兼性厌氧的弧菌属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第355页（4871字）
弧菌属属于弧菌科。本属细菌形态短小，弯曲成弧状，单独排列、或两菌相连成s状。菌体一端有单一鞭毛，少数菌株具有2～3根鞭毛，运动活泼，不形成芽孢与荚膜。需氧或兼性厌氧，最适温度范围为18～37℃，pH范围6．0～9．0。在一般培养基中，多数生长良好，革兰氏染色阴性。氧化酶通常为阳性，发酵型。
弧菌广泛分布在自然界，尤以水中为多见。弧菌属有20个种，霍乱弧菌［包括埃托尔(EI Tor)血清型］、副溶血弧菌(为一种致病性嗜盐菌)能引起人的感染。此外，还有一些能引起动物疾病，如麦氏弧菌(V．metchnikovii)引起鸡霍乱样病。
一、副溶血弧菌
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytieus)又称嗜盐菌(Halophilicbacteria)，能在含食盐较浓(3～4%以上)的培养基中生长，而在不含盐的培养基内不能繁殖，因而得名。本菌常存在于海水及海产品中，人多因食用污染本菌又未经良好加工的食品而引起食物中毒。副溶血性弧菌引起人的食物中毒，在细菌性食物中毒中占的比例很高。
(一)病原特性
1．形态、染色与培养特性 本菌是革兰氏阴性两端浓染多形态的球杆菌，长2～7μm，宽0．3～0．5μm。有单端鞭毛一根，长约菌体的两倍，运动活泼，仅次于霍乱弧菌。在不同培养基和培养条件中形态可有不同且差异很大。在副溶血性弧菌选择性平板经18～24h培养，菌落为灰白色，蔓延生长，边缘不规则，菌落通常为圆形、隆起、稍浑浊而不透明，对光观察可见菌落有绿色荧光，有点腥味。在血平板上菌落发育较大，灰黄色。于ss平板上呈扁平，不透明带粘性，用接种环不易挑起，往往形成丝状物附于环上。
本菌对营养要求不高，在普通营养琼脂或蛋白胨水中即能生长。生长所需的pH幅度是7．0～9．5，最适宜的pH是7．7。培养基中食盐浓度以3．5%为最适宜，在无盐的培养基中则不能生长。适宜的生长温度是37℃。本菌的需氧性很强，常在肉汤、蛋白胨水等培养液中发育呈现浑浊，表面形成菌膜。在伊红美蓝平板上不易生长。
2．生化特性 本菌对各种糖类发酵能力有所不同，对某些糖类产酸而不产气。不发酵乳糖，但经48h培养后有产碱现象。副溶血性弧菌能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖。对蔗糖发酵因菌种来源而不同，患者粪便中的菌株多不能发酵蔗糖，在海水、食品或食物中毒标本中分离的菌株大部分可发酵蔗糖。
不发酵卫茅醇、肌醇、木糖、水杨苷，能发酵蕈糖、淀粉、糊精产酸不产气。对阿拉伯胶糖、鼠李糖和半乳糖发酵反应不定。霍乱红反应呈阴性。靛基质、M．R、V．P、枸橼酸盐、硝酸盐还原、硫化氢、尿素反应不定。
利用副溶血弧菌对蔗糖、阿拉伯糖和鼠李糖发酵情况的不同，可把副溶血弧菌分为五个类型。
3．抗原性 该菌和一般肠道菌一样，有菌体(O)抗原，表面(K)抗原及鞭毛(H)抗原三种。日本泷川氏将本菌分为25个血清型，我妻氏、坂崎氏对嗜盐菌抗原性也进行了研究，并各自建立了血清学分型法。
4．致病性与抵抗力 副溶血性弧菌对人、小白鼠、猫、猴、狗等有一定致病力。在人多为食物中毒。
该菌对酸敏感，一般在食醋中经5min死亡。不耐热，56℃30min即死亡。淡水中生存不超过2天，但在海水中能存活47天以上。
表14-1 副溶血弧菌生化反应分类
(二)病原诊断
1．标本收集 在食物中毒事例中，除采集可疑食物外，更需采集患者大便标本10g左右，或用肛门棉拭采样。
2．镜检 一般不作直接镜检，必要时由分离培养的可疑菌落制涂片用革兰氏或石炭酸复红液染色。
3．分离培养 取食品约5g左右，加生理盐水10ml在无菌研钵中研细成悬液或直接取患者排泄物可接种的培养基有ss平板、副溶血性弧菌选择性琼脂平板、副溶血性弧菌增菌液。(以上三种培养基制备方法见附录)。标本接种后均经37℃16～24h培养，然后再按以下程序进行。
(1)挑取ss平板和选择性琼脂平板上可疑菌落接种罗氏双糖培养基。
(2)挑取增菌液液面生长物接种副溶血性弧菌选择性琼脂平板，经37℃16～24h培养后挑取可疑菌落接种罗氏双糖培养基。
4．生化反应 在罗氏双糖中经37℃16～24h培养后如发现有不发酵乳糖，葡萄糖产酸不产气，即可从双糖接种到各种含有3．5%氯化钠的有关糖类培养基做生化反应，如符合表14-2所列主要特性者，可诊断为副溶血弧菌。
表14-2 副溶血弧菌主要特性
5．检验程序
(三)鉴别诊断 副溶血弧菌与其他常见弧菌的鉴别列表如下(表14-3)。
表14-3 副溶血弧菌与其他常见弧菌的鉴别
(四)实验诊断上还可能遇到的弧菌 弧菌属有20个种，多为自然界(海水、河水、土壤等处)微生物，与实验诊断有关的可能还有以下几种。
霍乱弧菌(V．cholerae)：致人的霍乱，从粪便中排菌，污染水、食物。
麦氏弧菌(V．metschnikovii)：致禽的类似禽霍乱的疾病，从其粪便、血液、内脏散布细菌。
副溶血弧菌：前面已叙述。
溶藻酸弧菌(V．alginolyticus)：曾从死鱼中分得，还从海水中分到。
创口弧菌(V．vulnificus)：曾从败血症的人分得。
河弧菌第Ⅰ型(V．fluvialis Ⅰ)：从人粪便、海水中分得。
河弧菌第Ⅱ型(V．fluvialis Ⅱ)：从腹泻人粪便中分得。
鳝弧菌第Ⅰ型(V．anguillarum Ⅰ)：致海鱼、鳝鱼疾病。
由于弧菌在pH9还可生长(霍乱弧菌、麦氏弧菌在pH10还可以生长)，故分离时可用pH8．6～8．8的TCBS琼脂或其他pH高的培养基。上述那些弧菌的性状，见表14-4。
表14-4 弧菌属的某些种的比较
符号说明：+示90%以上菌株阳性；-示90%以上菌株阴性；d．示11～89%菌株阳性；D示不同的种，反应不同。
弧菌属属于弧菌科，本科有四属，除弧菌属之外还有气单胞菌属(见十二章、第二节十二章、第二节)，邻单胞菌属(Plesiomonas)及光细菌属(Photobacterium)。光细菌属存在海水、海鱼体表肠道，能发光，但与疾病无关。邻单胞菌属只一个种——类志贺邻单胞菌(P．shigelloides)，此菌除能致人的腹泻外，还可从猪、犬、猫、山羊、绵羊、鱼及其他水生动物消化道分得，故表14-4中，还加列有气单胞属及类志贺邻单胞菌两行。
嗜盐菌选择性琼脂(即嗜盐菌选择性平板)制法如下。
1．成分 蛋白胨 20g
氯化钠 40g
琼脂 17g
结晶紫溶液(1∶1000) 5ml
蒸馏水 1000ml
2．制法：
(1)除结晶紫外，其他按上述成分，配制混合后，加热溶解。
(2)加30%氢氧化钾约4ml，矫正pH至8．7。继续加热30min，然后用绒布过滤。
(3)再加入结晶紫溶液5ml，混合后，分装于瓶中。
(4)置高压灭菌器内，经121℃15min灭菌，倾注成平板。
高盐蛋白胨水制法如下。
1．成分 蛋白胨 20g
氯化钠 60g
蒸馏水 1000ml
2．制法：
(1)将上述成分混合后，加热溶解。
(2)约加30%氢氧化钾2ml，矫正pH至7．7。继续加热，用滤纸过滤。
(3)分装于13×100mm的试管，每管约3ml。置高压灭菌器内，经121℃15min的灭菌。备用。
嗜盐菌增菌培养液制法如下。
1．成分：同前述的嗜盐菌选择性琼脂，不过将其中琼脂省略。
2．制法：同前述的嗜盐菌选择性琼脂，不过加30%氢氧化钾是加4．5ml(不是4ml)，调pH至9．0(不是8．7)，继续加热20min，滤纸过滤，加结晶紫液5ml，混和，分装试管，121℃15min灭菌。
碱性胆盐琼脂(AB琼脂)制法如下。
1．成分：蛋白胨20g、牛肉膏5g、氯化钠5g、胆盐2．5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml。
2．制法：
(1)将上述成分混合，加热溶解后，加15%氢氧化钠约6ml，矫正pH至8．2～8．4，煮沸；
(2)置高压灭菌器，15磅15min后，留在灭菌器内；
(3)次日取出，切去底层沉淀部分，再加热使琼脂彻底融化好，矫正pH至8．2～8．4，装瓶，15磅15min高压灭菌后，倾注平板，备用。