疱疹病毒丙亚科
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第637页（4528字）
本亚科病毒的主要特征是都在淋巴母细胞中复制，一些种也能引起上皮样细胞和成纤维细胞的溶解性感染。病毒对B或T细胞有嗜性。在淋巴细胞中，感染常在细胞溶解前期中止，病毒呈持续感染，基因组表达极少。或者在溶解期中止，使细胞死亡但没有产生完整的病毒子。在淋巴样组织中常有潜伏病毒。
本群病毒的可能成员有马立克氏病疱疹病毒，火鸡疱疹病毒，恶性卡他病毒等。它们的宿主范围窄，实验性宿主常局限于它们的自然宿主的同一目内。
一、马立克氏病病毒(Marek’s disease Virus)
本病毒引起鸡以淋巴组织增生和肿瘤为特征的一种传染性肿瘤病。病毒常与细胞紧密结合，多存在于感染细胞核中。在一般病料中难于看到完整的病毒颗粒，只有在羽囊上皮中，才看到带囊膜的，直径为275～400nm的游离病毒。
病毒在病变细胞中，尤其在羽囊上皮细胞中引起包涵体形成，约半数细胞出现核内A型包涵体，也有的同时出现胞浆包涵体，但后者极少单独出现。
(一)样品采集 病鸡和外表正常的感染鸡都可分离到病毒，最好采取肿瘤细胞、肾细胞和全血或白细胞。维持细胞活力才能维持病毒活性，所以样品必须立即检查，否则应在液氮中保存，使细胞存活。感染母鸡所产的蛋一般不带毒。
(二)病毒分离
1．细胞培养 用病鸡肾作细胞培养直接分离病毒，是最敏感的方法。也可将样品接种于已长成单层的鸭成纤维细胞或鸡肾细胞培养中，24～48h后，吸除接种物，用Hanks液洗涤，加维持液培养2～3周。接种后5～14天出现由圆形和纺锤形，有折光性的细胞和多核细胞组成的特征性空斑，多核细胞中可检出A型核内包涵体。分离到的病毒可用感染细胞接种1日龄雏鸡，或用荧光抗体试验鉴定。细胞培养分离病毒，在敏感度上比雏鸡接种法低40～1000倍。
2．鸡胚接种 将可疑病鸡全血或白细胞，经卵黄囊或绒尿膜接种于鸡胚，分别在第4～6天或10～11天，在绒尿膜上产生痘斑。静脉接种10天龄鸡胚，5天后检查绒尿膜上的痘斑，以此定量测定本病毒，比绒尿膜接种法和细胞培养法更敏感准确。
3．动物试验 接种旧龄雏鸡是分离本病毒最敏感的方法。选择易感品系，如美国的7系和康乃尔S系，腹腔接种待检样品，同时设阳性和阴性对照鸡，严格隔离饲养，6～8周作下列检查。
①脏器和神经的肉眼和显微病变。通常接种后14～28天出现组织学病变，21～42天出现肉眼病变。
②采取试验鸡的肿瘤细胞和血液，接种细胞培养，分离病毒。
③用荧光抗体检验羽囊中的特异性抗原或病毒子。
④用琼脂扩散试验检测血清或血浆中的特异性抗体。上述检查应至少持续10周。
(三)血清学试验 琼脂扩散试验和间接荧光试验可检验感染鸡或康复鸡血清中的抗体。
1．琼脂扩散试验 用鸡胚或鸭胚成纤维细胞培养的马立克病毒作抗原，制备方法是当CPE联成一片时将细胞括下，稍加离心沉淀，将细胞悬浮于PBS中，使细胞浓度约为1×107／ml。将悬浮液冻融3次即可。也可用感染鸡的羽髓或羽囊皮肤匀浆作抗原。琼脂应含8%NaCl，设阳性和阴性对照孔，37℃中扩散24～72h后观察，在抗原孔与抗体抗之间可出现不止一条的沉淀线，其中有一条主要的，称A沉淀线，但实验室减毒株不出现这条沉淀线，因此本法可鉴别本病毒的强毒株和组织培养弱毒株。近年来发展了一种辐射状琼扩试验，即将阳性血清混于琼脂中，拔下待检鸡的小毛，连同羽囊插入琼脂，培养后观察周围的沉淀线。
2．间接荧光抗体试验 感染了本病毒的鸡肾单层细胞盖玻片，待出现空斑时，加稀释的待检鸡血清，经37℃作用，漂洗后，再用抗鸡γ球蛋白荧光抗体染色，荧光显微镜检查，感染细胞核和细胞浆出现荧光时，被检血清为阳性。试验中应同时设立阳性血清和阴性血清对照。
二、火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey)
本病毒生长过程中与宿主细胞紧密结合。它可能引起火鸡生殖力降低，少数强毒株可能引起火鸡产生肿瘤。它与马立克氏病病毒有共同的抗原成分，无毒株已用作预防马立克氏病的疫苗。
(一)样品采集 采取可疑感染火鸡或鸡的肿瘤，肾组织或全血。
(二)病毒分离
1．细胞培养 采用鸡胚成纤维细胞培养。一般于接种含毒样品24h后，开始出现少量散在、变圆、折光性增强的细胞，继而连结成葡萄串样，并发展成合胞体，组成灶状病变，病变中心出现空洞，形成空斑。感染细胞核和胞浆内可检出包涵体。分离的病毒也可在鸭胚成纤维细胞培养中传代。
2．鸡胚接种 含毒样品经卵黄囊、绒尿膜或尿囊腔接种鸡胚，6～7天后鸡胚部分死亡，绒尿膜可见痘斑。多数鸡胚肉眼可见肝、脾肿大，肝变绿色。
3．动物试验 接种火鸡和鸡可感染。
(三)血清学试验
1．荧光抗体技术 用本病毒的荧光抗体染色，可检出感染细胞的核和胞浆中的病毒抗原。用马立克氏病病毒的荧光抗体染色，只能看到核内抗原。
2．中和试验 用本病毒和马立克氏病病毒作交叉中和试验，只出现本病毒抗体中和马立克氏病病毒的单向中和现象。
三、牛恶性卡他热病毒(Malignant catarrhal fever virus)
本病毒十分脆弱，低温冷冻或冻干保存也只能存活几天。血液中的病毒与白细胞紧密结合。
病毒引起黄牛和水牛产生一种急性，高度致死性，称为恶性卡他热的传染病，牛之间不互相感染。牛只从带毒绵羊或带毒角马而受感染，故本病毒分绵羊型毒株和角马型毒株。
(一)样品采集 细胞培养样品最好采取病牛淋巴样组织。动物试验则大量采集患病高峰期的抗凝牛血液。从病死牛采集样品不应迟于死后1～2小时。在4℃中间与毒株能存活10～12天，样品贮存于-20℃或-70℃，短期内失去活力。但若将样品浸于含10%甘油和20%犊牛血清的营养液中贮存于-70℃，存活时间就要长得多。
(二)病毒分离
1．细胞培养 犊牛甲状腺和肾上腺细胞培养可分离和传代角马型毒株，但绵羊株不能。细胞培养技术如下。
(1)血液样品
①取10～20ml含0．5%EDTA的血样，2500～3000r／min离心20min。
②吸去血浆，吸出白细胞层装入离心管，加10～20ml生理盐水或PBS液混匀。
③2500r／min离心10min，取沉淀的血细胞，悬浮后接种原代犊牛甲状腺细胞管。
④转管培养18～24h后，用PBS液洗涤，去除红细胞和其他未附着的沉渣。每3天换一次营养液，持续培养18～20天，经常仔细检查。
⑤一般在培养3～14天或更长时间可见细胞病变，其特征是形成大合胞体。接种量小时，出现细胞病变很少，且不随培养时间而增加。有时可因成纤维细胞的增长而使部分或全部病变消除。
(2)淋巴样组织
①剪成直径约1～2mm的小块，用玻璃研磨器磨碎，加维持液配成10%悬浮液。接种时再稀释到10-2～103，以消除对细胞的毒性。
②按常规接种犊牛甲状腺细胞培养。
③由于病毒与细胞紧密结合，细胞培养继代必须用感染活细胞和甲状腺细胞按1∶3左右混合后培养。转管培养能提高病毒增殖率和细胞病变效应。以此法传7～20代，在细胞培养液中可获得有效数量的游离病毒。
2．动物试验 角马毒株经肠道易感染家兔，接种后9～60天出现症状，最后死亡，死亡家兔具有特征性病变，尤其表现于淋巴样组织。
(三)血清学试验 用常规病毒中和试验可检验康复牛血清特异性抗体。
四、兔疱疹病毒(Herpesvirus cuniculi)
天然情况下病毒仅在兔群中引起隐性感染。可用兔睾丸等细胞培养分离病毒。仅兔对病毒易感，各种途径接种均可使兔发生皮疹，偶而发生水疱。
五、棉尾兔疱疹病毒(Cottontail rabbit herpesVirus)
本病毒具有疱疹病毒的一般形态特征，但无明显的囊膜。引起美洲棕色棉尾兔的渐进性恶性淋巴瘤，感染兔终生带毒，其他动物和鸡胚不易感。
(一)样品采集 兔脱纤全血。
(二)病毒分离 一般用细胞培养。
取1∶10脱纤血0．5ml接种兔原代肾细胞培养，吸附2天后去掉接种物，换营养液，通常孵育10～15天后可产生疱疹病毒的典型细胞病变，连续继代和用高浓度病毒接种，可缩短到3～6天。最初出现局灶性细胞变形，1～2天后形成合胞体，5～7天细胞全部脱落。感染细胞可检出A型核内包涵体。
(三)血清学试验 中和试验可鉴定本病毒，区别兔疱疹病毒。阳性血清用美洲棕色棉尾兔或新西兰白兔制备。