超薄切片用的样品采集和固定

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第587页（950字）

在病毒学中超薄切片主要用于在电镜下观察感染细胞内的病毒形态和存在部位。超薄切片的厚度只有0．01～0．1μm，需用特殊的切片机才能制备，在一般实验室中不配备，因此本节仅叙述样品的采集和初步固定的方法。

一、组织样品的采集和固定

(一)固定液 最常用为2．5%(2～4%)的戊二醛溶液，配制方法如下。

0．1mol／L磷酸缓冲液(pH7．4) 90ml

25%戊二醛 10ml

配成后分装小瓶，每瓶约3ml，加塞密封，冰箱中贮存。

市售的戊二醛均为25%的水溶液，放置日久会氧化而影响固定效果。

(二)样品采集 样品必须从活体采集，自采集到固定应在2～3min内完成，最长不能超过5min。死畜的组织绝对不能应用，因为死后细胞内各种酶的活动导致细胞自溶，使细胞的精细结构遭受破坏。

(三)固定

1．左手握镊子夹住一块采取的组织，右手持剪，剪下半颗绿豆大的几小块组织，直接投入固定液中，洗去血液。

2．用尖头镊将组织小块从固定液中取出放在玻片上，以刀片修成小于1mm³的小粒，立即投入新固定液中。

3．2小时后即可递送给超薄切片室，用四氧化锇作进一步固定，也可在冰箱中贮存1～2月随时递送。

二、细胞培养样品的采集和固定

1．固定液 与组织培养固定液相同。

2．样品采集和固定 将细胞单层轻轻括下，或者用胰酶稍消化使其脱落，倾入尖底离心管中用2000r／min离心30min。弃去培养液，沿壁加入固定液2ml，2h后将细胞团块移入新固定液中，递送给超薄切片室，或暂贮于冰箱内。