子水少许，用纱布过滤，再用水洗残渣一次，将滤液合并，放在大烧杯中静置过夜。次日，淀粉即沉于杯底，小心弃去上层混浊液，再加水搅匀，如此倾洗多次，直至可溶性糖及其他杂物均被洗出。澄清后，倾出上层水液。为除去其中的蛋白质，加入10%的氯化钠溶液，放置2小时，倾去上层清液，用无离子水洗沉淀直至无氯离子。用82%乙醇洗涤数次，最后用乙醚抽洗几次，此时，淀粉为纯白色，干后可做为标准用。

仪器和器皿：①DS－200型高速组织捣碎机；②万分之一分析天平；③工业天平()；④100毫升容量瓶；⑤100毫升小烧杯，漏斗；⑥移液管，20毫升(大肚)，5毫升(刻度)。

测定步骤：将苹果去皮，从萼凹到果顶方向，对角线取两个楔形小块，粗粗切碎。称取100克加水100毫升，立即放在高速组织捣碎机上捣碎3分钟。再浆状物10．00克(相当于样品5克)，边摇边用吸管加入9．2N的高氯酸20毫升，放置10分钟。然后洗入100毫升容量瓶中，加水定容，摇匀。用漏斗通过玻璃棉过滤，吸出一定量(视淀粉多少而定，一般为1～4毫升)，放入另一100毫升容量瓶中，加水至4毫升，加碘化钾1毫升，摇匀，再加0．01N碘酸钾液，摇匀，放置5分钟。在分光光度计上620毫微米波长下比色。

因为蓝色溶液中含有淀粉的胶体颗粒，所以每个有色溶液都需要用它自己的褪色溶液作为空白。作法是将蓝色溶液加两滴硫代硫酸钠溶液使蓝色褪去，倒入另一比色管中作为空白。

标准曲线的绘制：称取苹果纯淀粉0．1000克，加水9毫升，摇匀，再加9．2N高氯酸20．00毫升，边加边摇，放置10分钟，洗入100毫升容量瓶，加水至刻度，摇匀。吸取0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0毫升各自放入100毫升容量瓶中，相应加水至4毫升，各加5%碘化钾溶液1毫升，摇匀，再加0．01N碘酸钾溶液1毫升，再摇匀，放置5分钟，用水稀释至100毫升。这就是100毫升中含淀粉0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0毫克，照上法在分光光度计上测定其吸光度，将浓度为横座标，吸光度为纵座标，在方格座标纸上画出标准曲线。

结果计算：

式中：V——样品稀释体积(毫升)；

V₁——吸取滤液体积(毫升)；

W——样品鲜重(克)。

注意事项：

①淀粉有直链淀粉淀糖和支链淀粉两种。不同树种、品种，这两种淀粉的比例不同，因此，据实践证明，用苹果提纯的淀粉作为测定果实中淀粉的标准，效果较好。

②加高氯酸溶液时，边加边摇，以免局部酸度过大。最后，应将沿边的果汁冲下去，这时，酸的浓度约为6．2N，并严格控制浸提时间。

③加碘化钾和碘酸钾液时体积要准确，否则会影响显色的深浅。

④如果没有高速组织捣碎机，可用菜擦子将果肉擦碎，迅速用研钵磨成糊状，称取5克样品，用吸管加入7．8N高氯酸液20毫升，放置10分钟，用水洗入100毫升容量瓶，加水至刻度，过滤后按上法进行。

标准淀粉0．1000克，加4毫升水，加7．8N高氯酸20毫升，放置10分钟，然后按上法进行，画出标准曲线。