梭菌属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第390页（12516字）
本属为芽孢杆菌科中的厌氧菌之一，少数在微嗜氧情况下亦可生长。据认为，梭菌不能在有O2情况下生长的原因，是由于在有O2情况下梭菌代谢过程中形成H2O2，而梭菌又缺乏过氧化氢酶(即接触酶)或过氧化物酶，故H2O2的累积阻碍梭菌的生长。
梭菌为杆状，形成的芽孢比菌体大且位于中央时则似梭状，故名，但梭菌属中呈典型的梭状者并非很多。通常为革兰氏阳性。大多数为腐生菌，少数为致病菌，致病菌中多数为人畜共患病的病原菌。所有致病梭菌均产生强烈毒素。其致病，或通过创伤感染或通过食入该病原菌或其毒素。故微生物学诊断，或证明致病梭菌的存在，或证明其毒素之存在，或证明二者。
庖(熟)肉基为常用的厌气液体培养基，梭菌生长良好，多浑浊且产气。凡使肉块变黑、有臭味、肉块可能变小者为蛋白分解型，如溶组织梭菌、索氏梭菌及一些肉毒梭菌、强直梭菌等；使肉块变粉红、亦变小，无臭味者称糖分解型，如魏氏梭菌、气肿疽梭菌、腐败梭菌、骆维氏梭菌等。
一、气肿疽梭菌(Cl．chauvoei)
气肿疽梭菌亦名黑腿病梭菌，或称肖氏梭菌，是土壤中的细菌，广泛分布于世界，也常在牛、绵羊的肠内容中发现，其芽孢可在土壤中存活多年。致牛、绵羊的气肿疽或常称为黑腿病，牛较绵羊易感，半岁至两岁的牛最易感。
此菌为严格厌氧的革兰氏阳性大杆菌，但在陈旧培养物中易染成革兰氏阴性，无荚膜，能运动具周身鞭毛，芽孢卵圆形比菌体宽位于中央或偏端，此芽孢可见于死亡动物体的组织或血液中。
(一)取材 气肿疽为败血症，故可采取血液或任何脏器，且宜采取管骨，既便于保存运送，又不易污染；还可取肿胀部分肌肉，10cm见方，浸于融化的石蜡中，即取出用塑料纸包运；与此同时制备血液、脏器、肌肉涂片，以备染色镜检，疑为此菌时要作肝表面触片。
(二)检验程序和方法
1．涂片检查 血液或组织涂片，可见大杆菌，无荚膜，芽孢比菌体大，位于中央或偏端，革兰氏染色阳性(组织片总先以瑞特氏或姬姆萨法先染，辅以革兰氏法)。若为炭疽杆菌则有荚膜而不见芽孢，肝表面触片为单个或短链，不呈长丝状。如为腐败梭菌，则肝表面触片可呈长丝状。
2．培养特性 将肝、肌肉或骨髓等接种于葡萄糖鲜血平皿或鲜血平皿(厌氧培养)或熟(庖)肉基中，1～2天，此菌在平皿上长出圆形、边缘有时不太整齐、钮扣状菌落，或中心凸起，或有同心圈，菌落直径达2～4mm，周围有β溶血环。幼年培养物革兰氏阳性。
3．生化特性 发酵葡萄糖、单奶糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、蔗糖产酸产气，不发酵鼠李糖、菊糖、卫矛醇、水杨素(苷)、甘油或甘露醇，还原硝酸盐，产硫化氢，石蕊牛奶有时无变化，有时微产酸。
4．毒素检查 在熟肉基或厌气肝汤等中，产生α、β、γ、δ四种毒素。α毒素既是耐氧的溶血素、能溶解牛、绵羊和猪的红细胞，但不溶解马和豚鼠的红细胞，α毒素还是神经毒素，能引起皮肤坏死和纤维蛋白溶解；β毒素是脱氧核糖核酸酶；γ毒素是透明质质酸酶；δ毒素是不耐氧的溶血素。
气肿疽梭菌毒素，静脉注射小鼠或豚鼠可致死，但家兔有明显的抵抗力，而后述的腐败梭菌毒素，均可使家兔、小鼠、豚鼠致死。
α毒素可用其对小鼠致死测定。
β毒素可用酸刚果红乙醇(ACRA)法或影响白细胞着色法来检查。ACRA法是：用pH8．0的硼酸缓冲盐水(简称BBS，系以盐水为基础，制成0．05M硼砂Na2B4O7及0．2M硼酸H3BO3，按前者3份后者7份配成)将细菌培养滤液作不同的稀释度，取此稀释的细菌培养滤液1ml，加硼酸缓冲盐水0．5ml，再加用硼酸缓冲盐水稀释的内含8个指示剂量的马滑液囊液0．5ml，充分混和后，放37℃水浴中1h，取出放冰水中迅速冷却，每管加入0．5%刚果红0．4ml，混匀后放5min，用直径1mm吸管吸取此混合液，滴入到酸酒精(70%酒精加盐酸达1%)平皿中，平皿中酸酒精深度为4．5mm，滴下时液滴的高度为1crn。如果滴下的小滴迅速分散于酸酒精中变为蓝色，即示有β毒素，如不散开，即示无β毒素。以含最少量培养物滤液(即滤液最大稀释度)其液滴仍不自由扩散的试管为终点，即其滴度。马滑液囊的指示剂量的测定，是将该液作一系列稀释，按上法滴加到酸酒精中，其最大稀释度滴入后仍不散开，为一个指示剂量。
影响白血球着色法，系用家兔血液涂片，在空气中干燥，用甲醇固定，将涂片的一半浸于用生理盐水2倍稀释的细菌培养滤液中，另一半作为对照；同时用生理盐水代替细菌培养液同法操作，作为生理盐水对照。玻片直立于培养液或盐水中置38℃水浴中18h，取出用蒸馏水冲洗，染血片法(瑞特氏或姬姆萨)染色镜检，白细胞染色浅并现空壳为阳性，有本毒素存在。毒素浓度高时，可看到没有着色的白细胞，红细胞不受影响。使50%白细胞产生严重破坏的滤液稀释度为毒素滴度，与一单位抗毒素血清混合后，仍能破坏片中50%白细胞的最小细菌培养滤液量，为1个毒素单位。
γ毒素也可用ACRA法测定。
δ毒素可用溶血法测定。但因其不耐氧，在测定过程中，需用适宜的还原剂，如巯基乙酸钠达0．05～0．1%，以避免毒素受氧的作用而被灭活，不能测定。
本菌与后述的腐败梭菌在形态和生化特性上相似，其区别要点见表17-1。
表17-1 气肿疽梭菌与腐败梭菌区别要点
二、腐败梭菌(Clostridium septicum)
此菌曾称恶性水肿梭菌(Clostridium oedematis maligni)、腐败杆菌(Bacillus septicus)等，它为土壤常在菌，也存在于某些草食动物消化道中，可致人和动物疾病。人创伤感染称气性坏疽，牛羊猪等创伤感染时称恶性水肿，羊多消化道感染称快疫，鸡感染时称气性水肿。
试验动物中家兔、豚鼠和小鼠等均易感。
本菌是专性厌氧菌，革兰氏阳性，陈旧培养物中有时为阴性。有周鞭毛，厌氧环境下运动活泼，无荚膜，芽孢卵圆，位于中央或偏端，较菌体宽。死亡动物肝脏表面压片染色，镜检呈长丝状是其特征。
(一)样品采集 本菌致菌血症时，心血和各脏器均可作为检验材料，不难分纯。但要注意取材时间，因为本菌经常存在于健康草食动物的消化道，动物死后易侵入脏器。有人证明，动物死后自然分离率：死后1h取材为10%，2～6h为26%，7～12h为32%，12h后可高达56%，所以要在动物死亡后尽快取材，否则易误诊。至于局部的伤口感染，应取患部的肌肉。
(二)检验程序和方法
1．涂片镜检 肝表面压片呈长丝长为其特征。
2．培养特性 本菌在厌气肉肝汤中生长旺盛，产生气体，菌体迅速沉降成絮状，上部澄清。厌气培养的鲜血琼脂表面，生长成片，菲薄边缘成丝状交织，有β溶血，但不是很明显。
3．生化特性 发酵葡萄糖、单奶糖、麦芽糖、水杨素产酸产气，不发酵蔗糖、甘露醇、甘油、卫茅醇，还原硝酸盐，不产生靛基质，石蕊牛奶变酸，3～5天凝固。
4．毒素检查 腐败梭菌产生α、β、γ、δ四种毒素。α毒素最主要，它具致死、坏死、和耐氧的溶血作用；β毒素是脱氧核糖核酸酶，对白细胞有毒性；γ毒素是透明质酸酶；δ毒素是不耐氧的溶血素。此外，还产生对牛、绵羊、鸡红血球凝集的不耐氧的凝集素。
α毒素可致死小鼠，其毒力用MLD或L+表示。L+是与一个国际单位抗毒素作中后还能致死50%小鼠的最小毒素量。
β毒素可用ACRA法或影响白细胞着色法检查(见气肿疽梭菌)。
γ毒素的精确测定法，是滴定透明质酸水解产物的游离醛基。如果用高铁氰化钾作氧化剂，醛基的氧化可在425nm测光密度的消光值，也可用ACRA法测定。
δ毒素用溶血法测定，但要用适宜的还原剂以防氧化。
腐败梭菌与气肿疽梭菌多处相似，肝表面压片、对兔致病力、蔗糖发酵的不同，将有助于区别。
三、魏氏梭菌(Clostridium perfringes)
国际上现通用Cl．perfringes这个学名， 中文曾译为镶边小梭菌或镶边梭状芽孢杆菌。镶边二字明显地不确切，它毫无镶边之意，实意是裂、破。若此处用破裂梭菌将有异议，故文中用魏氏梭菌(Cl．welchii)。此菌曾名魏氏梭菌，现在还有用此名的。产气荚膜梭菌(Cl．aerogenes capsulatus)或产气荚膜杆菌(B．aerogenes capsulatus)的产气荚膜四字传神，但此名更旧，且字数较多，故本书用魏氏梭菌。
魏氏梭菌广泛存在于自然界，土壤、空气、灰尘、粪肥、人和动物的消化道、饲料、污水、尸体、伤口溃疡等处，均可能有本菌存在，其中A型菌更较普遍。
本菌产生多种毒素，其中有致死的4种主要毒素，即α，β，ε，ι。根据这些毒素与抗毒素的中和试验，分为A、B、C、D、E五个型，A型有α毒素，B型有α、β、ε毒素，C型有α、β毒素，D型有α、ε毒素，E型有α、ι毒素。用抗毒素测定毒素的菌型结果如下。
表17-2 魏氏梭菌毒素型的测定
注：+表示能中和，一表示不能中和。
即A型抗毒素只能中和A型菌的毒素，B型菌的抗毒素能中和A、B、C、D型菌的毒素但不能中和E型菌的毒素……；竖行看，A型菌的毒素能为各型菌的抗毒素中和，B型菌的毒素只能为B型菌的抗毒素所中和，……。
魏氏梭菌致人及多种动物的疾病，可概括如下。
表17-3 魏氏梭菌各型所致疾病
本菌虽为专性厌氧菌，但对厌氧条件要求不严，较易培养，且生长快，液体培养基中4h传一代，数代后易获纯培养，新制备的普通肉汤，接种量多时亦可有生长。
(一)样品采集 魏氏梭菌主要在肠道中繁殖产生毒素，引起肠炎、毒血症，虽然有些病例可由脏器分离出本菌，但多数病例则否。故检查本菌及其在肠道所产生的毒素，肠内容物是必采的材料，用肠内容物分离本菌时，可在琼脂中加新霉素或卡那霉素0．1～0．2mg／ml以抑制他菌，或将肠内容物先加热至80℃维持15～20min杀死一些无芽孢菌，或以液体培养物每4h传代一次后再分离，以助于获本菌纯培养。
(二)检验程序及方法
1．涂片检查 肠粘膜触片，见有为数众多的(有时似培养物，好像纯培养)革兰氏阳性大杆菌，多单在，少数两个相连，菌端较齐，可疑为本菌存在。如以荚膜染色见荚膜，则更为可疑；检查培养物，形态染色如上述，不运动，生长快，亦可疑为此菌。此菌虽能形成芽孢，但无论在触片或培养物中，均不易见到芽孢(其他梭菌较易，特别是产芽孢梭菌的培养物，可见50%以上是芽孢)，如见到，则芽孢椭圆，不比菌体宽，位于中心或偏端。
2．培养特性 在厌气肉肝汤中生长迅速，37℃3～4h即生长旺盛，并产生大量气体，普通肉汤中厌氧下亦生长，但不如肉肝汤。
接种鲜血琼脂厌气培养18～24h，形成凸起、半透明、灰白、表面光滑、边缘整齐、1～3mm大、圆形的菌落，菌落周围有一β溶血环，其外还有一圈不完全的溶血环，形成所谓双环溶血。培养时间再长，菌落直径增大，中心隆起，边缘似较以前平，或可看到有几条放射状条纹自中心辐射出。在含葡萄糖的鲜血琼脂表面厌气培养的菌落，在25℃以上与空气接触时，附近血细胞变成绿色，是其特征。
3．生化特性 发酵葡萄糖、单奶糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖产酸产气，不发酵水杨素(即杨苷)、卫茅醇、甘露醇、鼠李糖。甘油反应不定。液化明胶，不消化肉块、凝固的血清或蛋白，不产生靛基质，M．R．和V．P．反应均为阴性，产生硫化氢。牛乳反应特殊，呈暴烈发酵，有时可将试管棉塞冲掉，这点可助于快速诊断。
4．肠毒素检查 取肠内容物，如稠，可加等量盐水，离心，经滤器过滤，野外操作可用滤纸反复过滤到清亮。将滤液0．2ml注射小鼠尾静脉，如在12h内(快的0．5～1h内)死亡，以已知抗毒素等量与滤液混合注射作毒素中和试验，定毒素型。
5．菌型鉴定 将24h肉肝汤培养物过滤除菌，取滤液0．2ml与等量已知抗毒素混和，置37℃半小时，静脉注射小白鼠，另取滤液加等量盐水作对照(应死亡)，根据前述的抗毒素中和表，定菌型。
魏氏梭菌最少产生12种毒素，它以希腊字母表示，即α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ和ν。它在各型间分布不同，但都是蛋白质，分子量大，具抗原性和致病性。正如前述，与分型有关的4种毒素是α、β、ε和ι。α毒素是A型菌的主要毒素，其他各型均产生，系卵磷脂酶，具致死、坏死和溶血活性。α毒素可利用其卵磷脂酶活性进行测定。
卵磷脂酶活性及脂酶活性，可在卵黄琼脂上测定。先制备卵黄液。用无菌手续取卵黄，以灭菌盐水配成50%悬液(卵黄与盐水等量在灭菌的、有玻璃珠的三角瓶摇匀)，此悬液如无菌可保存于冰箱随时取用。将肝汤琼脂溶化冷至60℃时按卵黄悬液1份加入到4份培养基的比例混匀(最终含卵黄10%)，倾注平板，凝固后接种细菌，厌气培养，24h观察结果一次，第3、5日再看一次结果。卵磷脂酶阳性者，菌落附近有一较不透明的圈；脂酶阳性者表面现虹彩似的闪光(斜射光看，或将平板闪动看)，像水中有油状。此法可用于其他细菌的卵磷脂酶、脂酶的测定。
β毒素具致死和坏死活性，可用小鼠测其致死作用。
ε毒素也具致死和坏死活性，但产生的是原毒素，毒性较弱注射小鼠多不致死，如经胰酶活化后(即以液体培养物上清4份加1%胰酶1份，放于37℃半小时后)，其毒力可增强50～100倍，再用小鼠测其致死性。
ι毒素与ε毒素相似，具致死和坏死活性，经胰酶活化后静脉注射小鼠测毒。
概括说，本菌有些特点，如：在组织抹片中现荚膜、不运动、生长快、双环溶血及牛奶暴烈发酵，据此，就可用过滤的液体培养物，与已知C型、D型的抗毒素在小鼠作中和试验。A、B、C、D四型抗毒素，可向兰州兽医研究所索购。
四、强直梭菌(Clostridium tetani)
亦称破伤风梭菌，曾名强直杆菌或破伤风杆菌，在自然界分布广，存在于土壤、河流、湖泊、空气及人和动物的粪便中，是人兽共患病病原菌。除人易感外，单蹄兽(马、驴、骡)非常易感，山羊、绵羊、猪、牛、鹿也易感，犬、猫发病者少，冷血动物和鸟类不易感。
破伤风即强直症，均系创伤感染或初生时脐带感染，细菌只在局部繁殖，产生极强烈的毒素而致病，症状特异，典型者临床可作诊断，一般不作微生物检验。
(一)样品采集 取感染处创伤材料及有症状的病畜血清。
(二)检验程序及方法 强直梭菌为专性厌氧菌，对厌氧要求严格，操作时应注意这点。作细菌培养时可将被检材料加热至80℃20min后，接种到厌气肝汤培养，然后到肝汤琼脂上分离单个菌落，鉴定。
1．形态特征 为细长杆菌，两端钝圆，几乎均单个存在，有时两个相连，偶有短链。厌氧下运动活泼，周身鞭毛，即使在组织抹片中也无荚膜。芽孢圆形，明显比菌体大，位于一端，似鼓锤状，是其特征，芽孢很少游离者(产芽孢梭菌多数是游离的芽孢)，革兰氏染色阳性。
2．培养特性 在液体培养基(如熟肉基)中生长后产生特有的臭味，在鲜血琼脂上3～4天的培养物，菌落为半透明，灰黄色，近圆形，表面有不规则的颗粒，直径2～5mm，边缘不整齐，有细丝卷毛状突起，呈“蜘蛛样”，菌落周围现β型溶血。正常的、运动活泼的强直梭菌，在琼脂面有时形成一薄层，难见好的单个菌落，可从薄层边缘分离，或用表面干燥些的琼脂，或加大琼脂浓度，也有不运动的变种。
3．生化特性 本菌一般不发酵糖类，产生靛基质，M．R．和V．P．阴性，硝酸盐肉汤中不产生亚硝酸盐，在石蕊牛奶中使石蕊还原。
4．毒素检查 强直梭菌产生两种外毒素，破伤风神经毒(即痉挛毒素)引起动物的强直症；另一为破伤风溶血毒素，能溶解红细胞。破伤风的毒素可用小鼠测定。将培养5日的液体培养物，离心取上清，与等量盐水混和，注射小鼠静脉，每鼠0．2ml；另取破伤风抗毒素与代盐水同样操作注射到另外的小鼠，如前者出现强直症而后者(有破伤风抗毒素的)不出现，即可确诊。同样，可以被检动物的血清代替培养物操作，当病畜血清中含一定量的破伤风毒素时，也会得到同样的结果。
五、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)
肉毒梭菌曾名肉毒杆菌，存在于土壤以及江、河、湖、海中，亦见于为土壤、为尘土所污染的蔬菜、谷物、食品、肉类等中，因本病死亡的野兔、牛、羊的尸体及其骨骼中亦可能有本菌的存在。
本菌产生强烈的外毒素，对小鼠的半数致死量只需要三千亿分之一克的提纯的毒素。因所产生的毒素而将肉毒梭菌分为A～G七个型，天然发病的动物有马、牛、绵羊、鸡等。人也发病。
表17-4 各型肉毒梭菌所致病的动物
(一)样品采集 过去认为肉毒中毒仅是食物中存在的肉毒梭菌毒素所引起，以后发现在某湖泊中生活过的家鸭、野鸭有死亡是由于湖底有机物丰富肉毒梭菌得以繁殖所致，随后又发现不论人和动物都有消化道感染或创伤感染而引起的病例。故采样时，除采取剩余的食物、饲料、水、胃内容物、可能为鸡采食到的蝇蛆(有蝇蛆带毒的报告)外，还应采取动物的创伤感染材料及死后动物的脏器和胃、肠内容物。
(二)检验程序和方法
1．被检材料中的毒素检查 检查毒素很重要，能确定毒素即可作疾病诊断。如为液体材料，可直接用滤纸或离心获得清亮液体；如不是液体，可加等量体积盐水加无菌玻璃渣研磨匀，置室温1～2h，再过滤或离心获得清亮液体，如再通过除菌滤器更好。以滤液0．1～0．3ml与等量盐水混合，静脉注射小鼠，另以A～F型多价肉毒梭菌血清(可从兰州生物制品研究所购得)代盐水，同样操作，注射到另外的小鼠，观察检查。若只注射被检液加盐水的小鼠发病(麻痹、呼吸困难)死亡，而注射被检液加A～F型混合血清的小鼠不发病，即可确定为肉毒梭菌毒素，再用分型的(A型的、B型的……)肉毒梭菌诊断血清与被检液注射到小鼠，以确定肉毒梭菌毒素的型。
2．细菌检查及其鉴定 被检材料的涂片检查(除非用标记抗体染色)无甚意义，要分离细菌，将被检材料接种到肉肝汤或熟肉基及肝汤琼脂平板划线，同时将被检材料加热至80℃20min同样操作。此菌是严格厌氧菌，特别是C型的，在厌气肉肝汤中加入新鲜肝块生长良好，产生强烈的臭味。琼脂平板上的菌落为不规则圆形，半透明，表面颗粒状，边缘不整齐、界限不明显、呈绒毛网状向边外扩散，常扩展成菌苔，特别是琼脂表面潮润时呈膜状生长，可将整个琼脂面覆盖。在血琼脂上呈β溶血。涂片检查为革兰氏阳性大杆菌，有时染色为阴性，单在，很少成短链。有芽孢，卵圆形，比菌体大，位于近端或亚中央。无荚膜，具周身鞭毛，故运动。细菌分纯后可作生化反应，由于型的不同，反应可不一致，即同型菌株亦可有差异，故肉毒梭菌的诊断，主要有赖于毒素中和试验。试验前要获得纯培养，将纯培养接种到厌气肝汤或熟肉基培养于30℃3日，取液体经灭菌滤器过滤，按前述二、(一)被检材料中的毒素检查操作，根据小鼠的发病死亡否，按表17-5判定。
表17-5 肉毒梭菌毒素型的测定
六、诺维氏梭菌(Clostridium novyi)
此菌曾称水肿梭菌(Cl．oedematiens)、水肿杆菌、第Ⅱ型恶性水肿杆菌等，但现均称为诺维氏梭菌，它广泛分布于自然界，如土壤、人畜(特别是草食动物)鲸鱼等的肠道中，并曾由正常羊肝中分离出。
本菌是人和很多动物的气性坏疽的病原，特别是马、牛、绵羊、猪和试验动物。依其所产生的毒素，有A、B、C、D四个型。现在已将D型恢复其原来的名称——溶血梭菌(Cl．haemolyticum)，并认为是另外的种，为了叙述方便，仍在此一併叙述。
A型菌引起绵羊的“大头病”、牛的恶性水肿、人的气性坏疽；B型菌引起绵羊的黑疫(又名传染性坏死性肝炎)及人、牛的气性坏疽；C型菌系从牛的骨髓炎病例中分得，其病原意义不清；溶血梭菌(即此节D型)引起杆菌性红血素尿，主要在牛，罕见于绵羊。
(一)样品采集 可采取感染的局部或脏器，厌氧条件下保存、寄送，尽快分离。
(二)检验程序和方法
1．涂片染色 组织涂片可见革兰氏阳性大杆菌，4～8μm×1．2～2μm，两端略圆，粗细一致，多为单个，有时成双或多个联成链状，芽孢卵圆，比菌体宽，位于菌体近端，无荚膜。
2．培养特性 是专性厌氧菌，对厌氧条件要求十分苛刻，接触空气易死亡，故如使用的培养基不合适(例如陈旧的培养基中吸收了O2)、厌氧培养方法或操作过程不适宜，则此菌不易生长，故从取材到以后的一切操作均应注意这一点。琼脂内如加入二硫苏糖醇(dithiothreitol)或硫乙醇酸钠(Sodium thioglycollate)达0．01～0．02%，将有利于包括诺维氏梭菌在内的厌氧菌的生长，本菌在厌气肉肝汤中生良好时，24h内产气旺盛，放出特殊臭气，迅即检查能运动，具周身鞭毛；在普通琼脂上不易生长，在鲜血平板上有时(琼脂面潮湿)呈弥漫性生长，琼脂面不潮湿时可出现近似圆形的菌落，半透明，略带灰白色。A、B型有狭窄的β溶血环，C型不溶血，D型(即溶血梭菌)有较大的溶血环。
3．生化特性 一般均发酵葡萄糖，产酸产气，不发酵甘露醇、乳糖、蔗糖和水杨素，发酵麦芽糖，对甘油的反应不定。D型只发酵葡萄糖，很少发酵麦芽糖，但产生吲哚，而A型、B型、C型均不产生。A、B、D型均产生卵磷脂酶，C型则否。只有A型能分解脂肪，余三型均不能，其余反应见梭菌特性比较表。
七、溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)
溶组织梭菌见于土壤，常存在于人和动物肠道，是人和马的气性坏疽的病原之一，且多与其他细菌混合感染。
(一)取材 取感染部分的组织器官。
(二)涂片检查 无甚意义，因为本菌无形态上特征，且还有其他菌混合感染。
(三)培养检查 本菌对厌气要求不很严格，厌气培养24～48h，形成圆的或不规则的菌落，表面粗糙，直径0．5～2mm，透明或半透明，灰白色，边缘不齐呈锯齿状或似乌贼，中心突起在血平板上呈β溶血。在熟肉基中24h即生长良好，可分解肉渣。取培养物染色，可见革兰氏阳性大杆菌，两端钝圆，大小约3～5μm×0．5μm，产生卵圆形芽孢，直径大于菌体，位于近端，有周身鞭毛，无荚膜。
(四)生化特性 本菌特点为不发酵糖类，不产生吲哚，对蛋白质有强烈的分解作用，消化肉块，液化明胶，消化牛奶。在石蕊牛奶中，使牛奶慢慢凝固并分解酪蛋白，还原石蕊，8～10天后牛奶变成透明琥珀色液体。产生硫化氢，对卵黄无反应。
(五)对实验动物的致病性 本菌常和其他厌氧的、需氧的细菌混合感染，故可利用实验动物以助分离，也可将获得的纯培养物接种到实验动物，以助于了解其致病力。本菌对家兔、豚鼠、小鼠、大鼠均有致病性，但株与株之间毒力差异大，注射新鲜培养物到豚鼠腿部肌肉，引起局部水肿，肌肉被分解液化，皮肤发生溃疡，腿部软组织脱落，暴露出骨骼，有的豚鼠腿关节断离。2～3日死亡。
八、产芽孢梭菌(Clostridium sporogenes)
产芽孢梭菌存在于土壤、人和动物的粪便，为无致病力的腐生菌，有时可由感染处与其他细菌(包括其他梭菌)共同分离出。
(一)菌形特征 为革兰氏阳性细长杆菌，长3～7μm，宽0．6～0．8μm、菌端钝圆，单个、成双或成短链，有时呈长丝状。产生卵圆形芽孢，它位于偏端或近端，芽孢比菌体宽。有周身鞭毛，无荚膜。
(二)培养特性 血琼脂表面的菌落溶血，透明，常呈树根状或变形虫样，中心略高，外观湿润，初为露滴状，为专性厌氧菌，普通培养基上即可生长。
(三)生化特性 强烈分解蛋白质，消化培养基中的脑和肉并变黑，分解糖类过多时，延迟或抑制蛋白分解作用，还消化凝固蛋白和血清，明胶液化变黑，产生硫化氢，不还原硝酸盐，吲哚反应不定。对糖类发酵的报告相互有出入。根据Bergey氏系统细菌学，发酵葡萄糖或发酵果糖、麦芽糖，产酸产气，不发酵乳糖、蔗糖、单奶糖、水杨素或菊糖。在牛乳中开始生长慢，48～72h牛奶凝成块状并逐渐液化，至酪蛋白完全分解，并产生大量气体和酸。
本菌在培养物中出现极为多量的芽孢，有时涂片中半数以上甚至绝大部分是芽孢，菌体比例少，是其突出点。
九、索氏梭菌(Clostridium sordellii)
索氏梭菌是Sordelli氏于1922年从人气性坏疽病例分离的，以后从牛的血尿症的肝、创伤、似气肿疽的患部以及羊的病例中分得，可与其他病原菌共存。一度曾认为此菌是双酶梭菌(Clostridium bifermentans)的产毒素的变种，但两者的抗原显然不同，索氏梭菌的繁殖体和芽孢都产生尿素酶，而双酶梭菌是尿素酶阴性。
表17-6 梭菌特性表
本菌在形态上与双酶梭菌相似，大小为3．5～4μm×1μm，芽孢位于中央或偏端，12～18h培养物革兰氏染色为强阳性，不运动或以周身鞭毛运动。菌落扩展成片，单个菌落为灰白色，半透明，芽孢形成后菌落不透明，菌落边缘不整齐，锯齿状或树根状，β溶血。
发酵葡萄糖、麦芽糖及甘油，不发酵甘露糖、山梨醇、水杨素、七叶甙、乳糖、蔗糖或甘露醇，尿素酶阳性，吲哚阳性，M．R．阳性，V．P．阴性，液化明胶或凝固的血清，部分消化凝固的卵蛋白并变黑，消化熟肉培养基中的肉渣并变黑，多数菌株产生卵磷脂酶，其作用能为A型魏氏梭菌的α抗毒素所中和。
有的菌株可产生毒素，其培养物上清液静脉或肌肉注射到天竺鼠能致死，皮内注射则产生紫褐色坏死。
为了以生化来协助区分兽医上重要的致病梭菌，下表供参考。
说明：肉毒梭菌有不同的型，即同型的生化反应亦有差异，如《梭菌特性表》最后两行所示，倒数第二行的是蛋白质分解型，其中包括B型、F型，倒数第一行的B型、F型是糖酵解型。由于此因，未将肉毒梭菌列于上表，其鉴定，主要依靠毒素中和试验。