常见毒物的检验

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第276页（7509字）

(一)肉品中氢氰酸和氰化物的测定方法氢氰酸和氰化物是剧烈的毒物。氢氰酸的有机衍生物是以氰甙的形式存在于玉米幼苗、高粱幼苗等植物内，家畜采食上述未经除毒处理的含氰甙植物后经酶的作用，分解生成氢氰酸而致中毒。

1．苦味酸试纸法。氰化物在酸性条件下，经温热生成的挥发性氢氰酸与碳酸钠作用生成氰化钠，氰化钠与苦味酸作用生成异性紫酸钠，呈玫瑰红或红棕色。

(1)试剂：

①碱性苦味酸试纸。将定性滤纸剪成长4－5厘米，宽0．5厘米，浸入1%苦味酸溶液中，3－5分钟后取出晾干。临用时以10%碳酸钠溶液湿润。

②10%酒石酸溶液。

(2)操作方法：

①称取绞碎的混合样品约10克置磨口锥形瓶中，加水约10毫升，充分振摇10－15分钟。

②加10%酒石酸溶液约5毫升(或约0．5克酒石酸结晶)使成酸性。立即于瓶口塞紧事先插有细玻管(管内插入一条临用前以10%碳酸钠溶液湿润的苦味酸试纸)的软木塞。

③在避光条件下放40一50℃水浴中15分钟，观察试纸颜色变化。

(3)判定标准：

①若样品中有少量氰化物，则试纸显橙红色。

②若样品中有较多量氰化物，则试纸呈玫瑰红色或红棕色。

2．氢氰酸及氰化物纸上快速反应。氢氰酸与氢氧化钠作用生成氰化钠，氰化钠再与硫酸亚铁作用生成亚铁氰化钠(或称黄血盐)，在酸性溶液中，遇高铁离子(三氯化铁)生成亚铁氰化铁(普鲁士蓝)的蓝色沉淀。此反应的灵敏度为0．1－10微克。

(1)试剂：定性滤纸、酒石酸、10%氢氰化钠溶液、硫酸亚铁。

硫酸亚铁-氢氧化钠试纸：取定性滤纸依次浸入新配的20%硫酸亚铁溶液和10%氢氧化钠溶液中，取出晾干，备用。

(2)操作方法：

①称取绞碎混匀的检样5－10克，置锥形瓶内，加少量水搅成粥状，加酒石酸结晶少许，使溶液成微酸性。

②立即在瓶口上盖一滤纸，用线或橡皮筋扎住。在滤纸中部滴加10%氢氧化钠溶液1－2滴，稍干后，以少许硫酸亚铁结晶碎末均匀覆盖其上。

③置水浴中加热至沸，持续5分钟后去火。

④最后向滤纸中部滴加浓盐酸1滴，观察显色反应。

本法亦可将制备好的硫酸亚铁-氢氧化钠试纸盖在瓶口上，缓缓加热锥形瓶，待沸后去火，取下滤纸，浸入稀盐酸中，即可观察反应。

(3)判定标准：若滤纸中心立即显蓝色，证明检样中有氰化物。

3．氢氰酸试纸法。

(1)试剂：

氢氰酸试纸：用20%醋酸溶液将联苯胺溶解成浓度为10%的溶液。临用时取上述溶液与5%硫酸铜溶液等量混合，将滤纸条浸泡混合液中，约15分钟后，取出晾干备用。

(2)操作方法：

①称取剪碎检样5－10克放研体中，加少许水研磨成稀粥状，移入锥形瓶中，置温水浴15分钟，促使检样中氰化物溶解，然后用滤纸过滤，滤液备用。

②取上述样品滤液滴加1－2滴于制备好的氢氰酸试纸上，立即观察有无颜色变化。

(3)判定标准：

①若试纸显蓝色，为阳性反应，证明检样中有氢氰酸或氰化物。

②若试纸呈原色，则为阴性反应，证明检样中不存在氢氰酸或氰化物。

(二)肉品中亚硝酸盐的测定方法

1．格氏试剂定性反应。

(1)试剂：

①对氨基苯磺酸溶液：取对氨基苯磺酸0．5克溶于12%醋酸溶液150毫升中(如溶液有颜色，临用时加入少量活性炭粉)，并加热至80℃以上，过滤。将滤液贮于棕色瓶中。

②盐酸α－萘胺溶液：称取盐酸α－萘胺0．25克，加水20毫升，煮沸溶解，过滤，加12%醋酸180毫升，贮存于4℃冰箱中。如溶液有颜色，可按上法进行脱色。

临用时取①和②溶液等量混合即为格氏试剂。

(2)操作方法：

①称取捣碎的样品5－10克，加水约30－50毫升，浸泡30分钟，过滤。如滤液有色，可加入少量活性炭脱色。

②取上述滤液1－2滴于白磁反应板上或小试管中，加格氏试剂2－3滴，观察溶液颜色。如放70－80℃水浴中数分钟，则反应更加明显。

(3)判定标准：如含亚硝酸盐，则溶液呈紫红色。

2．格氏固体试粉法。

(1)试剂：

格氏固体试粉配制：称取10克对氨基苯磺酸、1－2克盐酸α－萘胺、89克酒石酸(或草酸)置研钵中研磨，保存于棕色瓶中备用。

(2)操作方法：取上述样品滤液2毫升于小试管中，加入备用的固体试粉0．1－0．2克，振摇试管，立即观察反应。

(3)判定标准：如含亚硝酸盐，则溶液呈紫红色。

3．格氏试剂试纸法。

(1)试剂：

格氏试剂试纸：将滤纸浸入对氨基苯磺酸溶液和盐酸α－萘胺溶液(两者配制方法同格氏试剂定性反应)等量混合液中，取出晾干，放棕色瓶中备用。使用时如试纸显红色，须重新制备。

(2)操作方法：

取少量上述检样滤液于格氏试剂试纸上，观察纸上颜色变化。同时于试纸的另一处做空白对照试验。

(3)判定标准：

①若呈现红色或玫瑰色，为阳性反应。

②若呈原色或微黄色，为阴性反应。

(三)肉品中有机磷农药的测定方法

1．样品处理。检样中有机磷农药常用苯、丙酮、氯仿等有机溶剂在中性或弱酸性环境下提取。

(1)固体或液体样品。可直接用苯或氯仿浸提。浸提后，滤液自然挥干或55－60℃水浴上蒸发浓缩。

(2)油脂类样品。可用二甲基亚砜浸提。样品中加入有机溶液后，充分振摇5－10分钟，分出提取液。然后自然挥干或在55－60℃水浴上蒸发，所得残渣用适量无水乙醇溶解后备用。

(3)半固体样品。如内脏、胃内容物等。向检样中加入无水硫酸钠进行研磨，直至研成干沙状，然后移入具塞锥形瓶中，加入苯或氯仿浸提，经振摇提取数分钟后，将提取液经过盛有无水硫酸钠的玻璃漏斗滤入烧杯中，滤液于室温下挥干或55－60℃水浴上蒸发浓缩，所得浓缩液供检验用。

2．1605的检验——硝基酚反应。1605被碱水解后可生成黄色的对硝基酚钠盐。

(1)试剂：10%氢氧化钠溶液。

(2)操作方法：吸取提取液2毫升，加10%氢氧化钠溶液0．5毫升，观察反应。并同时做空白对照试验。本法灵敏度为1∶500000。

(3)判定标准：若检样中含1605，则溶液显黄色。如放水浴上加热，黄色更显着，加酸则黄色减退甚至消失，加碱则黄色复现。

3．1059的检验——亚硝基(酰)铁氰化钠反应。有机磷农药在碱性溶液中易水解生成硫化物，在亚硝基(酰)铁氰化钠生成紫红色络合物。

(1)试剂：10%氢氧化钠溶液，1%亚硝基(酰)铁、氰化钠溶液(临用时酰制)。

(2)操作方法：

①取提取的挥干物用水(或乙醇)约1－2毫升溶解于试管中，加10%氢氧化钠溶液0．5毫升，使呈强碱性，在沸水浴上加热水解5－10分钟，取出冷却。

②沿管壁滴加1%亚硝基(酰)铁氰化钠溶液1－2滴，立即观察两液接触面的颜色反应。

③同时做空白对照试验。

(3)判定标准：

①检样中凡含有1059、3911、1240、4049、三硫磷、乐果等有机磷农药，则溶液的接触面显红色或紫红色。

②如检样中存在不含硫的敌敌畏、敌百虫，则反应呈阴性。

4．敌百虫、敌敌畏的检验。敌百虫、敌敌畏在碱性溶液中水解产生的醛类物质(二氯乙醛)与间苯二酚反应生成红色化合物。本反应的灵敏度为1－5微克。

(1)试剂：乙醇，无水碳酸钠，5%氢氧化钠溶液，1%间苯二酚乙醇溶液。

间苯二酚固体试粉：称取2．5克间苯二酚和47．5克氯化钠，研成细末，混匀，贮子棕色瓶中备用。

(2)操作方法：

①试管法：取乙醇提取液1毫升，加无水碳酸钠0．1克，在50－60℃水浴中振摇溶解，趁热加间苯二酚固体试粉约0．1克，再振摇溶解，观察溶液的颜色变化。

②试纸法：取定性滤纸一小块，依次在滤纸上滴加5%氢氧化钠溶液1滴，1%间苯二酚乙醇溶液1滴，稍干后，滴加上法用的检液数滴，以微火加热并观察滤纸片颜色变化。

③白磁反应板法：取少许间苯二酚固体试粉于白磁反应板上，加少许无水碳酸钠，加水1滴，以细玻棒搅拌，使其湿润，然后滴加上述检液数滴，搅匀，观察反应。

(3)判定标准：若溶液(或滤纸片或反应板上)呈现桔红色或粉红色，则为阳性，表示检样液中含有敌百虫或敌敌畏。

(四)肉品中有机氯农药的测定方法

1．脱氯反应。有机氯与碱作用分解出HCl，HCl与碱生成金属氯化物，再与硝酸银作用，生成氯化银白色沉淀。

(1)试剂：乙醚、硝酸、无水碳酸钠、2%氢氧化钾乙醇溶液、1%硝酸银溶液。

(2)操作方法：取捣碎样品10克，加苯20毫升，振摇10分钟，过滤于干燥容器后加水5毫升，加浓硝酸1毫升，再加1%硝酸银溶液2滴，观察反应。

(3)判定标准：若含有机氯则生成自色沉淀，若无沉淀则为阴性。

2．刚果红试纸法。有机氯加热产生氯化氢，使红色刚果红试纸变蓝色。

(1)试剂：95%乙醇、乙醚、刚果红试纸。

刚果红试纸：溶解0．5克刚果红于100毫升10%乙醇溶液中，将滤纸条浸于其中，取出晾干备用。临用时用水润湿。

(2)操作方法：

①样品处理：检样用95%乙醇浸渍数小时，过滤；将滤液挥干，残渣加乙醚溶解，备用。

②测定：取乙醚提取液5毫升于试管中，挥发干乙醚后，加热试管壁将水分全部赶尽；将刚果红试纸条悬于管的中部，试纸上端用管塞固定。于酒精灯上加热试管底部，观察试纸条颜色变化。

(3)判定标准：如试纸条变蓝，则为阳性；若试纸颜色不变或呈淡紫色，则为阴性。

(五)肉品中重金属毒物的测定方法(金属试纸法)

1．试剂：10%盐酸、10%硫酸锌溶液、饱和硫化钠溶液。

金属试纸条的制备：吸取饱和硫化钠溶液缓缓滴加于10%硫酸锌溶液中，滴至溶液中不再生成白色沉淀为止。过滤，用水将沉淀洗涤3－4次后，加水配成10%的混悬液。将滤纸条浸泡混悬液内，数分钟后取出阴干备用。

2．操作方法：

(1)取检样5－10克剪碎，置研钵中加少许水研磨成稀粥状。移入锥形瓶中，放水浴中加热15分钟并时时搅拌，过滤。然后向滤液中加适量盐酸(一般10毫升滤液加1．5毫升浓盐酸)使成酸性，供检验用。

(2)检验时，先滴加10%盐酸1－2滴于金属试纸条上，然后迅速滴加检样液1－2滴，仔细观察和分辨试纸条上被样液浸润处的颜色变化，根据其变色范围，再查表3－5，判断检样中是否含有砷、汞等重金属毒物。

3．判定标准：见表3－5。

表3－5 重金属毒物在金属试纸上变色范围

(六)肉品中杀鼠药的测定方法

1．敌鼠及其钠盐的检验——三氯化铁反应。

(1)试剂：无水乙醇、1%三氯化铁溶液。

(2)操作方法：

①称取剪碎样品20克，加无水乙醇100毫升，置约70℃水浴中浸提15分钟，过滤，滤液置水浴上浓缩，即得残渣，备用。

②取残渣浓缩液2－3滴于试管中(必要时加少许无水乙醇溶解)，滴加1%三氯化铁溶液1滴，立即观察颜色变化。同时做敌鼠或其钠盐的阴性和阳性对照试验。

此反应亦可在白磁反应板上或滤纸上进行。

(3)判定标准：若溶液中呈现红色沉淀，证明检样中含有敌鼠或其钠盐。

2．磷化锌的检验——硝酸银试纸法。磷化锌在酸性环境下生成的磷化氢，可与硝酸银作用呈现黑色。

(1)试剂：

①10%盐酸。

②醋酸铅棉花。取脱脂棉于10%醋酸铅溶液中浸湿，晾干备用。

③硝酸银试纸。将滤纸浸入1%硝酸银溶液中数分钟，取出晾干，备用。

(2)操作方法：

①取检样约10克，捣碎，用水调成粥状，移入磨口锥形瓶中。

②加10%盐酸5毫升使呈明显酸性，立即用装有玻管(管下充填醋酸铅棉花，用以吸取硫化氢，管上端装有硝酸银试纸条)的软木塞塞紧瓶口。

③在暗光下置50℃水浴中加热30分钟后，取出观察。此反应也可用溴化汞(或氯化汞)代替硝酸银，但滤纸条呈黄色。

(3)判定标准：若检样有磷化物存在，硝酸银试纸条显黑色。反之，则试纸条不变色。